Ultra-ren UCF.ME ™ termostabel RNase H: Præcis skæring til mere effektive eksperimenter!

Ideel til rRNA fjernelse og mRNA-afdækning effektivitetsdetektering!

Termostabil RNase H, med sin exceptionelle varmebestandighed, overgår almindelig RNase H i både specificitet og effektivitet!

Introduktion til RNase H

E. coli RNase H (E. coli Ribonuclease H) er et enzym, der specifikt nedbryder RNA-komponenten i RNA-DNA-hybridstrenge. Det spiller en vital rolle i processer såsom DNA-replikation, reparation og transkription ved at spalte RNA-strengen for at opretholde integriteten og stabiliteten af ​​DNA-skabelonen. Dette gør det meget brugt i molekylærbiologiske eksperimenter, herunder cDNA-syntese, rRNA-fjernelse og RNA-interferensundersøgelser. E. coli RNase H har dog nogle begrænsninger:

• Det kan forårsage uspecifik spaltning af enkeltstrenget RNA eller DNA, hvilket reducerer nøjagtigheden af ​​eksperimentelle resultater.
• Dens dårlige termiske stabilitet forhindrer den i at opretholde aktivitet ved høje temperaturer, hvilket gør den uegnet til eksperimenter som højtemperatur revers transkription eller PCR, der kræver forhøjede temperaturer.

Disse mangler har drevet forskere til at udvikle termostabil RNase H for at udvide dens anvendelser og forbedre eksperimentel effektivitet.

Figur 1: RNase H-mekanisme

Termostabil RNase H fra Thermus thermophilus

Termostabil RNase H, afledt af Thermus thermophilus, er en homolog af E. coli RNase H og deler lignende ribonukleasefunktioner. Den identificerer præcist og spalter effektivt phosphodiester-bindingerne af RNA-strengen i RNA:DNA-hybrider, mens den bevarer DNA-strengens integritet. En dybtgående strukturel analyse afslører, at selvom dens overordnede stabilitetsfordeling ligner den for E. coli RNase H, udviser T. thermophilus RNase H betydelige forbedringer i både overordnet stabilitet og lokal reststabilitet.

Med en optimal aktivitetstemperatur over 65°C leverer termostabil RNase H øget specificitet og effektivitet ved højere reaktionstemperaturer, hvilket minimerer uspecifik spaltning. Denne egenskab frigør sit enorme potentiale i molekylærbiologiske eksperimenter, herunder:

• rRNA fjernelse
• Detektion af mRNA capping rate
• Fjernelse af mRNA poly(A) hybridiseret til poly(dT)
• Fjernelse af mRNA under cDNA anden-streng syntese
• Forbedret amplifikationseffektivitet i højtemperatur revers transkription, isotermisk amplifikation og PCR eksperimenter

Figur 2: Tredimensionel struktursammenligning af termostabil RNase H og E. coli RNase H ^[1]

UCF.ME™Termostabil RNase H (Cat14545)

Termostabil RNase H bruges ofte i patogendetektionseksperimenter, såsom rRNA-fjernelse i metagenomisk sekventering (mNGS) og patogenmålrettet sekventering (tNGS). Resterende værts- eller baggrundsbakterienukleinsyrer i enzymet kan i væsentlig grad kompromittere detektionsnøjagtigheden. For at løse dette, Yeasen Biotech introducerer UCF.ME™ Termostabil RNase H (Cat14545), udviklet ved hjælp af dets proprietære UCF.ME™ ultra-ren procesteknologi. Produceret på UCF.ME™ ultra-ren molekylær enzymfacilitet, dette produkt gennemgår streng kvalitetskontrol - fra materialevalg og miljøstyring til procesoptimering og testning - hvilket sikrer minimalt bakterielt gDNA og nukleaserester i baggrunden.Dette garanterer nøjagtige, pålidelige og reproducerbare eksperimentelle resultater.

Produktfordele:

• Høj aktivitet og fremragende batch-til-batch-konsistens
• Ekstremt lav værts-gDNA-rest: <0,02 kopier/U
• Ingen exonuklease-, endonuklease- eller RNase-rester
• Fremragende stabilitet: Intet signifikant tab af enzymaktivitet efter 32 dage ved 4°C, 16 dage ved 25°C eller 7 dage ved 37°C

Performance Showcase af UCF.ME™ Termostabil RNase H (Cat14545)

1. Høj aktivitet og batchkonsistens

Tre partier af UCF.ME™ Termostabil RNase H blev inkuberet med RNA:DNA-substrater, og båndændringer blev analyseret via agarosegelelektroforese. Resultater viser, at kun 0,05 U af dette enzym effektivt spalter RNA'et i 20 pmol RNA:DNA-substrater med fremragende batch-til-batch-konsistens, hvilket fremhæver dets stabilitet og pålidelighed.

Figur 3: Aktivitetsdetektionsresultater af UCF.ME™ Termostabil RNase H

Bemærk: Reaktionsbetingelser: 50°C i 20 minutter; RNA:DNA-substrat – 20 pmol

2. Lav værts-gDNA-rest: <0,02 kopier/U

Værts (E. coli) gDNA-resttest på tværs af flere batches viser, at alle tre batches af UCF.ME™ Termostabil RNase H har restniveauer et godt stykke under 0,02 kopier/U, hvilket sikrer høj renhed og eksperimentel pålidelighed.

Figur 4: Værts gDNA-restresultater af UCF.ME™ Termostabil RNase H

3. Ingen exonuklease-, endonuklease- eller RNase-rester

25 U af UCF.ME ™ Termostabil RNase H blev inkuberet med nukleinsyresubstrater, og båndændringer blev vurderet ved agarosegelelektroforese. Ingen exonuklease-, endonuklease- eller RNase-rester blev påvist i nogen af ​​de tre batches, hvilket giver stærk sikkerhed for resultatnøjagtighed og pålidelighed.

Figur 5: Detektionsresultater af exonuklease-, endonuklease- og RNase-rester i UCF.ME™ Termostabil RNase H

4. Fremragende stabilitet

UCF.ME™ Termostabil RNase H blev udsat for stabilitetstest: 32 dage ved 4°C, 16 dage ved 25°C og 7 dage ved 37°C. Enzymaktivitetsmålinger viste ingen signifikant nedgang, hvilket beviser dets exceptionelle stabilitet over et bredt temperaturområde og dets egnethed til langtidsopbevaring og forskellige eksperimentelle forhold.

Figur 6: Accelererede stabilitetsresultater af UCF.ME™ Termostabil RNase H

Anbefalede relaterede produkter

Kilde	Produktnavn	Kat No.
T. thermophilus	UCF.ME™ Termostabil RNase H	14545ES
E.coli	RNase H	12906ES

Referencer

1. Hollien J, Marqusee S. Strukturel fordeling af stabilitet i et termofilt enzym [J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1999, 96(24): 13674-13678.

2. Wolf EJ, Dai N, Chan SH. Selektiv karakterisering af mRNA 5'End-Capping ved DNA-probe-dirigeret berigelse med stedspecifikke endoribonukleaser [J]. [2025-03-03].

3. Gu H, Sun YH, Li XZ. Nye rRNA-depleteringsmetoder til total RNA-sekventering og ribosomprofilering udviklet til fuglearter [J]. Poultry Science, 2021, 100(7): 101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.