Molekylær diagnostisk teknologi adskiller sig fra forskellige detektionsmetoder på grund af dens exceptionelle sensitivitet og specificitet. Konventionelle flydende diagnostiske reagenser lider imidlertid af ulemper såsom høje transportomkostninger og en begrænset holdbarhed, hvilket begrænser deres anvendelighed. Som svar på skiftende markedsbehov og teknologiske fremskridt er der opstået frysetørrede molekylære diagnostiske testreagenser. Frysetørrede produkter giver flere fordele i forhold til traditionelle flydende testreagenser, herunder:
- Stabil ved stuetemperatur - den tredimensionelle struktur er fast, hvilket kan sikre stabiliteten af enzymet og reaktionssystemet ved stuetemperatur. Intet behov for kølekædetransport og opbevaring i køleskabe eller kølerum, hvilket kan forlænge produkternes holdbarhed.
- Nem at bruge- Intet behov for gentagen frysning og optøning, væskedispensering osv.
- Reducerede omkostninger- Intet behov for kølekædetransport og frossen opbevaring, hvilket effektivt reducerer transport- og opbevaringsomkostninger.
- Høj præcision- Én frysetørret mikrokerne bruges i én reaktion for at reducere sammensætningsfejlen under reagensfremstilling, forkorte driftstiden, forhindre tab af biologisk aktivitet under flydende fremstilling og fundamentalt forbedre præcisionen.
- Fleksibel brug- Ikke begrænset af prøvenummer, en prøve kan også indlæses.
Konventionelle molekylære enzymer eller forblandinger inkorporerer ofte høje koncentrationer af glycerin som et kryobeskyttende middel og stabilisator. Tilstedeværelsen af glycerin i reagenset kan imidlertid forstyrre vandets strukturelle integritet, hvilket gør det vanskeligt at fjerne vand effektivt. Dette har igen en skadelig indvirkning på strukturen og stabiliteten af det frysetørrede produkt. Når du vælger frysetørring, er det derfor tilrådeligt at vælge glycerolfrie reagenser.
Ydermere, i applikationer, der er særligt følsomme over for reagenssammensætning, såsom digital PCR, kan anvendelsen af højkoncentrationsglycerinfri enzymer yderligere mindske glycerols indflydelse på den digitale PCR-reaktion. Denne tilgang minimerer ikke kun interferens, men udvider også potentialet for optimering af det digitale PCR-detektionsreagenssystem.
YEASEN Glycerolfri molekylær enzymopløsning
YEASEN har etableret en omfattende ikke-glycerin molekylært enzym R&D og produktionsplatform og har opnået storskalaproduktion af flere glycerolfrie molekylære enzymer gennem materialevalg, miljøkontrol, procesoptimering og kvalitetssikring.
- Afprøvning af dialyseproces
Optimering af dialyseprocessen for en fast mængde glycerinenzym:
- Screening for den optimale dialysebuffer for forskellige molekylære enzymer;
- Screening for stabile opbevaringsløsninger til forskellige molekylære enzymer for at tillade langtidsopbevaring ved 4 ℃ eller -20 ℃.
- Tangential flow filtreringsproces amplifikation
Baseret på dialyseprocesscreeningen kan de optimale dialysebufferkomponenter og deres optimale opbevaringsløsninger bestemmes. Efterfølgende kan tangentiel flowfiltreringsproces (også kendt som UFDF) bruges til udskiftning af opløsningsbuffer.
De afgørende faktorer i udviklingen af den tangentielle flowfiltreringsproces drejer sig om valget af opbevaringsopløsningsformel, vaske- og filtreringsopløsningsformel samt transmembrantrykket og flowhastigheden anvendt under filtreringen. YEASEN har etableret en standardiseret tilgang til tangentiel flowfiltrering, der muliggør hurtig bestemmelse af vaske- og filtreringsvolumener og tidsparametre baseret på det ønskede glycerinindhold i det molekylære målenzymet. Denne tilgang hjælper med at spare på både materialer og tid.
