Baggrundsbeskrivelse
Proteinoprensning er processen med at isolere målproteinet fra de samlede proteiner i den eksperimentelle prøve, mens den biologiske aktivitet og kemiske integritet af målproteinet stadig bevares. Under konstruktionen af vektorer er det udover nogle nødvendige ekspressionselementer også nødvendigt at overveje kodonoptimering og valget af tags. At vælge det rigtige tag er ikke kun gavnligt for proteinoprensning og fremme af proteinopløselighed, men bør heller ikke påvirke strukturen og funktionen af proteinet og downstream-applikationer. Dette afsnit fokuserer på at introducere His og GST tags.
Tabel 1. His og GST Tag Introduktion
| Tag | Størrelse kDa | Sekvens | Renhed | Opløselighed | Fjernelse af tag | Tag Cleavage Enzyme |
| Hans | ~0,84 | HHHHHH | + | + | Ikke påkrævet | TEV Protease
|
| moms | 26 | Består af 211 aminosyrer | ++ | ++ | Påkrævet | 3C Protease/PSP |
His Tag Protein Affinity Purification
HisSep Ni-NTA Agarose Resin er baseret på stærkt tværbundet agarosegel som matrix, kemisk koblet med tetra-koordineret nitrilotrieddikesyre (NTA) som ligand og efter chelaterende nikkelioner (Ni)2+), danner den en meget stabil oktaedrisk struktur med nikkelioner i midten af oktaederet. Denne struktur kan beskytte nikkelioner mod angreb af små molekyler. Sammenlignet med Ni-IDA-harpiks er den mere stabil og kan modstå visse koncentrationer af reduktionsmidler, denatureringsmidler eller koblingsmidler under barske forhold. Sammenlignet med Ni-TED-harpiks har den en større adsorptionskapacitet for målproteiner. Det er blevet en af de uundværlige harpikser til oprensning af His-mærkede proteiner i laboratorier.
Figur 1. Produktprincipdiagrammet af His resin.
Tabel 2. Yeasen Hans rensningsproduktudvælgelsesvejledning
| Produktnummer | 20502ES | 20503ES | 20504ES/20505ES | 20561ES |
| Produktnavn | HisSep Ni-NTA Agarose Resin | HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF | HisSep Ni-NTA 6FF kromatografisøjle, 5 mL / 1 mL | HisSep Ni-NTA MagBeads |
| Matrix | Tværbundet 6% Agarose Gel | Meget tværbundet 6% Agarose Gel | Meget tværbundet 6% Agarose Gel | Magnetiske agarose mikrosfærer |
| Trykmodstand | 0,1 MPa, 1 bar | 0,3 MPa, 3 bar | 0.3 MPa, 3 bar | N/A |
| Kapacitet | ＞40 mg 6×His-mærket protein/ml matrix | ＞40 mg 6×His-mærket protein/ml matrix | > 40 mg 6×His-mærkede protein/mL magnetiske perler | |
| Oprensningsforslag | Matrix med gennemsnitlig trykmodstand, velegnet til inkubationsmetode, gravitationssøjle i lille skala rensning | Matrix med højtryksbestandighed, kan bruges til industriel storskala proteinoprensning med proteinoprensningsinstrument | Hurtig og bekvem proteinrensning gennem magnetisk adskillelse | |
| Tolerance | 8 M urinstof, 6 M saltsyre, 0,5-1 mM DTT, 1 mM EDTA osv. | |||
| Anvendelse | His-mærket proteinoprensning er det første valg, høj belastning, gennemsnitlig tolerance, især velegnet til prokaryot ekspressionsoprensningssystem | |||
Bilag: HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES) Produktegenskaber
- Sammenlignet med traditionelle færdigpakkede kolonner og harpikser er der ikke behov for multipel centrifugering af prøver og kontrol af prøvestrømningshastigheden, hvilket i høj grad reducerer oprensningstiden.
- Et-trins oprensning kan opnå en renhed på mere end 95 % af målproteinet.
- Højt målproteinudbytte: Udbyttet kan nå 70-80%.
- Kan genbruges op til 5 gange.
- Nem at justere koncentrationen og volumen af målproteinet.
- Lille proteintab og ingen risiko for proteindenaturering eller udfældning.
