Beskrivelse
Dette kit kan direkte og hurtigt udføre PCR-amplifikation af musevæv (såsom musehale, museøre, musetå, muskel osv.) og har stærk prøvekompatibilitet. Udstyret med en kraftig lysisbuffer kan dette kit hurtigt lysere prøver og frigive genomisk DNA. Lysatet kan tilsættes direkte til PCR-reaktionssystemet uden oprensning, og operationen er bekvem. Derudover kræver dette sæt lav prøveinput, og 5 mg musevæv eller 1-5 mm musehale kan bruges til eksperimenter.
2× Mouse Direct PCR-blandingen, der leveres af dette kit, er en hot-start PCR-reaktionsopløsning med en 2-fold koncentration. Den indeholder alle de komponenter, der bruges til PCR-amplifikation, undtagen skabelonen og primerne, hvilket i høj grad forenkler driftsprocessen og reducerer risikoen for kontaminering. Sættet kan bruges til transgen identifikation, mus genotyping osv.
Funktioner
- Mindre prøve påkrævet: 5 mg musevæv eller 1-5 mm musehale
- Praktisk skabelonforberedelse: ingen grund til at male, intet behov for at forfine og rense DNA, højere flux, tids- og pengebesparelse
- Optimeret PCR-system: med højere specificitet og stærkere tolerance for PCR-reaktionsinhibitor
Ansøgninger
- Identifikation af transgene mus
- Genotyping af mus
- Mus-gen-knockout-analyse
Specifikationer
| Produktspecifikation | Kit |
| Varm start | Indbygget Hot Start |
| Betingelser for transport | Isposer |
| Produkttype | Direkte PCR Kit |
| Anvende til (anvendelse) | Musehale, museøre, rottetå, indvolde, hud osv. |
Komponenter
| Komponenter nr. | Navn | 10185ES50 | 10185ES70 |
| 10185-A | Buffer ML | 5×1 ml | 20×1 ml |
| 10185-B | Buffer MT | 0,6 ml | 2×1,25 ml |
| 10185-C | 2× Mus Direct PCR Mix | 500 μL | 2×1 ml |
- a) Buffer ML er en lyseringsbuffer, der indeholder stærke proteindenatureringsmidler. Bær venligst handsker.
- b) Buffer MT er en stopbuffer, der bruges til at stoppe lyseringsfunktionen af Buffer ML.
- c) 2× Mouse Direct PCR Mix: Indeholder hot-start Taq DNA polymerase, dNTP mix, MgCl2, reaktionsbuffer, PCR reaktionsforstærker, optimeringsmiddel, stabilisator, elektroforese indikator farvestof osv.
Opbevaring
- Komponent A: Produktet skal opbevares ved 2°C~8°C i et år. For flergangsbrug i lang tid, undgå krydskontaminering.
- Komponent B/C: Produktet skal opbevares kl-25℃ ~ -15℃ i et år. Undgå venligst gentagen frysning-optøning.
Figurer
1. Målgen (inden for 1 kb) amplifikationsresultat
Figur 1.Velegnet til målgenamplifikation inden for 1 kb.
2. Demonstrationen af forlængelseshastigheden
Figur 2. 500bp-gen, forlængelseshastigheden kan være så hurtig som 1 sek./kb.
Citeret fra "TFPI er en colonkrypt-receptor for TcdB fra hypervirulent clade 2 C. difficile. Cell. 2022 Mar 17;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.010".
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI er en colonkrypt-receptor for TcdB fra hypervirulent clade 2 C. vanskelig. Celle. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] Zhao J, Chen J, Li YY, Xia LL, Wu YG. Brutons tyrosinkinase regulerer makrofag-induceret inflammation i den diabetiske nyre via NLRP3-inflammasomaktivering. Int J Mol Med. 2021;48(3):177. doi:10.3892/ijmm.2021.5010(IF:4.101)
| Fælles problem | Mulig årsag | Løsning |
| Der var ingen bånd i den positive kontrol og prøverne, der skulle testes. | PCR-reaktionssystemet eller reaktionsbetingelserne var ikke egnede. | Brug gradient PCR til at udforske de optimale reaktionsbetingelser for PCR. |
| Forkert opbevaring af PCR-reagenser mister aktivitet. | 2× Mouse Direct PCR Mix skal opbevares ved -20°C og undgå gentagen frysning og optøning under brug. Hvis den bruges ofte, kan den opbevares ved 4°C i kort tid. | |
| Primer design problemer. | Prøv at redesigne primerne for at tjekke. | |
| Den positive kontrol har et bånd af interesse, og prøven, der skal testes, har ingen bånd eller et svagt bånd. | Forkert opbevaring eller langvarig opbevaring kan forårsage tab af reagensaktivitet. | Brug friske reagenser. |
| Tilsæt vævslysat i overskud. | Forøg reaktionssystemet, eller reducer mængden af lysat. | |
| Prøvelyseblandingen er blevet opbevaret forkert eller opbevaret for længe, og DNA-genomet er blevet nedbrudt. | Lysatblandingen kan opbevares ved 4°C i 2-3 dage.Prøv at bruge en frisklavet lysatblanding til PCR. | |
| Mængden af tilføjet skabelon er ikke passende. | Mængden af tilsat skabelon blev optimeret inden for området 1-10% af reaktionssystemet. | |
| Utilstrækkeligt antal PCR-cyklusser. | Øg antallet af PCR-cyklusser, fortrinsvis 35-40 cyklusser. På grund af skabelonens kompleksitet bør PCR-reaktioner udføres med 5-10 flere cyklusser end med oprenset DNA-skabelon. | |
| Uspecifik amplifikation | PCR-annealingstemperatur for lav, cyklusnummer, primerkoncentration eller skabelonkoncentration for høj. | Forøg PCR-annealingstemperaturen og sænk PCR-cyklusnummer, primerkoncentration eller skabelonkoncentration. |
| PCR-primer-fejlparring. | Redesign PCR primere. | |
| Temperaturen er for høj ved klargøring af PCR-reaktionssystemet, eller tiden er for lang efter, at fremstillingen er afsluttet. | Fremstillingen af PCR-reaktionssystemet udføres ved lav temperatur, og PCR-amplifikationsreaktionen udføres så hurtigt som muligt, efter at fremstillingen er afsluttet. | |
| Målbånd vises i negativ kontrol | Forurening af driftsværktøj eller reagenser. | Alle reagenser eller udstyr i eksperimentet skal autoklaveres. Vær forsigtig og skånsom ved håndtering for at forhindre, at målsekvensen bliver suget ind i prøvepistolen eller spildt ud af centrifugerøret. |
| Krydskontaminering mellem prøver. | Hver prøvetager bruges kun til én prøve; eller efter at have taget en prøve, nedsænk prøvetagerens kant i 2 % natriumhypochloritopløsning, skyl gentagne gange og tør derefter resten med et rent køkkenrulle. |
Betaling og sikkerhed
Dine betalingsoplysninger behandles sikkert. Vi gemmer ikke kreditkortoplysninger og har heller ikke adgang til dine kreditkortoplysninger.
Forespørgsel
Du kan også lide
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.