UCF.ME™ UltraNuclease, alternativt kendt som Totipotent nuklease, bredspektret nuklease og ikke-begrænsende inhibitorisk endonuklease, stammer fra Serratia Marcescen, men blev efterfølgende omkonstrueret og produceret af Yeasen Research & Development-teamet, udtrykt i E. coli. Det har en molekylvægt på 26,5 kD og et isoelektrisk punkt på 6,85. Det har bemærkelsesværdigt, at det har evnen til fuldstændigt at nedbryde nukleinsyre til 5'-monophosphat-oligonukleotider, der varierer fra 2 til 5 baser i længden. Både UltraNuclease og Salt Active UltraNuclease fungerer som fremragende alternativer til Benzonase.
1. Hvad er totipotent nuklease?
2. Hvad er brugsscenarierne for totipotent nuklease?
3. Hvilke fordele skal totipotent nuklease have?
4. FAQ
5. Relaterede produkter
1. Hvad er totipotent nuklease?
Totipotente nukleaser er genetisk modificerede endonukleaser med evnen til at nedbryde en lang række nukleinsyreformer, der omfatter enkeltstrengede, dobbeltstrengede, lineære, native og denaturerede nukleinsyrer. De genererer 5'-monophosphat-oligonukleotider med længder fra 3 til 5 baser og udviser ingen specifik basegenkendelse. Disse alsidige nukleaser udviser robust stabilitet og fordøjelsesaktivitet på tværs af forskellige forhold, hvilket gør dem yderst effektive til at fjerne nukleinsyrerester i prøver eller produkter. Dette forbedrer prøverens renhed og produkternes biologiske effektivitet, hvilket gør totipotente nukleaser til det foretrukne enzympræparat til videnskabelig forskning, vacciner og industrier såsom protein- og polysaccharid-lægemidler.
Desuden spiller totipotente nukleaser en afgørende rolle i fjernelse af nukleinsyrer under fremstillingen af vacciner, antistoffer, celleterapi og andre biologiske produkter, hvilket sikrer overholdelse af FDA-reglerne, som foreskriver, at resterende nukleinsyre i slutproduktet til terapeutisk brug ikke må overstige 10 pg/dosis. Ved at nedbryde nukleinsyrer reducerer totipotente nukleaser viskositeten af cellelysater, hvilket letter opløsningsfiltrering/ultrafiltreringsprocessen under oprensningen af celleafledte partikler såsom vira, AAV-vektorer og inklusionslegemer. Dette strømliner forarbejdningen, forbedrer centrifugering, forbedrer separationseffektiviteten af præcipitation og supernatant og øger effektiviteten af kromatografisk oprensning, hvilket i sidste ende øger udbyttet og produktrenheden.
2. Hvad er brugsscenarierne for totipotent nuklease?
UltraNuclease har en bred vifte af applikationer, og her er de specifikke brugsscenarier.
2.1 Virusrensning (lentivirus, AAV, rekombinant adenovirusvaccine, inaktiveret virus, onkolytisk virus osv.)
Anvendelsen af vira inden for den biomedicinske sektor udvides markant og spænder over anvendelser som vacciner, celleterapi, genterapi og forskellige andre områder. Værtsceller, der er ansvarlige for virusproduktion, er overvejende kontinuerlige passageceller (CCL'er). CCL'er udviser en genetisk disposition for ureguleret vækst, hvilket giver dem evnen til at formere sig på ubestemt tid. Tilstedeværelsen af resterende DNA fra CCL'er kan imidlertid udgøre potentielle risici, såsom ukontrolleret human celleproliferation, der fører til tumordannelse. Desuden kan disse resterende DNA-fragmenter indeholde infektiøse virale genomer, hvilket giver anledning til bekymringer om infektionsrisiko sammen med tumorigenese. Derfor er strenge kontrolforanstaltninger bydende nødvendigt for at håndtere det resterende DNA i biologiske produkter, for at sikre deres sikkerhed. I denne henseende er vores UCF.ME™ UltraNuclease tilbyder en sikker løsning til virusrensning.
