Indledning
Luciferase reporter gen Assay Kits, som et uundværligt kerneværktøj i lægemiddeludvikling, spiller en afgørende rolle i nøgleprocesser såsom high-throughput screening, effektivitetsevaluering og målvalidering på grund af deres evne til at overvåge genekspression og signaltransduktion i realtid. Anvendelsen af denne teknologi har væsentligt forbedret effektiviteten af lægemiddelscreening og -evaluering, hvilket har fremskyndet opdagelsen og udviklingen af nye lægemidler.
Luciferase Reporter-gendetektionsprincip
Luciferase-reportergendetektionsteknologi muliggør kvantitativ analyse af ildflue-luciferaseaktivitet ved at katalysere oxidationen af luciferin til oxyluciferin og generere bioluminescens. Denne teknologi har betydelig anvendelsesværdi inden for miRNA-målgenvalidering og regulering af promotortransskriptionel aktivitet. Ved at indsætte regulatoriske elementer af målgenet opstrøms og nedstrøms for luciferasegenet for at konstruere et luciferasereporterplasmid, kan celler transficeres og udsættes for tilsvarende stimulering eller behandling. Efterfølgende, ved at lysere celler og måle luciferaseaktivitet, kan aktivitetsændringerne af regulatoriske elementer under forskellige stimuleringsbetingelser vurderes, og derved opnå en dybere forståelse af genets regulatoriske mekanismer. udtryk.
Forskellene mellem enkelt og dobbelt luciferase detektionsapplikationer
Reportergen-assays er primært opdelt i enkelt-luciferase-reporter-gen-assays og dobbelt-luciferase-reporter-gen-assays. Hvordan kan du i specifikke applikationer afgøre, om eksperimentet bruger et enkelt-luciferase- eller dobbelt-luciferase-detektionssystem? Lad os tage et kig på forskellene.
Enkelt Luciferase Reporter Assay System
Antal reportergener: Et enkelt ildflue-luciferase-reportergen;
Transfektionstype: Et enkelt reportergenplasmid, efter transfektion, lægemiddelselektion anvendes til at konstruere en stabil reportergencellelinje, der udtrykker luciferase;
Detektionsproces: Kun ildflue-luciferasesignalet skal detekteres, enkel betjening, kort detektionsperiode, velegnet til lægemiddelscreening med høj gennemstrømning;
Applikationsscenarieanalyse: Det er sædvanligvis gennem konstruktionen af en stabil overudtrykkende monoklonal cellelinje, da ekspressionsniveauet af disse cellelinjer er relativt stabilt og ensartet uden indflydelse af eksperimentelle variationer på grund af transfektionseffektivitet og cellelevedygtighed. Betjeningen er enkel, og da kun ildfluens luciferasesignal detekteres, er dataanalyse mere praktisk. Sammen med fordelene ved kort detektionstid er det særligt velegnet til high-throughput lægemiddelscreening og opfylder behovene for prøvedetektion i stor skala.
Dual-Luciferase Reporter-gendetektionssystem
Rapporteret genmængde: Dobbelte reportergener af ildflue-luciferase og Renilla-luciferase;
Transfektionstype: Co-transfektion af to reportergenplasmider, hovedsageligt gennem forbigående transfektion;
Detektionsproces: Det er nødvendigt først at detektere ildfluesignalet og derefter Renilla-signalet, og forholdet mellem de to (Firefly/Renilla) bruges til den endelige databeregning;
Applikationsscenarieanalyse: Det er generelt gennem forbigående transfektion, med co-transfektion af et plasmid indeholdende Renilla luciferasegenet som en intern reference, hvilket giver et benchmark for eksperimentet, og derved reducerer interferensen af eksterne faktorer såsom cellelevedygtighed og transfektionseffektivitet. Gennem forholdsberegning er det muligt at korrigere for variationer i celleantal, transfektionseffektivitet og celleaktivitet, hvilket forbedrer nøjagtigheden af eksperimentelle resultater. Det er et vigtigt værktøj inden for genekspressionsregulering, signaltransduktionsveje og lægemiddelscreening.
produktserie
Yeasen Luciferase Reporter Gene Detection produktserie giver en bekvem og effektiv kvantitativ detektionsløsning. Enkeltkomponent-designet forenkler brugsprocessen, og den perfekte kombination af høj følsomhed med en super lang signalhalveringstid på 5 timer opfylder behovene for detektion af lægemiddelscreening i stor skala. Vi tilbyder tre produkter: Bio-One Step, Steady-One Step og Bright-One Step, for at tilpasse sig forskellige følsomheds- og stabilitetskrav.
