Oversigt
Coelenterazin er et naturligt fluorescein, der er rigeligt i naturen og er lysenergi-oplagringsmolekylet for de fleste marine selvlysende organismer (mere end 75%). Coelenterazin kan bruges som et substrat for mange luciferase-enzymer, såsom havnyre-luciferase (Rluc), Gaussia-udskilt luciferase (Gluc) og fotoproteiner, herunder aequorin og Obelia. I modsætning til ildflue-luciferin/luciferase-systemet, kræver Coelenterazin/luciferase-systemet ikke adenosintrifosfat (ATP), hvilket gør det lettere at studere biofluorescens in vivo. Derfor er Coelenterazin almindeligvis brugt som et luminescerende substrat til fluorescensassays baseret reportergen assays og levende dyr assays.
Den vigtigste kommercielle Coelenterazine, der i øjeblikket anvendes, er Coelenterazin-native. Der er også mange coelenterazinderivater såsom Coelenterazin h, Coelenterazin 400a, Coelenterazin cp, Coelenterazin f, Coelenterazin hcp, Coelenterazin n lig syntetiseres. Teoretisk set kan disse coelenteriner bruges i de samme eksperimenter, men på grund af deres forskelle i lysbølgelængde, cellemembranpermeabilitet og lyskvanteeffektivitet viser de forskellige eksperimentelle effekter i samme applikation.
Arter af Coelenterazin
Også kendt som Coelenterazine fri syre. Det er substratet for mange luciferase-enzymer såsom Renilla luciferase (Rluc) og Gaussia luciferase (Gluc), og er også co-faktoren af selvlysende vandmændsprotein.
Applikationsscenarier: Påvisning af calciumionkoncentration i levende celler, genrapportanalyse, BRET (Bioluminescent resonance Energy transfer) undersøgelse, ELISA, HTS og kemiluminescenspåvisning af ROS-niveauer i væv eller celler mv.
Det er substratet for mange luciferase-enzymer såsom Renilla luciferase (Rluc) og Gaussia luciferase (Gluc), og er også co-faktoren af selvlysende vandmændsprotein.
Ansøgningsscenarie: Lysstyrken er mere end 10 gange højere end Coelenterazine Native, som er velegnet til reportergenanalyse og påvisning af calciumionkoncentration i levende celler.
Coelenterazin hcp
Det er et af derivaterne af Coelenterazine Native. Fluorescensintensiteten af Coelenterazin hcp-Aequorin kompleks er 190 gange højere end Coelenterazin Native kompleks, med højt kvanteudbytte og hurtig Ca.2+ reaktionshastighed, som er meget velegnet til påvisning af calciumionniveauer.
Ansøgningsscenarie: Velegnet til påvisning af calciumionniveau.
Også kendt som DeepBlue CTM, det er et af derivaterne af Coelenterazine Native. Det er et godt substrat for Renilla luciferase (Rluc), og dets emissionsbølgelængde er omkring 400 nm, som har ringe interferens med signalet fra GFP-receptorprotein og ikke kan oxideres af Gaussia-udskilt luciferase (Gluc).
Ansøgningsscenarie: Det er det foretrukne Coelenterazin-substrat til BRET-forskning (Bioluminescent Resonance Energy Transfer).
Det er det foretrukne substrat for aequorin, og den eneste strukturelle forskel fra Coelenterazine Native er, at hydroxylgruppen på dens R-1-phenolgruppe er erstattet med fluor (F).Sammenlignet med det samlede antal fotoner produceret af Coelenterazine Native-Apoaequorin-komplekset, producerer dette kompleks kun 80% af fotonenergien. Fordelen er, at det tager meget kort tid at generere aequorin-komplekset. Når det kommer i kontakt med Ca2+, det udsender lys hurtigt og i højt udbytte med en produktionsintensitet på 20 gange den af Coelenterazine Native. Derudover har den god cellepermeabilitet.
Ansøgningsscenarie: Når ekstremt højt Ca2+ detektionsfølsomhed er påkrævet for at studere vandmænds proteinregenereringsforsøg, brug af substrater anbefales.
Coelenterazin cp
Det er et derivat af Coelenterazine Native. Fotoproteinkomplekset dannet med Apoaequorin-protein er 15 gange mere lysende end Coelenterazine Native og har en hurtigere Ca2+ reaktionshastighed.
Ansøgningsscenarie: Det kan bruges til high-throughput screening af G-protein-koblede receptorer (GPCR'er) lægemidler.
Coelenterazin n
Dens fluorescensintensitet er svagere i alle Coelenterazin-derivater, og reaktionshastigheden til Ca.2+ er betydeligt lavere end Coelenterazine Native.