GST Tag Protein Affinity Oprensningsmedie
GST-tag-proteinaffinitetskromatografi udnytter den kovalente affinitet mellem GST-fusionsprotein og fikseret glutathion (GSH) gennem svovlbindinger og oprenser baseret på princippet om GSH-udvekslingseluering. I denne oprensning kombineres en glutathion med armen af gelen gennem en svovlbinding, og derefter bruges den specifikke aktionskraft mellem glutathion og glutathion S-transferase (dvs. GST-tag) til at få det GST-mærkede fusionsprotein til at kombinere med armens glutathion på gelen, hvorved det mærkede protein adskilles fra andre proteiner. Glutathion har normalt oxideret form GSSG og reduceret form GSH. Når vi bruger GSH-eluering, vil GSH konkurrere med gelens glutathion om at kombinere med fusionsproteinet og derved eluere målproteinet.
GSTSep Glutathione Agarose Resin er en GST-tag-proteinrensningsharpiks, strukturelt fremstillet ved kemisk kovalent at kombinere reduceret glutathion med 6% agarosegel som matrix gennem en 12-atomarm. Dette design har i høj grad forbedret oprensningseffektiviteten af harpiksen, hvilket gør det muligt at bære mere end 20 mg GST-fusionsprotein pr. milliliter medium. Produktet har god specificitet og omkostningseffektivitet og kan bruges til at oprense forskellige glutathion S-transferase, glutathionafhængige proteiner og glutathion rekombinante derivater i ét trin.
Tabel 3. Yeasen GST Purification Product Selection Guide
| Produktnummer | 20507ES | 20508ES | 20509ES/20510ES | 20562ES |
| Produktnavn | GSTSep Glutathion Agarose Resin | GSTSep Glutathion Agarose Resin 4FF | GSTSep Glutathione 4FF kromatografikolonne, 1 mL / 5 mL | GSTSep Glutathion MagBeads |
| Matrix | Tværbundet 6% Agarose Gel | Meget tværbundet 4% Agarose Gel | Meget tværbundet 4% Agarose Gel | Magnetiske agarose mikrosfærer |
| Trykmodstand | 0,1 MPa, 1 bar | 0,3 MPa, 3 bar | 0,3 MPa, 3 bar | N/A |
| Kapacitet | >20 mg GST-protein (40 kDa)/ml matrix | >10 mg GST-protein (40 kDa)/ml matrix | 5-10 mg GST tag fusionsprotein/ml magnetiske perler | |
| Anvendelse | Høj belastning, Matrix med gennemsnitlig trykmodstand, egnet til inkubationsmetode, gravitationssøjle i lille skala rensning, anbefales til laboratorie-skala kunder | Anvendelse Lav belastning, høj matrixtrykmodstand, kan bruges til industriel storskala proteinrensning med proteinrensningsinstrument, lettere at skalere op | Laveste belastning, hurtig og bekvem proteinrensning gennem magnetisk adskillelse | |
Tillæg: GSTSep Glutathione MagBeads (Cat#20562ES) Produktegenskaber
- Oprens direkte målproteiner med høj renhed fra biologiske prøver gennem magnetisk adskillelse i ét trin, hvilket i høj grad forenkler oprensningsprocessen og forbedrer oprensningseffektiviteten, velegnet til praktisk GST-fusionsproteinoprensning i videnskabelig forskning og industrielle områder.
- Ved at bruge denne magnetiske perle til GST Pull-down eksperimenter, da magnetisk adskillelse ikke kræver flere centrifugering og lange inkubationstider, er operationen enklere, hurtigere og mere automatiseret sammenlignet med traditionelle kromatografimetoder.
Produktinformation
| Produktpositionering | Produktnavn | Produktnummer | Specifikation |
| His Tag Protein Oprensning | HisSep Ni-NTA Agarose Harpiks | 20502ES10/50/60 | 10 ml/50 ml/100 ml |
| HisSep Ni-NTA Agarose Harpiks 6FF | 20503ES10/50/60 | 10 ml/50 ml/100 ml | |
| HisSep Ni-NTA 6FF kromatografisøjle, 5 ml | 20504ES08/25 | 5 mL/5x5 mL | |
| HisSep Ni-NTA 6FF kromatografisøjle, 1 ml | 20505ES03/08 | 1 mL/5x1 mL | |
| HisSep Ni-NTA MagBeads | 20561ES08/25 | 5 ml/25 ml | |
| GST Tag Protein Oprensning | GSTSep Glutathion Agarose Resin | 20507ES10/50/60 | 10 ml/50 ml/100 ml |
| GSTSep Glutathion Agarose Resin 4FF | 20508ES10/50/60 | 10 ml/50 ml/100 ml | |
| GSTSep Glutathione 4FF kromatografisøjle, 1 ml | 20509ES03/08 | 1 mL/5x1 mL | |
| GSTSep Glutathione 4FF kromatografisøjle, 5 ml | 20510ES08/25 | 5 mL/5x5 mL | |
| GSTSep Glutathione MagBeads | 20561ES08/25 | 5 ml/25 ml |