UltraNuclease, også kendt som en ikke-restriktiv endonuklease, bredspektret nuklease, er en ikke-specifik endonuklease afledt af Serratia Marcescen, som hydrolyserer interne phosphodiester-bindinger mellem alle nukleotider i nukleinsyrer for at producere 5'-monophosphatbaser af oligonucleot-5-længde. Det kan nedbryde DNA og RNA i forskellige former (dobbeltstrenget, enkeltstrenget, lineært, cirkulært, naturligt eller denatureret) under en meget bred vifte af betingelser (6 M Urea, 0,1 M Guanidin HCl, 0,4 % Triton X-100, 0,1 % SDS, 1 mM EDTA, 1 mM EDTA 1, og 1 mM EDTA syre er almindeligt anvendt, biologiske produkter. UltraNuclease kan også fjernes ved tilsvarende metoder efterfølgende.

Dette sæt bruger princippet om dobbelt-antistof sandwich enzym-linked immunosorbent assay (sandwich ELISA) til at detektere resterne af denatureret og ikke-denatureret UltraNuclease. Belæg først mikropladen med et polyklonalt anti-UltraNuclease-kanin-antistof for at danne et fastfase-antistof. For det andet, tilsæt UltraNuclease-standard og testprøve til fastfase-antistof-mikropladen, tilsæt derefter biotin-mærket Anti-UltraNuclease polyklonalt antistof, og tilsæt til sidst peberrodsperoxidase-mærket streptavidin (SA-HRP) for at danne et antistof + antigen + antistof-Biotin + SA-HRP-kompleks. Efterfølgende blev TMB-substrat tilsat til komplekset for at observere farvereaktion efter vask af komplekset. TMB omdannes til blåt under katalyse af HRP-enzym og omdannes til sidst til gult i nærvær af syre, og farvenuancen er positivt korreleret med mængden af ​​UltraNuclease i prøven.

Detektionskvantificeringsområdet for dette sæt er 0,047-3 ng/ml; den nedre detektionsgrænse er 23,5 pg/ml.

Feature

• Meget følsom: Registrerer så lidt som 23 pg/ml af UltraNuclease-rester i igangværende og endelige biologiske prøver.
• Sikrer nøjagtighed: UltraNuclease-resterne kan detekteres nøjagtigt med en genvinding på 80%-110%.
• Specificitet: Samarbejde brug med YEASEN UltraNuclease og kan nøjagtigt detektere resterne.
• Stabil: Forskellen mellem lot-til-lot er lav, sættets egenskab påvirkes ikke under 37 ℃ i 6 dage.
• Nem signalopsamling: Ved hjælp af Biotin-Streptavidin-systemet kan signalet forstørres stabilt.
• Komplet sæt: Alle nøglekomponenter er inkluderet i sættet, det er omkostningseffektivt i brug.

Anvendelse

• Residual UltraNuclease test i biologiske produkter

Specifikation

Komponenter

Forsendelse og opbevaring

UltraNuclease ELISA-sættet leveres med en ispose og kan opbevares ved 2°C ~8°C. Uåbnet produkt er gyldigt i et år. Når reagenset er åbnet, er det gyldigt i et halvt år. Frys aldrig dette produkt.

Opbevaring af de forberedte reagenser:

1. Den fortyndede vaskebuffer og fortyndingsbuffer kan opbevares ved 2°C ~8°C i 1 uge

2. Standard 36701-C er flydende og opbevares ved 2°C ~8°C i 1 år

3. Forberedt detektionsantistof og stopbuffer kan opbevares ved 2°C ~8°C i 1 måned

Figurer

• Specificitetsdemonstration

Figurer 1. Specificiteten af ​​UltraNuclease ELISA kit blev vist i figuren ovenfor.

8 mimic prøver blev estimeret for den ikke-specifikke reaktion med antistofferne i sættet. Der var ingen signifikant forskel mellem de 8 prøver og den negative prøve. （*: Signifikant forskel fra negativ prøve；NS: Ingen signifikant forskel fra negativ stikprøve）

• Præcisionsdisplay

EN)

B)

Figur 2. Præcisionen af ​​UCF.ME™ UltraNuclease ELISA blev analyseret som ovenstående ordning.

6 duplikerede blev testet ved hver koncentration på standardkurven, og alle CV% var lavere end 5% (figur 2A). 3 analytikere udførte UCF.ME™ UltraNuclease ELISA-eksperimentet, og CV% var lavere end 15% (figur 2B).

• Nøjagtighedsvalidering

EN)

B)

Figur 3. Nøjagtigheden af ​​UCF.ME™ UltraNuclease ELISA var analyseret som følgende skema.

UltraNuclease blev spiked i 5 μg/mL cellelyseopløsninger (HEK293, E.coli, CHO og Vero) uafhængigt med en endelig spiked konc. på 1,5 ng/ml. Nøjagtigheden i forskellige celleprøver viste fremragende end andre leverandører (Figur 3A). UltraNuclease blev tilsat en egentlig prøve (leveret af klienten) og er seriel 2 gange fortyndet fra 3 ng/ml til 0,093 ng/ml. Spikegenvindingen var alt mellem 80% ~ 110% (figur 3B).