Beskrivelse
Hieff CanaceTM Uracil+ High-Fidelity DNA-polymerase, er en ny generation af high-fidelity DNA Polymerase baseret på Pfu DNA-polymerase. The Hieff CanaceTM Uracil+ high-fidelity DNA-polymerase muliggør hurtige og nøjagtige PCR-reaktioner for komplekse skabeloner. Dens pålidelighed er væsentligt forbedret, og den undgår fuldstændig amplifikationsfejl forårsaget af brug af dUTP-holdige primere/skabeloner/dNTP'er. Produktet er udstyret med en optimeret enzymbuffer og tilføjelse af PCR-forstærkende komponenter, hvilket gør enzymet yderst effektivt og tilpasningsdygtigt til en lang række templates, velegnet til amplifikation af komplekse templates.
Produktkomponenter
| Komponentnummer | Komponenter | Kat #/størrelse | |
| 10145ES60 | 10145ES76 | ||
| 10145-A | Hieff Canace™ Uracil+ High-Fidelity DNA-polymerase (1 U/μL) | 100 μL | 500 μL |
| 10145-B | 2×Canace™ Uracil+ PCR-buffer (indeholdende Mg2+, dNTP'er) | 1 ml×3 | 1 ml x 15 |
Forsendelse og opbevaring
Komponenterne leveres med isposer og kan opbevares ved -20°C i 1 år.
Produktanvendelse
High-fidelity bibliotek amplifikation ved hjælp af dUTP-holdige primere/skabeloner/dNTP'er.
Forsigtig
1. For din sikkerhed og sundhed skal du bære laboratoriefrakker og engangshandsker til betjening.
2. Kun til forskningsbrug!
Instruktioner
Hieff CanaceTM Uracil+ High-Fidelity DNA-polymerase bruges på en lidt anderledes måde end konventionelle high-fidelity-enzymer. Læs venligst instruktionerne omhyggeligt før brug.
1. Anbefalet reaktionssystem
Alle operationer skal udføres på is. 2×CanaceTM Uracil+ PCR-buffer skal blandes godt efter optøning. Før systemkonfigurationen skal du forvarme PCR-instrumentet. Efter tilsætning af komponenterne blandes prøven godt med en pipette, og den drejes ned til bunden af røret, hvorefter den placeres i det forvarmede PCR-instrument til amplifikation. Efter brug skal alle komponenter returneres til -20 °C til opbevaring.
Tabel 1. PCR-amplifikationsreaktion
| Komponenter | Bind |
| Skabelon eller ligationsprodukt | X µL |
| 2×CanaceTM Uracil+ PCR-buffer (indeholder Mg2+, dNTP'er) | 25 µL |
| Fremadgående primer (10-25 μM) | 1-2,5 µL |
| Omvendt primer (10-25 μM) | 1-2.5 µL |
| Hieff CanaceTM Uracil+ High-Fidelity DNA-polymerase (1 U/µL) | 1 µL |
| ddH2O | I alt til 50 µL |
[Noter]:
1)Reagenser: Optø hver komponent tilstrækkeligt før brug;
2) Skabeloner: Brugen af oprensede DNA-skabeloner af høj kvalitet kan forbedre effektiviteten og succesraten for amplifikation betydeligt;
3)dNTPs: Den anbefalede endelige dNTPs-koncentration er 200 μM. DNTP'erne i sættet indeholder ikke dUTP. Hvis særlige omstændigheder kræver udarbejdelse af dUTP-holdige skabeloner, kan yderligere dUTP tilsættes til en slutkoncentration på 400 μM.
4) Polymerasekoncentration: 1 U/50 μL anbefales. Den kan optimeres mellem 0,5-2 U/50 μL, overskrid ikke 2 U/50 μL. For at forhindre polymerase i at nedbryde primere på grund af 3 '→5' exonuklidaktivitet, foreslås det at tilføje polymerase til reaktionssystemet i det sidste trin.
5)Mg2+ slutkoncentration: Slutkoncentrationen af systemet er 2 mM. Bed vores virksomhed om at levere buffer med lav Mg2+ koncentration eller uden Mg2+, hvis du har særlige behov.
2. Anbefalet reaktionsprocedure
Tabel 2. PCR-amplifikationsreaktionsprocedure
| Trin | Temperatur | Varighed | Antal cyklusser |
| Indledende denaturering | 98°C | 1 min | 1 |
| Denaturering | 98°C | 10 sek | 1~15 |
| Udglødning | 60°C | 30 sek | |
| Forlængelse | 72°C | 30 sek | |
| Endelig udvidelse | 72°C | 5 min | 1 |
| Holde | 4°C | - | - |
[Noter]:
1) Indledende denatureringstemperatur og tid: 98 ℃ anbefales. Den anbefalede tid er 30 sekunder for simple skabeloner såsom plasmid-DNA, 1 min for biblioteker, 3 min for komplekse skabeloner såsom cDNA og genomisk DNA og 5-10 min for skabeloner med højt GC-indhold.
2) Udglødningstemperatur og -tid: 60 ℃ anbefales, eller temperaturgradient kan sættes op for at finde den optimale temperatur til primerudglødning efter behov. Den anbefalede udglødningstid er 20 sek og kan justeres inden for 10-30 sek. For lang annealingstid kan føre til spredning af de amplificerede produkter på gelen.
3) Forlængelse temperatur og tid: 72 ℃ anbefales. Forlængelsetiden tilpasses efter faktiske behov.
Betaling og sikkerhed
Dine betalingsoplysninger behandles sikkert. Vi gemmer ikke kreditkortoplysninger og har heller ikke adgang til dine kreditkortoplysninger.
Forespørgsel
Du kan også lide
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.