Inden for biomedicinsk forskning er proteinrensning en nøgleteknologi til at udforske livets mysterier. Traditionelle oprensningsmetoder kæmper dog med ineffektivitet og høje omkostninger - især for membranproteiner, som er i fokus for strukturel biologiforskning. Disse proteiner er strukturelt komplekse, har lave ekspressionsniveauer i cellemembraner og er følsomme over for miljøforhold, hvilket gør deres oprensning særligt vanskelig. Nu har Yeasen Biotech med sine fremragende R&D-kapaciteter lanceret den opgraderede Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel (Kat#20584ES), et kraftfuldt værktøj til effektiv og bekvem proteinrensning, selv til udfordrende membranproteiner.
Produktydelse
1. Høj specificitet og høj bindingskapacitet: Vigtige fordele ved målproteinindfangning
Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel (Kat#20584ES) fremstilles ved kovalent kobling af højkvalitets muse IgG2b monoklonale antistoffer med 4% stærkt tværbundet agarosegel. Denne unikke fremstillingsproces giver produktet ekstrem høj specificitet, hvilket gør det i stand til præcist at genkende og binde fusionsproteiner med Flag-tagget. Om det er det N-terminale Flag-fusionsprotein modificeret af Met (Met-Flag-Protein), det N-terminale Flag-fusionsprotein (Flag-Protein), eller det C-terminale Flag-fusionsprotein (Protein-flag), kan gelen nemt håndtere dem.
Ved membranproteinoprensning er denne specificitet særlig vigtig, fordi disse proteiner er strukturelt komplekse og tilbøjelige til ikke-specifik binding med andre proteiner. Den høje specificitet af Flag gelen reducerer effektivt interferens fra ikke-specifikke proteiner, hvilket sikrer høj renhed af de oprensede membranproteiner. Derudover har gelen en høj bindingskapacitet til Flag-mærkede fusionsproteiner (mindst 1,1 mg protein/ml gel). Dette betyder, at selvom målproteinet udtrykkes ved lave niveauer, kan det stadig opfanges og renses effektivt ved hjælp af Flag-gelen.
2. Høj renhed og højt udbytte: Muliggør downstream-applikationer
Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel (Kat#20584ES) har minimal uspecifik binding af urenheder, hvilket resulterer i meget rene proteinprøver efter oprensning. Dette er afgørende for downstream-applikationer såsom bioaktivitetsassays og strukturelle analyser. Proteinprøver med høj renhed giver mere nøjagtige eksperimentelle data og lægger et solidt grundlag for forskernes undersøgelser.
3. Optimeret eksperimentel arbejdsgang: Forenkling af udfordringer med proteinrensning
Proteinrensning skal udføres under milde forhold for at undgå strukturel skade på proteinerne, især for komplekse membranproteiner. Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel (Kat#20584ES) er designet med dette i tankerne. Dens lagerbuffer er TBS indeholdende 50% glycerol ved pH 7.4, som ikke kun beskytter gelens aktivitet, men også giver et skånsomt miljø til proteinoprensning.
Oprensningsprocessen med Flag gelen er enkel og effektiv. For at lette brugen af 1×Flag-peptideluering inkluderer produktpakken et gratis 1×Flag-peptid (Cat#20572ES). Dette gør elueringsprocessen skånsom (med næsten ingen skade på proteinerne) og yderst bekvem (yderligere øger letheden ved eksperimentering).
4. Flere størrelser og fleksible forsendelsesmuligheder: Opfylder forskellige eksperimentelle behov
I betragtning af de forskellige skalaer og behov i forskellige laboratorier tilbyder Yeasen Flag gelen i flere størrelser, bl.a. 1 ml, 5 ml, 25 ml og 100 ml. Uanset om det er til småskala foreløbig efterforskning eller storskala proteinproduktion, er der en passende mulighed tilgængelig. Ved årlige indkøb af store mængder kan kunderne vælge at modtage forsendelser i partier, hvilket giver dem mulighed for at nyde prisrabatter, mens de undgår presset fra overdreven lagerbeholdning.
Test data
 | M: Proteinmarkør 1: Præ-kolonne rå prøve af Flag-N/Flag-M/Flag-C protein 2: Post-søjlegennemstrømning af Flag-N/Flag-M/Flag-C protein 3: Eluering (pH 2,7 eluering) 4: Eluering (pH 12 eluering) 5: Eluering (1×Flag peptid eluering) 6: Oprenset gel (pH 2,7 eluering) 7: Oprenset gel (pH 12 eluering) 8: Oprenset gel (1×Flag peptid eluering) -en:Flag-N b:Flag-M c:Flag-C |
Figur 1. Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel oprensningsresultater for lavt-udtrykkende proteiner (Flag-N (a), Flag-M (b), Flag-C (c)), vist i SDS-PAGE.
 | M: Proteinmarkør 1: Præ-kolonne rå prøve af Flag-C protein 2: Post-søjlegennemstrømning af Flag-C protein 3: Eluering (pH 2,7 eluering) 4: Eluering (pH 12 eluering) 5: Eluering (1×Flag peptid eluering) 6: Oprenset gel (pH 2.7 eluering) 7: Oprenset gel (pH 12 eluering) 8: Oprenset gel (1×Flag peptid eluering) -en:Yeasen b:Mærke S* c:Mærke G* |
Figur 2. Sammenligning af Yeasen (a) medBrand S* (b) og Brand G* (c) Anti-Flag geler ved oprensning af lavt-udtrykkende proteiner (f.eks. membranproteiner) vist i SDS-PAGE.
Konklusioner:
1. Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel (Kat#20584ES) har høj specificitet og kan binde til Flag-tags i forskellige positioner (N-terminal Flag-fusionsproteiner, Met-modificerede N-terminal Flag-fusionsproteiner, C-terminal Flag-fusionsproteiner).
2. Under betingelser med ekstremt lav målproteinekspression (f.eks. membranproteiner), Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel (Cat#20584ES) opnår væsentligt højere udbytter og renheder sammenlignet med konkurrenterne. Brugen af Yeasen gratis 1×Flag-peptid (Cat#20572ES) til eluering giver endnu bedre resultater.
Komplet løsninger til flagmærkede fusionsproteiner:
Rekombinant enterokinase (kat#20395ES): En specifik protease, der spalter carboxylenden af lysin efterfulgt af fire asparaginsyrer: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys. Denne sekvens er en del af octapeptidflag-mærket (DYKDDDDK). Rekombinant Enterokinase (rEK) kan nemt fjerne Flag-tagget fra fusionsproteiner, hvilket gør det til et ideelt værktøj til at studere strukturen og funktionen af native proteiner.
Anti-DYKDDDDK(Flag) MagBeads (Kat #20565ES): Polymer magnetiske mikrosfærer fremstillet ved kovalent kobling af højkvalitets muse anti-DYKDDDDK (Flag) monoklonale antistoffer med silica-baserede magnetiske perler (diameter af 200 nm). Disse perler er egnede til immunpræcipitation (IP) eller co-immunpræcipitation (Co-IP) af proteiner med Flag-mærket.
Produktinformation
| Produktnavn | Produktnummer | Specifikation |
| 1 ml/5 ml/25 ml | ||
| Rekombinant bovin enterokinase, His, udtrykt i gær | 100 U/500 U/5000 U | |
| Anti-DYKDDDDK(Flag) MagBeads | 1 ml/5 ml |