Salt spiller en central rolle i at mindske protein- eller virusaggregering, hvilket letter adskillelsen af DNA og RNA fra proteiner og andre cellulære komponenter. Salt Active UltraNuclease, som er en uspecifik endonuklease, udviser optimal aktivitet ved høje saltkoncentrationer. Under forhold med højt saltindhold får enzymer forbedret adgang til frigivet DNA og RNA, hvilket øger deres nedbrydning. Nukleaser med øget aktivitet i miljøer med højt saltindhold viser sig at være mere effektive til at forbedre oprensningsprocesser. Salt Active UltraNuclease kan anvendes til at reducere viskositeten i cellesupernatanter og lysater, hvilket øger oprensningseffektiviteten under høje saltforhold. Dette enzym reducerer også værtsnukleinsyrerester til picogram-niveauet og øger derved ydeevnen og sikkerheden af forskellige biologiske produktanvendelser, herunder virusoprensning, vaccinefremstilling og produktion af protein- og polysaccharidlægemidler.
2.2 Oprensning af det rekombinante protein udtrykt i E. coli
Visse proteiner udtrykt i E. coli har en tendens til at aggregere til inklusionslegemer, hvilket komplicerer oprensningsprocessen, da de ofte bliver sammenflettet med værts-DNA'et. De resulterende sprængte bakterieceller kan udvise høj viskositet, hvilket væsentligt formindsker proteinoprensningseffektiviteten. Ved at introducere 10-50 U/mL UCF.ME™UltraNuclease til bakterieopløsningen under ultralydsafbrydelse og inkubere prøven ved enten 37°C i 30 minutter eller 4°C natten over efter afslutningen af afbrydelsen, kan viskositeten i bakterieopløsningen reduceres effektivt. Dette øger igen væsentligt effektiviteten af oprensningsprocessen. Sammenfattende kan du stole på vores UCF.ME™ UltraNuclease for at lette den effektive oprensning af proteinet.
2.3 Forhindre celleklumpning
I de senere år er brugen af kryokonserverede perifere mononukleære blodceller (PBMC) i immunoassays steget dramatisk. Det største kendetegn ved PBMC-celler er, at de er meget nemme at klumpe efter genoplivning, hvilket let kan føre til lav cellekvalitet og upålidelige testresultater. Når cellerne genoplives, tilsættes den passende koncentration (25-50 U/mL) af UCF.ME™UltraNuclease til dyrkningsmediet, og cellerne dyrkes sammen, hvilket effektivt kan forhindre celleklumpning. Derfor kan du få mest muligt ud af vores UCF.ME™ UltraNuclease for at øge oddsene for et vellykket resultat.
3. Hvilke fordele skal totipotent nuklease have?
3.1 Stort udvalg af applikationer
UCF.ME™ UltraNuclease kan skære og nedbryde forskellige former for DNA og RNA under en række eksperimentelle forhold og kan anvendes til at fjerne resterende nukleinsyre i forskellige biologiske produkter.
3.2 Høj renhed, høj enzymaktivitet
For vores UCF.ME™ UltraNuclease er dens enzymrenhed større eller lig med 99 % (HPLC), og dens enzymaktivitet er større eller lig med 1,5*106 U/mg (ved anvendelse af en absolut kvantitativ metode for generelt substrat).
3.3 Stærk tilpasningsevne
UCF.ME™ UltraNuclease har høj stabilitet ved opbevaring og fryse-optøning. Vi opbevarer UCF.ME™ UltraNuclease ved -20 °C, 4 °C og 37 °C for at detektere tendensen til enzymaktivitet. Ved placering ved 37 °C i 2 uger var der ingen signifikant ændring i enzymaktivitet.I mellemtiden, for at sikre enzymets stabilitet, bruger vi en kombination af tøris + ispose til transportere UCF.ME™ UltraNuclease til dit sted. Den har også stærk tolerance og kan tilpasse sig en række forskellige driftsforhold.
3.4 Overhold farmakopéen
UCF.ME™ UltraNuclease er fremstillet i UCF.ME (Ultra Clean Factory. Molecular Enzyme) er en slags ultrarent enzym. Hvad er et ultrarent enzym? Det er et molekylært enzym, der opnår kvalitetsstandarder uden HCD、HCR、HCP, DNASE FREE、RNASE FREE, ingen proteaserester, ingen mikrobielle rester, ingen patogener, animalsk oprindelse, antibiotikaforurening, ultralav endotoksinrest, høj enzymaktivitet og høj renhed osv. Derfor kan du trygt og stole på vores produkter osv.