Coelenterazin e
Et derivat af Coelenterazine Native, der strukturelt er en ethylgruppe mere end Coelenterazine Native. Som et substrat for Renilla luciferase er dets fluorescensintensitet 137 % af Coelenterazine Native. Coelenterazine e har en høj in vitro-reaktivitet af selvlysende vandmændsprotein og dobbelte emissionstoppe (405 & 465), hvilket muliggør bestemmelse af Ca2+ koncentration i pCa5-7 området ved forholdet mellem dobbelte bølgelængder. Denne metode er uafhængig af Coelenterazin-koncentrationen, hvilket forbedrer detektionsnøjagtigheden. Fordi cellepermeabiliteten af dette derivat er dårlig, har det ikke denne fordel til intracellulære relaterede eksperimenter.
Ansøgningsscenarie: Meget anvendeligt underlag til ca2+ lav følsomhedsdetektion.
Coelenterazin 2-methyl
Det er en kraftfuld cellulær antioxidant. Det kan effektivt virke på intracellulære reaktive oxygenarter, såsom singlet oxygen og superoxidanioner, og oxidativt stress er et mellemled i processen med apoptose. Derudover har forbindelsen karakteristika af ikke-toksicitet og membranpermeabilitet, så den kan bruges til at studere apoptose.
Produktanvendelse:
1) Som et vigtigt værktøj til at studere apoptose;
2) Det kan også bruges til kemiluminescens til at detektere superoxidanion- og peroxynitritanionniveauer.
| Produktnavn | Molekylvægt | Molekylær formel | Em (nm) | RLC* | Relativ intensitet | Halvstigningstid (ms)** |
| 423.46 |
| 466 | 1.00 | 1 | 6-30 | |
| 407,48 |
| 466 | 0,75 | 16 | 6-30 | |
| Coelenterazin hcp | 399,48 |
| 445 | 0,65 | 500 | 2-5 |
| Coelenterazin cp | 415,48 |
| 442 | 0,63 | 28 | 2-5 |
| 425,46 |
| 472 | 0,80 | 20 | 6-30 | |
| Coelenterazin n | 457,52 |
| 468 | 0,25 | 0,15 | 6-30 |
| Coelenterazin e | 449,5 |
| 405 og 465 | 0,5 | 4 | 0,15-0.3 |
| 2-methyl Coelenterazin | 331,37 |
| / | / | / | / |
| 391,48 |
| 400 | / | / | / |
Produktinformation
| Produktnavn | Katalognummer | Specifikationer |
| 40901ES01/02/03/08 | 100mg/500mg/1g/5g | |
| 40902ES01/02/03/09 | 100mg/500mg/1g/5g | |
| 40903ES01/02/03 | 100mg/500mg/1g | |
| 40904ES02/03/08 | 1×500 μg/2×500 μg/5mg | |
| 40905ES02/03 | 1×500 μg/2×500 μg | |
| 40906ES02/03/08 | 1×500 μg/2×500 μg/5mg | |
| 40908ES02/03 | 1×500 μg/2×500 μg |
Udgivet litteratur fra brugere (ufuldstændig statistik)
- Xie J, Zheng H, Chen S, Shi X, Mao W, Wang F. Rationelt design af en aktivérbar reporter til kvantitativ billeddannelse af RNA-afvigende splejsning in vivo. Mol Ther Methods Clin Dev. 2020;17:904-911. Udgivet 2020 18. april.
- Lin GY, Lin L, Cai XQ, et al. High-throughput screeningskampagne identificerer en lille molekyleagonist af relaxinfamiliens peptidreceptor 4 [publiceret online forud for tryk, 31. marts 2020]. Acta Pharmacol Sin. 2020;10.1038/s41401-020-0390-x.
- Shao L, Chen Y, Zhang S, Zhang Z, Cao Y, Yang D, Wang MW. Modulerende virkninger af RAMP'er på signalprofiler af glucagonreceptorfamilien, Acta Pharmaceutica Sinica B.
- Haifeng Zheng, Si Chen, Xinan Wang, Jinrong Xie, Jie Tian og Fu Wang. Intron Retained Bioluminescence Reporter for real-time imaging af præ-mRNA-splejsning i levende individer.Canal. Chem. 2019, 91, 12392−12398
- Peiyu Xu, Sijie Huang, Chunyou Mao, ..., Xi Cheng, Yan Zhang, H. Eric Xu. Strukturer af de humane dopamin D3-receptor-Gi-komplekser.2021, Molecular Cell 81, 1147-1159
- Moxuan Ji, Xinan Wang, Haifeng Zheng, Wenjie Mao, Xiaorui Shi, Si Chen, Chu Tang og Fu Wang Ci. En udskilt reporter for blodovervågning af pyroptotisk celledød. Anal. Chem.
- F Hu, Y Zhang, Q Liu, Z Wang. PurA letter Edwardsiella piscicida at undslippe NF-KB-signalaktivering.Fish & Shellfish Immunology, 2022 - Elsevier
- Haifeng Zheng, Xinan Wang, Si Chen, Xiaorui Shi, Jinrong Xie, Wenjie Mao, Jie Tian og Fu Wang. Real-time funktionel bioimaging af neuron-specifik mikroRNA dynamik under neuronal differentiering ved hjælp af en dobbelt luciferase reporter. ACS Chem. Neurosci.DOI: 10.1021/acschemneuro.8b00614