For at give flere behandlingsmuligheder til diabetespatienter dukkede nogle nye diabeteslægemidler op i det tidlige 21. århundrede, såsom glukagon-lignende peptid-1 (GLP-1) analoger. Semaglutid, som et af de repræsentative lægemidler af GLP-1-analoger, er blevet bevist i flere kliniske forsøgsstudier for effektivt at kontrollere blodsukkeret, når det kombineres med forskellige orale hypoglykæmiske lægemidler, og det kan hjælpe patienter med at tabe sig, reducere det systoliske tryk og forbedre pancreas β-cellefunktion. Dets tre formuleringer (hypoglykæmisk injektion Ozempic, oralt hypoglykæmisk lægemiddel Rybelsus og vægttabsinjektion Wegovy) oversteg 20 milliarder USD i salg i 2023. På grund af dets enestående præstation i blodsukkerreduktion og vægttab, industrien forventer, at Semaglutide opretholder et stærkt salgsmomentum i nogen tid, hvilket tiltrækker mange virksomheder til at konkurrere om layout!
Semaglutid's hovedkædestruktur er et 29-aminosyre-mellempolypeptid Arg34GLP-1(9-37) eller et 27-aminosyre-mellempolypeptid Arg34GLP-1(11-37). Produktionen og fremstillingen af dette mellemliggende polypeptid omfatter hovedsageligt kemisk syntese og biopræparationsmetoder. Sammenlignet med kemisk syntese har biopræparation brudt gennem kapacitetsflaskehalsen og er mere velegnet til kontinuerlig produktion i stor skala, hvilket yderligere kan reducere produktionsomkostningerne og give flere betydelige økonomiske fordele.
Tabel 1. Eksempler på biopræparationsmetoder for semaglutid-mellempolypeptider
| Biopræparationsmetode (Eksempel 1)
| Biopræparationsmetode (Eksempel 2)
| |
| Gensyntese | Syntetisere en fusionsproteinsekvens, herunder et fusionspeptid, enterokinase-spaltningssted og målhovedmolekylesekvensen | Syntetiser en tandemekspressionssekvens med GLP-1(9-37)-gensekvensen |
| Engineering Bakteriekonstruktion | Introducer i E. coli for at konstruere rekombinante manipulerede bakterier | Introducer i E. coli for at konstruere rekombinante manipulerede bakterier |
| Fusionsprotein udtryk | Ved at optimere fusionspeptidsekvensen, ændre det isoelektriske punkt og hydrofilicitet af proteinet osv., øges ekspressionen af fusionsproteinet effektivt.
| Efter fermenteringsinduktion med høj densitet opnås et tandemekspressions-inklusionslegeme-protein, der udtrykker GLP-1(9-37), og genfoldningen giver et opløseligt protein |
| Mellemliggende peptidoptagelse | Efter at fusionsproteinet har gennemgået enterokinasespaltning, oprensning og andre trin, kan semaglutid-mellempolypeptidet Arg34GLP-1(9-37) opnås | Det opløselige protein kan opnås efter at have gennemgået to-trins enzymspaltning med Kex2-enzym og carboxypeptidase B og oprensningstrin for at opnå semaglutid-mellempolypeptidet GLP-1(9-37) |
Enterokinase eller Kex2-enzym kombineret med carboxypeptidase B er et nøgleenzym for Semaglutid's vigtigste peptidkæde (biopræparationsmetoden), og enzymets skærende effekt og omkostninger er afgørende for produktionen.Yisheng Biology er forpligtet til at levere stabile enzymråmaterialer til farmaceutiske virksomheder, tilbyde enzymer af høj kvalitet og komplette kvalitetskontrolstandarder for at hjælpe kunder med at forbedre produktionskapaciteten og batchstabiliteten, reducere omkostningerne og hurtigt komme ind markedet.