3,5 GMP produktion
Hele processen med UltraNuclease-produktion afsluttes i GMP-produktionsværkstedet, og kvalitetsinspektionsplanen er strengt taget af farmakopé metode, der imødekommer den store efterspørgsel fra forskning og udvikling til produktion.
UCF.ME™ UltraNucleases partner —— UltraNuclease ELISA kit
I normale oprensningstrin, UCF.ME™ UltraNuclease fjernes let som en urenhed. For at påvise rester af UCF.ME™ UltraNuclease, YEASEN har udviklet det understøttende UltraNuclease ELISA kit, som nøjagtigt kan detektere rester af UCF.ME™ UltraNuclease i prøven. Sættet har fremragende linearitet, repeterbarhed, genvindingshastighed og specificitet.
UltraNuclease ELISA kit
Det lineære område er mellem 0,047 og 3 ng/ml, og R2 er større end 0,99. med god inter-batch-reproducerbarhed tilføjer vi en fast koncentration af UltraNuclease til prøven og bruger 3 forskellige batches af ELISA-kits til detektion. Detektionsgenvindingsgraden er mellem 70 % og 110 %, når nukleasekoncentrationen er mellem 3 og 0,186 ng/mL, og CV er mindre end 10 %. Hvad mere er, er de simulerede prøvegenvindingshastigheder for UltraNuclease med forskellige koncentrationer alle mellem 70 % og 130 % og er bedre end andre mærker. Det har også stærk specificitet, at vi evaluerede den ikke-specifikke binding af UltraNuclease-antistoffet til 8 almindelige prøver. Resultaterne af interferensgruppen og kontrolgruppen overlappede hinanden, og der blev ikke set interferens.
Efter UltraNucleases DMF-ansøgning har YEASEN opnået DMF'er på salt aktiv ultranuklease fra USA FDA.
Registreringsnummeret er:
| Antal | Produktnavn | Filnummer |
| 1 | UltraNuclease | MF037298 |
| 2 | Salt Active UltraNuclease | MF037815 |
4. FAQ
Q1: I hvilket trin skal man tilføje UltraNuclease?
A: Det afhænger af de prøver, du har at gøre med. Ved virusoprensning tilsættes det generelt efter virusafklaring; i E. coli-proteinoprensning kan det tilsættes, når cellerne lyseres; i forbindelse med celleklumpning kan det tilsættes direkte til mediet til samdyrkning med celler.
Q2: Hvis reaktionstemperaturen ikke kan nå 37°C, hvordan bruges den så?
EN: Enzymaktiviteten af UltraNuclease påvirkes af temperatur, behandlingstid og enzymaktivitetsenheder. Hvis temperaturen ikke kan nå 37°C, kan mængden af enzym tilsættes passende, eller inkubationstiden kan forlænges.
Q3: Er UltraNuclease kompatibel med proteasehæmmere?
EN: Kompatibel, men vær opmærksom på, at mange proteasehæmmere indeholder EDTA. Når EDTA begynder at være højere end 1 mM, vil EDTA hæmme aktiviteten af nogle nukleaser.
Q4: Hvordan fjerner man UltraNuclease?
EN: Det kan fjernes ved metoder såsom TFF, dialyse og kromatografiske søjler.
Q5: Kan UltraNuclease ELISA-kittet bruges til påvisning af andre mærker af totipotente nukleaserester?
EN: Vi anbefaler ikke at gøre dette. ELISA-kittet er fuldstændig udviklet baseret på UltraNuclease og kan nøjagtigt kvantificere UltraNuclease. Altipotente nukleaser af andre mærker kan være forskellige fra UltraNuclease med hensyn til sekvens og produktionsproces, og testresultaterne kan være unøjagtige.
5. Relaterede produkter
Produkterne leveret af Yeasen er som følger.
Tabel 1 Relaterede produkter
| Produktnavn | SKU | Specifikationer |
| 20157ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 20159ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 36701ES59 | 96T | |
| Salt aktiv UltraNuclease ELISA kit | 36703ES96 | 96T |