Gratis guide: Optimering af proteinoprensning af arbejdsgange

Proteinrensning er en grundlæggende teknik inden for biokemi og molekylærbiologi, der i vid udstrækning anvendes i forskning, diagnostik og terapeutiske applikationer. For at studere et specifikt protein er det første skridt at isolere og oprense det fra biologiske prøver. Det kan dog være en udfordring at opnå højrent protein i betragtning af mangfoldigheden af ​​proteiner og kompleksiteten af ​​biologiske systemer. Forståelse af kerneprincipperne for proteinrensning og valg af de rigtige teknikker til din forskning kan i høj grad forbedre din arbejdsgang effektivitet og udbytte.

Det grundlæggende i proteinrensning

Proteinoprensning er afhængig af forskelle i de fysiske og kemiske egenskaber af proteiner, såsom størrelse, ladning, hydrofobicitet og affinitet for specifikke ligander. Ved at udnytte disse forskelle kan forskere effektivt adskille målproteiner fra andre biologiske komponenter, hvilket minimerer forurening.

Her er de primære proteinoprensningsteknikker baseret på forskellige separationsmekanismer:

Hver af disse teknikker kan optimeres ved at vælge de passende materialer og søjler. Den ideelle metode afhænger af proteinets egenskaber og det renhedsniveau, der kræves til downstream-applikationer.

Optimering af dit workflow til proteinrensning med Ylempe Biologiske produkter

På Yeasen Biologi, vi leverer en bred vifte af højkvalitetsreagenser og materialer designet til at strømline proteinoprensning. Uanset om du håndterer komplekse biologiske prøver eller har brug for højtydende proteiner med høj renhed, tilbyder vi værktøjer til at forbedre din oprensningsproces. Her er en oversigt over nogle af vores nøgleprodukter for at hjælpe dig med at optimere dine oprensningsarbejdsgange:

Hans tag-proteinrensning (Kat #20502ES):

Ved rekombinant proteinekspression er Hans tag (typisk 6×His) er meget udbredt på grund af dens lille størrelse, lave immunogenicitet og minimale indvirkning på proteinfunktionen. Hans tag-proteiner kan oprenses effektivt med affinitetsharpikser chelateret med nikkelioner, såsom Ni-NTA-harpikser. HisSep Ni-NTA Agarose Resin (Cat#20502ES) leveret af Ylempe Biologi bruger stærkt tværbundet agarosegel som matrix, kombineret med den quad-koordinerede nitrogen-trieddikesyre (NTA) ligand for at danne stabile nikkelionchelater. Kombineret struktur sikrer effektiv proteinbinding og elueringsydelse.

Tag antistof affinitetsoprensning

Affinitetsoprensning af tag-antistoffer anvender høj specifik binding mellem antistoffet og dets specifikke tag for at opnå oprensning af fusionsproteinet. Almindelige tags inkluderer Flag, HA, MycVed at anvende de tilsvarende antistofaffinitetsmedier kan proteinet af interesse effektivt isoleres fra komplekse prøver.

Yeasen Biologi leverer en række af affinitetsoprensningsprodukter for mærket antistof:

• Anti-flag affinitet Gel (Kat #20584ES):
  Fremstillet af højkvalitets murint IgG2b monoklonalt antistof med 4% stærkt tværbundet agarosegel through forsyningskobling, den har en høj Flag-tag-fusionsproteinbelastningskapacitet, suden er i stand til immunpræcipitation og oprensning af Flag-tag-proteiner. yeasen.com

• Anti-HA Affinity Gel(Kat #20586ES):
  Fremstillet af højkvalitets murint IgG1 monoklonalt antistof og Sepharose 4B gel gennem forsyningskobling, det har en høj belastningskapacitet af HA-tag-fusionsproteiner, velegnet til immunpræcipitation og oprensning af HA-tag-proteiner. yeasen.com

• Anti-Myc Affinity Gel(Kat #20587ES）:
  Det højkvalitets murine IgG1 monoklonale antistof er koblet til Sepharose 4B gel, designet til oprensning af Myc-mærkede proteiner, med høj specificitet og høj bindingsevne.

• Anti-flag immunomagnetiske perler(Kat #20565ES）:
  Denne immunomagnetiske perle er koblet med magnetiske agarosemikrosfærer ved hjælp af højkvalitets muse-afledt IgG2b monoklonalt antistof, som hurtigt kan oprense Flag-mærkede proteiner under påvirkning af magnetiske felter og er velegnet til oprensning af små prøvestørrelser.