Yeasen samlet opløsning til Semaglutid
1.Rekombinant enterokinase
Rekombinant enterokinase (rEK) er en højrenhed bovin intestinal enterokinase let kæde underenhed, som har den samme specifikke skærende enzymaktivitet som naturligt ekstraheret enterokinase, med et skæringssted af Asp-Asp-Asp-Asp-Lys, der er i stand til at fjerne fusionsproteinet placeret ved proteinets N-terminale ende for at fjerne unødvendige fusionsmærker, der er almindeligt valgt til N-terminal, og er en fusions-tags, som er almindeligt valgt. Den har et lavt niveau af uregelmæssig skæring på andre rester.
Yisheng tilbyder i øjeblikket rekombinante enterokinaser fra forskellige kilder, forskellige kvaliteter, og uanset om de har His tags eller ej, som kunder kan vælge imellem.
Yeasen rekombinant Kvæg Enterokinase, His, udtrykt i gær er en høj renhed, høj aktivitet og meget specifik bovin enterokinase udtrykt ved Pichia pastoris sekretion. Det kan effektivt spalte fusionsproteiner inden for et bredt pH-område (4,5-9,5) og et bredt temperaturområde og har stadig delvis aktivitet under forskellige detergenter og denatureringsmidler. Dette produkt har et His tag, som nemt kan fjernes gennem Ni2+ affinitetssøjle efter skæringsreaktionen, hvilket i høj grad forenkler den efterfølgende oprensningsproces.
Funktioner
Høj specificitet: En specifik protease, der skærer i carboxylenden af lysin indeholdende fire asparaginsyrer: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys;
Høj renhed: Ingen andre proteaser, ingen uspecifik skæring;
Ingen animalsk oprindelse: Rekombinant produktion, ingen eksogen viral kontaminering, ingen brug af animalske råvarer i produktionsprocessen;
Stabil kvalitet: Batchproduktion kan sikre stabil og kontinuerlig batchproduktion; ingen batch-til-batch forskelle, stabil kvalitet;
Tilstrækkelig kapacitet: 500L fermentor kan opnå ~50 MU enterokinase, Yeasen har 5L-1500L forskellige systemfermentorer for at imødekomme forskellige kundekrav på forskellige stadier for produktbatchkrav;
Forskellig kvalitet produkt levering: R&D-kvalitet (20395ES), GMP-kvalitet (20396ES), GMP-kvalitetsprodukter overholder ISO 13485 kvalitetsstyringssystem.
Test data
Enterokinase aktivitetstest:
Figur 1. Den enzymskærende effekt af Yeasen enterokinase (20395ES) er i overensstemmelse med Konkurrent N
Bemærk: Det positive substrat (20391ES) er et fusionsprotein sammensat af to specifikke proteinsekvenser forbundet med DDDDK (enterokinase-genkendelse og skæringssted), med en samlet molekylvægt på ca. 64,6 kDa, som specifikt kan skæres i to uafhængige proteinfragmenter af enterokinase, med molekylvægte på henholdsvis ca. Dette produkt, som et enterokinasesubstrat, kan bruges til semikvantitativ eller kvalitativ enzymaktivitetspåvisning af rekombinant eller naturlig enterokinase.
Enterokinase renhedstest:
Bemærk: Den teoretiske værdi af enterokinase er 22,7 kDa. På grund af glycosyleringseffekten efter ekspression i Pichia pastoris viser SDS-PAGE, at molekylvægten af målproteinet er ca. 40 kDa. Generelt vil de glykosylerede bånd have et let diffust bånd, der løber opad (som vist i den højre figur). Vores virksomhed kan også levere deglykosyleringsenzymet Endo H (kat#20414) til kunderne til at deglycosylere og køre gel for at måle renhed (som vist i den venstre figur).
Enterokinaseskæringsspecificitetstest:
Figur 3. Yeasen enterokinase (20395ES) har mindre uspecifik skæring end importkonkurrent N
Bemærk: Under de samme betingelser, Yeasen enterokinase (20395ES) og importkonkurrent N's enterokinase blev brugt til enzymskæringstest. Resultaterne viser, at efter oprensning er de uspecifikke skærende urenheder produceret af Yeasen enterokinase (20395ES) er væsentligt lavere end importkonkurrenten N.
Enterokinase gentagen fryse-optøning, accelereret stabilitetstest:
Figur 4. Yeasen enterokinase (20395ES) gentagen fryse-optøning, accelereret stabilitetstest viser, at enzymaktiviteten ikke ændrede sig signifikant.
