Med den hurtige udvikling af glycoproteomics og antistoflægemiddelforskning har glycosyleringsmodifikation også tiltrukket sig stor opmærksomhed. Kontakten mellem celler og celler og mellem celler og patogener fuldendes hovedsageligt gennem interaktionen mellem sukkerarter og proteiner, og glycosylering bestemmer glykokonjugaternes adhæsionsegenskaber. I IgG er den konserverede N-bundne glycosylering ved Asn297 i Fc-regionen også afgørende for dens aktivitet. Derudover har nogle antistoffer også yderligere N-glycaner, som sammen med det konserverede sted ved Asn297 i Fc-regionen påvirker antistoffets genkendelse, halveringstid og immunrespons.
Proteinglykosylering er en kompleks post-translationel modifikation, der involverer forbindelsen af glycankæder på specifikke steder på proteiner. Afhængigt af typen af glycankæde opdeles glycoproteiner i N-bundne glycoproteiner, O-bundne glycoproteiner osv.; desuden påvirkes proteinglykosylering også af værtscelletypen og fermenteringsbetingelser (såsom dyrkningsmedium, pH-værdi, temperatur osv.). Derfor har glycoproteiner normalt heterogenitet i glycosyleringsmønstre, herunder glycosyleringssteder, glycosyleringsniveauer og den specifikke struktur af glycankæder, hvilket gør glycankædeanalyse og strukturel karakteriseringsarbejde ekstremt udfordrende. For at opnå den maksimale mængde af glycankædestrukturel information er hovedstrategien for glycankædeanalyse først at frigive glycankæderne fra proteinerne og derefter udføre detaljeret analyse og karakterisering. I denne strategi er en effektiv, nøjagtig og stabil deglycosyleringsmetode afgørende.
Enzymatiske metoder er for tiden meget brugt til deglycosylering. For N-bundne glycaner omfatter almindeligt anvendte enzymer PNGase F , Endo H og Endo S.
Produktintroduktion
PNGase F er den mest effektive enzymatiske metode til at fjerne næsten alt N-bundet oligosaccharider i glycoproteiner, som kan spalte højmannose-, hybrid- og komplekse oligosaccharid-glycoproteiner forbundet med asparagin, hvilket specifikt fjerner N-bundne glycaner. Spaltningsstedet er: amidbindingen mellem den inderste N-acetylglucosamin (GlcNAc) og asparaginresten, mens asparaginen omdannes på proteinet efter enzymatisk hydrolyse til asparaginsyre.
Når α1-6 fucose er placeret ved GlcNAc-kernen, kan PNGase F også skære; kun når α1-3 fucose er lokaliseret ved GlcNAc-kernen (almindelig i plante- og insektglykoproteiner), kan PNGase F ikke skære.
Vores firma tilbyder konventionel PNGase F (kat#20407ES)，Men den konventionelle PNGase F enzymatiske reaktion kræver flere timer at frigive antistof N-glycaner, og på grund af præferencen for glycanfrigivelse kan ufuldstændig deglycosylering føre til skæve resultater, og den opnåede glycanfordeling repræsenterer muligvis ikke den korrekte sammensætning af terapeutiske antistoffer. Derfor er opnåelse af en nøjagtig N-glycanprofil så hurtigt som muligt afgørende for glykosyleringsovervågning under produktionsprocessen af antistoffer og antistoffusionsproteiner og andre bioterapeutiske midler.
Hurtig PNGase F (Kat #20406ES) er et optimeret rekombinant reagens, der hurtigt og fuldstændigt kan deglycosylere antistoffer, immunoglobuliner, fusionsproteiner og andre glykoproteiner på få minutter. Dette enzym kan hurtigt og uden præference fjerne alle N-glycaner og kan direkte anvendes til nedstrøms kromatografi eller massespektrometrianalyse.
Produktegenskaber:
Hurtig: Fuldstændig og hurtig deglykosylering på få minutter.
Høj renhed: Ingen protease, glycosidasekontamination, renhed ≥95%.
Ikke-selektiv: Fjern hurtigt og uden præference alle N-glycaner.
God kompatibilitet: Anvendes direkte til nedstrøms kromatografi eller massespektrometrianalyse.
Endo H er en rekombinant glycosidase, der kan spalte chitobiose-kernestrukturen af høj-mannose og nogle hybrid-type oligosaccharider i N-glycoproteiner, hvilket fjerner den N-bundne høj-mannose fra glycoproteiner.
Vores virksomhed tilbyder i øjeblikket gær rekombinant udtrykt Endo H(Cat#20414ES).
Endo S er en meget specifik glycosidase, der kan spalte N-bundne sukkerarter mellem chitobiose-kernestrukturerne i vildtype-IgG-tunge kæder. Aktiviteten af glycosidase S er ikke strengt afhængig af peptidet, så X kan være et protein, peptid, asparagin eller frit oligosaccharid. Glycosidase S er aktiv uanset tilstedeværelsen af kerne alpha1-6 fucose eller halverende N-acetylglucosamin på substratet. Det er imidlertid inaktivt over for oligosaccharider, der er tri- eller tetra-antennært sialylerede og desialylerede.
Vores virksomhed tilbyder i øjeblikket E.coli rekombinant udtrykt Endo S(Cat#20413ES).
Købsvejledning
| Produktumber | 20406ES | 20407ES | 20414ES | 20413ES |
| Produktnavn | ||||
| Kilde | Gær rekombinant ekspression | Gær rekombinant ekspression | Gær rekombinant ekspression | E.coli rekombinant udtryk |
| Specifik aktivitet | Ikke relevant | 100.000 U/ml | 1000000U/ml | 8000 U/mg |
| Spaltningssted | Næsten alle N-forbundne glycaner | Næsten alle N-forbundne glycaner | N-bundne høj mannose glycaner | Spalter inden for kernedisaccharidstrukturen af IgG tung kæde |
| Fordøjelsestid | 10 min | 1-3 timer | 1-3 timer | 1 t |
| Glykosylering | Egnet | Egnet | Egnet | Egnet |
| Protein struktur | Egnet | Egnet | Egnet | Egnet |
Test data
1. Hurtig PNGase F Prøve
1: Protein MarkerCat#20350ES) 2: Konkurrent + substrat eller antistof 3: Konkurrent + substrat eller antistof
4: Yeasen Fast PNGase F + substrat eller antistof 5: Yeasen Fast PNGase F + substrat eller antistof 6: Substrat eller antistof 7: Yeasen Fast PNGase F 8: Konkurrent
2.Endo H-test
Figur 2. Endo H enzymatisk spaltningseffekt (substrat)
3.Endo S-test
Produktinformation
| Produktnavn | Produktnummer | Specifikation |
| 20406ES20/50 | 20 T/50 T | |
| 20407ES01/02 | 15000 U /75000 U | |
| 20414ES92/97 | 10000 U /50000 U | |
| 20413ES80/90 | 1000 U/5 x 1000 U |