Antistofaffinitetsoprensning (kat#36401ES):

Antistofaffinitetsoprensning er en metode til at bruge den specifikke binding af et antistof til dets antigen til proteinoprensning. Alkali-resistent rekombinant protein A agarose oprensningsharpiks (kat#36401ES) bruges almindeligvis som et antistofaffinitetsoprensningsmedium og anvendes i vid udstrækning til antistofoprensning og berigelse.

Proteinase

I proteinundersøgelser anvendes proteaser til at spalte fusionsmærker, hvilket genopretter den naturlige tilstand af målproteinet. Inkorporering af disse proteaser i din proteinrensningsworkflow kan forbedre kvaliteten og funktionaliteten af ​​dine målproteiner, hvilket letter avancerede forsknings- og udviklingsprojekter.

• Rekombinant enterokinase (kat#20401ES):

Enterokinase, også kendt som enteropeptidase, er en serinprotease, der specifikt spalter efter aminosyresekvensen DDDDK. Yeasens rekombinante enterokinase udtrykkes i Escherichia coli og er fri for tags, hvilket sikrer, at den ikke forstyrrer downstream-applikationer. Dette enzym er ideelt til at fjerne fusionsmærker fra rekombinante proteiner, hvilket letter produktionen af ​​native proteiner til strukturelle og funktionelle undersøgelser.

• lPNGase F (kat#20407ES):

PNGase F er en amidase, der specifikt spalter mellem de inderste GlcNAc- og Asn-rester af N-bundne glycoproteiner. Yeasens PNGase F leveres i en koncentration på 100.000 U/mL, hvilket giver høj aktivitet til deglycosyleringsreaktioner. Dette enzym er afgørende for at studere glycoproteinstrukturer og -funktioner, da det fjerner N-bundne glycaner uden at påvirke peptidrygraden.

• Rekombinant trypsin (MS-SAFE) (kat#20416ES):

Trypsin er en serinprotease, der spalter peptidbindinger på carboxylsiden af ​​lysin- og argininrester. Yeasens rekombinante trypsin er MS-SAFE, hvilket betyder, at det er velegnet til massespektrometriapplikationer på grund af dets høje renhed og minimale autolytiske aktivitet. Dette enzym er ideelt til proteomiske undersøgelser, herunder proteinfordøjelse til massespektrometrianalyse.