Bemærk: Yeasen enterokinase (20395ES) tilfældigt udvalgte 2 batches, gentaget frysning-optøning 10 gange, 20 gange, enzymaktivitet ændrede sig ikke signifikant fra den oprindelige enzymaktivitet.
Opbevaring ved 25°C i 7, 16, 32 dage, 37°C i 7, 14 dage, enzymaktivitet ændrede sig ikke væsentligt fra den initiale enzymaktivitet.
2. Rekombinant Kex2-enzym, carboxypeptidase B
Tabel 2. Yeasen Recombinant Kex2 Enzyme, Carboxypeptidase B Produktvalgsvejledning
| Produktnummer | 20418ES | 20417ES |
| Produkt Navn | Rekombinant Kex2-protease, udtrykt i gær
| Rekombinant CPB, udtrykt i E. coli
|
| Produktkvalitet | GMP karakter | GMP karakter |
| Kilde | Rekombinant udtryk fra Pichia pastoris | Rekombinant udtryk fra E. coli |
| Aktivitet | ≥10,0 enheder/mg pro
| ≥170 USP enheder/mg pro
|
| Spaltningssted | Genkender og spalter specifikt peptidbindinger ved carboxylsyreterminalen af dibasiske aminosyrer såsom Arg-Arg, Lys-Arg | Hydrolyserer specifikt proteiner på den aminoterminale side af basiske aminosyrer (lysin, arginin, histidin) ved C-terminalen |
| Produktanvendelse | 1. Proces enzymspaltning i peptidlægemiddelproduktion. 2. Enzymatisk fordøjelse af proteiner og peptidkortlægning, sekventering mv. | 1. Produktion af rekombinant insulin og dets analoger. 2.Bestemmelse af aminosyrer ved C-terminalen af proteiner. 3. Fjernelse af histidinmærker ved C-terminalen af proteiner. 4. Fremstilling af andre rekombinante peptidstoffer. 5. Enzymatisk syntese af visse specielle forbindelser. |
Kex2-enzym kombineret med carboxypeptidase B: Krav til tandemekspressionsproces, højt udbytte af semaglutid-mellemprodukt efter enzymskæring
Ylempe GMP Grade Enzyme Production Base
ISO-certificeret Ultra-Clean Molecular Enzyme Production Base - UCF.ME, udstyret med industriel AKTA-rensnings- og fysisk-kemisk analyseudstyr, hundrede liters fermenteringsenheder med høj densitet, 10.000-klasses standard rene værksteder og automatiserede produktionslinjer. Det besidder fermenterings- og oprensningssystemer med forskellige specifikationer, herunder 5L, 10L, 30L, 100L, 500L og 1.500L, med evnen til at opskalere produktionen fra 5L til 1.500L inden for molekylær enzymindustrialisering, hvilket fuldt ud opfylder kernestadier af enzymudvikling, f. storstilet produktion.
Yeasen har et stærkt R&D-team og avanceret enzymproduktionsbase, der løbende forbedrer kvaliteten og kapaciteten af nøgleenzymer til semaglutidproduktion (rekombinant enterokinase) gennem kontinuerlig teknologisk innovation og optimering, der tilbyder gradientpriser for forskellige specifikationer for at imødekomme kundernes forskellige behov i forskellige produktionsstadier.
Salgsfremmende produktinformation
| Produktnavn | Produktnummer | Specifikation | Listepris ($） | Salgsfremmende Pris ($） |
| 20395ES60/76/90/ 92/94 | 100 U/500 U/ 5000 U/ 100 KU/ 1 MU(1000 KU) | 45/115/ 825/ 12000/ 360.000 | 45/115/ 585/ 5600/ 19600 |
Relateret produktinformation
| Produktnavn | Produktnummer | Specifikation |
| 20391ES03/11 | 1 mg/4 mg | |
| Rekombinant Kex2-protease, udtrykt i gær | 20418ES60 | 100 μg |
| 20417ES03/10 | 1 mg/10 mg | |
| 20414ES92/97 | 10000 U/50000 U |