Tag Antistoffer Introduktion
Tag-antistoffer anvendes til påvisning og oprensning af tag-sekvenser på forskellige kommercielle ekspressionsvektorer til at analysere og bestemme ekspressionsniveauerne og -funktionerne af målproteinerne. Princippet bag deres anvendelse er antigen-antistof-reaktionen, hvor disse tag-antistoffer specifikt kan binde til de tilsvarende tag-fusionerede proteiner. Her er en kort liste over nogle almindelige protein-tags, der er egnede til brug med tag-antistoffer:
Tabel 1. Introduktion til forskellige proteinmærker
| Tag | Sekvens | Funktioner | Gældende scenarier |
| Flag | DYKDDDDK | 1. Lille molekylvægt, ændrer ikke funktionen af fusionsproteinet, mere hydrofilt end lignende tags; 2. Indeholder enterokinase-genkendelsessted (DDDDK), som er praktisk til tagfjernelse, når det fusioneres ved N-terminalen af målproteinet. | Velegnet til oprensning og påvisning af fusionsproteiner med lavt ekspressionsniveau i eukaryote ekspressionssystemer. |
| HA | YPYDVPDYA | Afledt af hæmagglutinin-overfladeantigen-determinanten af influenzavirus; undgå at bruge i eksperimenter relateret til apoptotiske celler. | Velegnet til proteinoprensning og påvisning. |
| Myc | Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu | Afledt af det humane proto-onkogen Myc; undgå at bruge i eksperimenter relateret til humane celler. | Anvendes generelt ikke til proteinoprensning, velegnet til påvisning. |
Yeasen tag antistof affinitetsrensningsprodukter er fremstillet af højkvalitets muse IgG monoklonale antistoffer som råmaterialer. Gennem en proces kaldet "kovalent kobling" kobles disse antistoffer retningsbestemt og effektivt til agarosematricer eller overfladerne af nanomagnetiske perler. Dette reducerer ikke kun uspecifik proteinbinding, men opnår også en højere antistofbelastning på mediet. Derudover leverer det tag-antistofoprensningsprodukter, der er egnede til forskellige oprensningskrav, herunder forskellige tag-antistofoprensningsharpikser og immunomagnetiske perler, hvilket letter oprensningen af mærkede proteiner og immunfældningseksperimenter ved hjælp af manuelle eller automatiserede metoder.
Yeasen Tag Antibody Purification Produktvalgsvejledning
| Produktserie | Rensningsharpiks-serien | ImmunoMagnetic Bead Series | |||||
| Produktnummer | 20584ES | 20586ES | 20587ES | 20565ES | 20566ES | 20567ES | 20564ES |
| Produktnavn | Anti-HA MagBeads | Anti-MycMagBeads | |||||
| Ligander | Højkvalitets muse IgG monoklonale antistoffer | Højkvalitets muse anti-GFP/Flag/HA/Myc monoklonale antistoffer | |||||
| Proteinbindingskapacitet | ≥1,1 mg Flag-mærket fusionsprotein/ml gel ≥1,5 mg HA-mærket fusionsprotein/ml gel ≥0,9 mg Myc-mærket fusionsprotein/ml gel | ≥0,8 mg GFP-mærket fusionsprotein/mg perler ≥0,6 mg Flag-mærkede fusionsprotein/mg perler ≥0,4 mg HA-mærket fusionsprotein/mg perler ≥0,5 mg Myc-mærket fusionsprotein/mg perler
| |||||
| Matrix | 4% tværbundet agarosegel | Silica-baserede magnetiske perler | |||||
| Partikelstørrelse | 45-165 µm | 200 nm | |||||
| Fordele | Lav uspecifik binding, høj kapacitet | Høj renhed, høj kapacitet, høj specificitet, praktisk brug med magnetisk stativ | |||||
| Anbefalede applikationer | Affinitetsoprensning af mærkede fusionsproteiner i enhver skala, immunpræcipitation (IP) | Immunpræcipitation (IP), Co-immunpræcipitation (COIP) | |||||
Test data
1.Yeasen Anti-Flag Affinity Gel (20584ES) vs. Brand S* Rensningssammenligningstest.
Figur 1. Yeasen (a) vs. Brand S* (b) Anti-Flag Gel Sammenligning Test Gel Billede
M: Proteinmarkør; 1: Præ-søjlelysat af Flag-N, M, C proteiner; 2: Post-søjlepermeat af Flag-N, M, C proteiner; 3: Eluering (pH 2,7 eluering); 4: Eluering (pH 12 eluering)
2. Pilene i figuren nedenfor angiver de målmærkede proteiner, og de tre bånd fra top til bund efter direkte kogning af de magnetiske perler er BSA, tung kæde af antistof og let kæde af antistof.
Figur 2. Anti-Flag MagBeads-rensning af flag-mærkede proteiner
1: E. coli-lysat indeholdende Flag-mærket protein 10 μL; 2: Supernatant efter inkubation af E. coli-lysat indeholdende Flag-mærket protein med magnetiske perler 10 μL; 3: Direkte kogning af Flag-mærket protein med Anti-Flag MagBeads 10 μL; 4: Direkte kogning af Anti-Flag MagBeads; 5: Markør
3.
Figur 3. Anti-GFP MagBeads-rensning af GFP-mærkede proteiner
1: E. coli-lysat indeholdende GFP-mærket protein 10 μL; 2: Supernatant efter inkubation af E. coli-lysat indeholdende GFP-mærket protein med magnetiske perler 10 μL; 3: Direkte kogning af GFP-mærket protein med Anti-GFP MagBeads 10 μL; 4: Direkte kogning af Anti-GFP MagBeads; 5: Markør
Produktinformation
| Produktnavn | Produktnummer | Specifikation |
| 20584ES03/08/25 | 1 ml/5 ml/25 ml | |
| 20586ES03/08/25 | 1 ml/5 ml/25 ml | |
| 20587ES03/08/25 | 1 ml/5 ml/25 ml | |
| 20565ES03/08 | 1 ml/5 ml | |
| Anti-HA MagBeads | 20566ES03/08 | 1 ml/5 ml |
| Anti-Myc MagBeads | 20567ES03/08 | 1 ml/5 ml |
| 20564ES03/08 | 1 ml/5 ml |