Oprensning Metode	Reagenstype	Produkttype	Anbefalede produkter
Gelfiltrering	Dextran Gel Kromatografi	Afsaltning af fyldstoffer Afsaltning af færdigpakkede kolonner Afsaltning af tyngdekraftskolonner Spin kolonner	Afsaltningssøjle G25 M(Kat #20590ES） Spin afsaltningssøjle, 0,5 ml (Kat #20599ES） Gravity Afsalting Column, 8.3 ml (Kat #20741ES）
	Agarose Gel Kromatografi	Fyldstof Forpakkede kolonner	Geldex 200 PG højopløsnings agarosegelkromatografipakning (10-600 kDa) (kat#20598ES) Geldex 200 PG kromatografisøjle (Kat #20593ES）
Ionbytning	Anionudveksling Kromatografi	Fyldstof Forpakkede kolonner	Q Agarose HP (Q Strong Anion Exchange Chromatography Packing HP) (Cat#20460ES) Q HP Strong Anion Exchange Prepacked Column, 5 mL (Cat#20462ES)
	Kationbytningskromatografi		SP Agarose HP (SP Strong Cation Exchange Chromatography Packing HP) (Cat#20463ES) SP HP Strong Cation Exchange Prepacked Column, 5 mL (Cat#20465ES)
Hydrofob interaktionskromatografi	Svag hydrofob Kromatografi	Fyldstof Forpakkede kolonner	Høj opløsning butyl svag hydrofob kromatografi medium (kat#20484ES) Butyl HP Weakly Hydrophobic Chromatography Preloaded Column, 5 mL (Cat#20485ES)
	Stærk hydrofobisk Kromatografi		Højopløsningsphenyl stærkt hydrofobisk kromatografimedium (kat#20486ES) Phenyl HP Strongly Hydrophobic Chromatography Preloaded Column, 5 mL (Cat#20487ES)
Affinitetsrensning	Hans-tag Proteinrensning	Harpiks Forpakkede kolonner Rensende magnetiske perler	His-tag Protein Agarose Purification Resin (Kat #20502ES) His-tag-proteinrensning forudindlæst kolonne, 5 mL (kat#20504ES) His-tag-proteinrensningsmagnetiske perler (kat#20561ES)
	moms-tag Proteinrensning	Harpiks Forpakkede kolonner Rensende magnetiske perler	Glutathionagaroseharpiks (til GST-mærket proteinoprensning) (kat#20507ES) GST-mærket proteinrensning forudindlæst kolonne, 5 mL (kat#20510ES) GST-mærkede magnetiske perler til proteinrensning (kat#20562ES)
	MBP-tag Proteinrensning	Harpiks Forpakkede kolonner	MBP-mærket protein stærkt tværbundet renseharpiks (kat#20515ES) MBP-mærket proteinrensning forudindlæst kolonne, 5 ml (kat#20517ES)
	strep (Ⅱ) Tag Proteinrensning	Harpiks Forpakkede kolonner	Strep(II)-mærket proteinagarose-rensningsharpiks (kat#20495ES)
	Bioti-tag Proteinrensning	Harpiks Forpakkede kolonner Immunomagnetiske perler	Streptavidin-agarose-rensningsharpiks (kat#20512ES) Biotin Molecular Purification Preloaded Column, 5 mL (Cat#20514ES) Streptavidin (SAV) immunomagnetiske perler (kat#47503ES)
	Tag Antistof Affinitetsrensning	Gel Immunomagnetiske perler	Anti-Flag Affinity Purification Gel (Kat#20584ES) Anti-HA Affinity Purification Gel (Kat #20586ES) Anti-Myc Affinity Purification Gel (Kat #20587ES) Anti-flag immunomagnetiske perler (Kat #20565ES)
	Antistofaffinitetsoprensning	Harpiks Forpakkede kolonner Immunomagnetiske perler	Rekombinant Protein A Agarose Oprensningsharpiks (Kat #36401ES) Protein G agarose oprensningsharpiks (kat#36405ES) Protein A/G Agarose-rensningsharpiks (kat#36403ES) Protein A/G immunomagnetiske perler (kat#36417ES)
	Anden antistofaffinitetsoprensning	Harpiks Forpakkede kolonner	Endotoksin højeffektiv fjernelsesrensningsharpiks (kat#20518ES) Heparin-affinitetsoprensningsmedium (kat#20493ES)
其他产品	Proteaser	Tag-spaltende enzymer Glycosidaser Enzymer af massespektrometri	E.coli Udtrykt rekombinant enterokinase (uden etiket) (Kat#20401ES) Bovint trombin (høj levedygtighed, >2000 IE/mg) (kat#20402ES) rTEV Protease Recombinant Tobacco Etch Virus Protease (Cat#20403ES) PNGase F, N-Glycosidase F (100.000 U/mL) (Kat #20407ES) Rekombinant trypsin (MS-SAFE) Rekombinant trypsin (massespektrometri-grad) (Kat #20416ES)
	Forbrugsstoffer til kromatografi	Gravity Flow tomme kolonner skriv tomme kolonner YXK kolonner Dialysetasker	12 ml tyngdekraftkromatografi tom kolonne (kat#20523ES) 5 mL Type C tom kolonne (forbundet til Akata, sprøjte eller peristaltisk pumpe) (Cat#20526ES) YXK16/70 Chromatography Tom Column (Cat#20443ES) 27 mm dialysepose (MWCO 50 kDa) (kat#20534ES)

Konklusion: Skræddersy dit arbejdsflow til dine behov

Optimering af din proteinrensningsworkflow er afgørende for at opnå høj renhed, højtydende proteiner til din forskning eller anvendelse. Ved at forstå oprensningsprincipperne og vælge de rigtige værktøjer kan du strømline din proces og undgå almindelige faldgruber. Yeasen Biology leverer reagenser og forbrugsstoffer af højeste kvalitet til alle faser af proteinrensning, hvilket sikrer, at dine proteiner er rene, funktionelle og klar til analyse.

For at lære mere om, hvordan vores produkter kan forbedre din proteinrensningsproces, kan du besøge vores produktsider eller kontakte vores team for personlige anbefalinger.

For mere information eller køb, besøg vores officielle vibwebsted.