| produktnavn | Bio-One Step | Steady-One Step | Bright-One Step |
| Produktkode | |||
| Applikationsscenarier og egenskaber | Dette sæt skaber en relativ balance mellem signalintensitet og stabilitet. Den opretholder en relativt høj signalintensitet, samtidig med at den holder signalintensiteten relativt stabil over en vis periode. | Halveringstiden kan vare i mere end 5 timer. Især indenfor de første 2 timer er ændringerne i luminescensværdien minimale. Den er velegnet til ultrahøj gennemstrømning eller 384-brønds pladeanalyser. | Høj følsomhed og høj signalintensitet. Velegnet til eksperimenter, der kræver høj følsomhed. |
| Signal Half-Life | 60 min | 5 timer | 30 min |
| Operationelle egenskaber | Et trin | Et trin | Et trin |
Produktfordele
Lang signalhalveringstid: Signalets halveringstid kan nå op til 5 timer, hvilket opfylder behovene for high-throughput eksperimenter og undgår signalforskelle forårsaget af tidsforskellen mellem den første og sidste brønd på grund af et stort antal prøver, hvilket sikrer mere stabile og pålidelige resultater.
Stærkt fluorescenssignal: Signalværdien kan nå op på 8 størrelsesordener, hvilket giver et stort detektionsvindue og stærk dataunderstøttelse til tidlig lægemiddelscreening og effektevaluering.
Nem betjening: Et-trins betjening undgår komplicerede eksperimentelle procedurer. Du skal blot tilføje detektionsreagenset og vente i 5 minutter, før du starter maskinen til detektion.
Flere valg: I henhold til forskellige anvendelsesscenarier er der 3 forskellige produkter tilgængelige, som kan vælges ud fra de eksperimentelle krav til signalværdi og signalstabilitet.
Produktdata
01 Sammenligning af ydeevne for Yeasen Anderledes reporter-gen Analysesæt
Verifikation af tre typer analysesæt blev udført på cellelinjer, der stabilt udtrykker ildflueluciferase, og resultaterne viste, at Bright-One Step-produktet har højere signalværdier; Steady-One Step-produktet har en længere signalhalveringstid og mere stabile signaler; Bio-One Step-produktet har ikke kun høje signalværdier, men bevarer også en længere signalhalveringstid.
Figur 1. Sammenligning af ydeevne for forskellige Yeasen Reporter-genanalysesæt
02 Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter-gendetektionsreagenssammenligning med konkurrerende produkter
Når man bruger Yeasen Bio-One Step, konkurrent P og konkurrent V på en cellelinje, der stabilt overudtrykker ildflue-luciferase, viser resultaterne, at signalværdien og signalhalveringstiden for Yeasen Bio-One Step i det væsentlige er i overensstemmelse med konkurrent P, og signalhalveringstiden er bedre end konkurrent V.
Figur 2. Sammenligning af Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter-gendetektionsreagens med konkurrenter
03 Yeasen Bio-Et-trins Luciferase Reporter-gendetektionsreagens fryse-tø stabilitetstest
Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter-gendetektionsreagens har gennemgået gentagne fryse-tø-eksperimenter, og resultaterne viser, at selv efter 5 fryse-tø-cyklusser forbliver produktets ydeevne stabil uden væsentlige ændringer.
Figur 3.Gentagen fryse-tø-test af Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter-gendetektionsreagens
Operationel procedure
01 Celletransfektion
Tilsæt reagenset direkte til cellesuspensionen, pipetter derefter op og ned 5 gange for at sikre grundig blanding, vent i 5 minutter for at tillade fuldstændig cellelyse.
02 Prøveindlæsning
Pipetter 100 μL af blandingen (detektionsreagens + cellekulturmedium) i hver brønd på detektionspladen.
03 Fluorescensdetektion
Indstil parametrene på pladelæseren. Placer detekteringspladen i pladelæseren, vibrer den i et par sekunder, og fortsæt derefter med detekteringen.
Produktliste
| Produktkategori
| Produktnavn | Produktkode | Produktspecifikationer |
| Luciferase Reporter Gene Assay Kit | 11411ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | |
| 11413ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| 11412ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| Dual-Luciferase Reporter Gen Assay Kit
| 11402ES60/80 | 100T/1000T | |
| 11405ES60/80 | 100T/1000T |