- Kvalitetskontrol
De forskellige forberedelsesprocesser, der er skitseret ovenfor, er designet til at imødekomme de forskellige krav til forskellige volumener og produkttyper. For at vurdere produktstabilitet på tværs af forskellige batches og inden for samme proces har YEASEN udviklet et omfattende system til karakterisering af ydeevneparametre. Dette system giver mulighed for en grundig evaluering af virkningen af glycerolfrie foranstaltninger fra flere perspektiver. Karakteriseringsmetoder omfatter proteinkvantificering, vurdering af enzymaktivitet (genvindingshastighed), analyse af glycerinindhold, vurdering af indhold af beskyttelsesmiddel og evaluering af enzymydelse, blandt andre.
YEASEN glycerolfrie molekylære enzymprodukter
YEASEN har taget en glycerolfri metode til fremstilling af molekylære enzymer til fremstilling af enzymer uden glycerinindhold fra dem, der oprindeligt indeholder glycerin. I øjeblikket kan vi levere betydelige mængder af glycerolfri enzymråmaterialer, der er egnede til qPCR/RT-qPCR og LAMP/RT-LAMP applikationer. Disse råmaterialer er designet til frysetørring i diagnostisk test, alt imens de opretholder samme niveau af kvalitet og ydeevne som deres flydende modstykker.
Glycerolfrie molekylære enzymprodukter
qPCR-forblandinger blev fremstillet vha YEASEN 14316ES E-Taq DNA-polymerase og tilsvarende glycerolfri enzymer, henholdsvis, og skabelonen på 105, 104 og 103 kopier/ml blev amplificeret på samme tid. Resultaterne viste, at amplifikationseffekten af glycerolfri 14316ES var i overensstemmelse med effekten af glycerinholdig modpart. Den accelererede stabilitetstest af 14316ES blev udført ved 37 ℃. Resultaterne viste, at ekspansionsydelsen af 14316ES var i overensstemmelse med uaccelereret kontrol efter 54 dages accelereret behandling ved 37 ℃. Ovenstående resultater viste, at der ikke var nogen forskel i ydeevnen af glycerolfrit enzym og glycerinholdigt modpart, og stabiliteten var god.
- RT-qPCR frysetørrede produkter: Accelereret ved 50 ℃ i 25 dage, frysetørrede produkter har stabil morfologi og ydeevne
Yeasen 14316ES blev fremstillet i RT-qPCR forblandet opløsning, som blev frysetørret og testet for accelereret stabilitet ved 50 ℃ i 25 dage. Samtidig 105, 104 og 103 kopier/ml af den nye coronavirus pseudovirus skabelon blev amplificeret.Resultaterne viste, at produktmorfologien, Ct-værdien og fluorescensværdien ikke havde nogen signifikant ændring før og efter frysetørring, og det frysetørrende produkt havde god stabilitet.
Figur 4: Accelererede stabilitetstestdata for RT-qPCR frysetørrede produkter- RT-LAMP frysetørrede produkter: Accelereret ved 45 ℃ i 30 dage, frysetørrede produkter har stabil morfologi og ydeevne
RT-LAMP forblandingen blev fremstillet med YEASEN 14405ES og 11297ES, og præstationstesten blev udført efter frysetørring. Det positive reaktionshul var orange og det negative reaktionshul var magenta, hvilket viste stor kontrast, og resultatet blev tydeligt fortolket. Derudover ændrede morfologien af frysetørrede produkter sig ikke væsentligt efter 30 dages acceleration ved 45 ℃. Resultaterne viste, at det frysetørrede produkt var stabilt i form og ydeevne.
Produktinformation
| Klassifikation | Name | Katalog nr. |
| Glycerolfri enzymprodukter til qPCR/RT-qPCR | Hifair™ Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit -11831ES | 11831ES |
| 14316ES | ||
| 11301ES | ||
| 10707ES | ||
| 10703ES | ||
| Glycerolfri enzymprodukter til RT-LAMP | Hifair® III Reverse Transcriptase, 600U/μl, Glycerolfri | 11297ES |
| 14405ES |