Beskrivelse
Plantevæv direkte PCR kit er et kit, der direkte kan forstærke forskellige typer planteblade ved PCR, med bred tilpasningsevne og stærk stabilitet. Sættet bruger et unikt lyseringsbuffersystem, som hurtigt kan lysere en række planteprøver og frigive genomisk DNA. Det frigivne genomiske DNA kan anvendes direkte som en skabelon uden at fjerne protein, RNA eller sekundære metabolitter i PCR-reaktion. Derudover kræver sættet en lille mængde prøve, så lavt som 1 mm planteblade kan bruges til eksperimenter.
2×Plant Master Mix, der leveres i dette kit, har stærk amplifikationskompatibilitet og kan direkte bruge lysatet af prøven som en skabelon til effektiv og specifik amplifikation. Dette reagens er en 2 gange koncentreret PCR-reaktionsblanding, som indeholder alle de komponenter, der anvendes til PCR-amplifikation, undtagen skabelonen og primerne, hvilket i høj grad forenkler driftsprocessen og reducerer risikoen for kontaminering.
Sættet kan bruges til identifikation af transgene planter, plantegenotypning mv.
Forsendelse
Produkterne sendes med isposer.
Opbevaring
1. Reagens 10187-A [Buffer P1] kan opbevares ved 4 ℃ i 1 år.
2. Reagens 10187-B [Buffer P2], bruges til at neutralisere lysat, som er gavnligt til at opbevare prøven i længere tid og kan opbevares ved 4 ℃ i 1 år.
3. Reagens 10187-C [2× Plant Master Mix] kan opbevares ved -20 ℃ i 1 år. Undgå gentagen frysning og optøning.
Forsigtig
1. Når man laver bladforsøg, anbefales det at bruge friskopsamlet bladvæv. Hvis det er et langtidsfrosset væv, skal det opbevares ved -80°C. Gentagen frysning og optøning bør undgås så meget som muligt for at undgå skabelonnedbrydning og påvirke PCR-effektiviteten. Bladvævet er velegnet til unge blade. Hvis det er et modent blad, skal du undgå at bruge vævet i bladets hovedåre.
2. Det anbefales at amplificere fragmentet inden for 1 kb i længden for den bedste amplifikationseffektivitet.
3. Ved prøveudtagning skal du bruge en hulmaskine eller kniv til at tage en prøve af passende størrelse. Når prøverne er forskellige, skal hulstansen eller kniven rengøres hver gang, før prøven behandles.
4. For bladvæv anbefales det at tage 1-10 mm blade, for lille bladlængde vil føre til lavt PCR-amplifikationsudbytte, for meget vil hæmme PCR-reaktionen, brug metoden med termisk krakning, mæskning med pipettespids og knusning med kværn til behandling af planteblade. Efter behandling skal den rystes og centrifugeres. Sørg for at tage supernatanten til test. Udfældning vil alvorligt hæmme PCR-reaktionen.
5. For din sikkerhed og sundhed skal du bære laboratoriefrakker og engangshandsker til betjening.
6. Dette produkt er KUN til forskningsbrug!
| Almindelige problemer | Mulige årsager | Løsninger |
| Der var ingen bånd i den positive kontrol og prøverne, der skulle testes. | PCR-reaktionssystemet eller reaktionsbetingelserne var ikke egnede. | Brug gradient PCR til at udforske de optimale reaktionsbetingelser for PCR. |
| Forkert opbevaring af PCR-reagenser inaktiverer dem. | 2×PCR Mix skal opbevares ved -20℃, undgå gentagen frysning og optøning under brug. Hvis den bruges ofte, kan den opbevares ved 4°C i kort tid. | |
| Primer design problemer. | Prøv at redesigne primerne for at tjekke. | |
| Den positive kontrol har et bånd af interesse, og prøven, der skal testes, har ingen bånd eller et svagt bånd. | Forholdet mellem lyseringsbuffer og neutraliseringsbuffer er uhensigtsmæssigt, og lysisblandingen vil påvirke pH-værdien af PCR-systemet. | Under normale forhold bør pH-værdien af den neutraliserede lysisblanding være omkring 7-8 (lyseproduktet og buffer P2 bør neutraliseres i nøje overensstemmelse med forholdet 5:1). |
| Prøvelyseblandingen er blevet opbevaret forkert eller for længe, og DNA-genomet er blevet nedbrudt. | Lysatblandingen kan opbevares ved 4°C i 5 dage, prøv at bruge en frisklavet lysatblanding til PCR. | |
| Mængden af tilføjet skabelon er ikke passende. | Optimer mængden af skabelon tilsat inden for området <5% af reaktionssystemet. | |
| Utilstrækkeligt antal PCR-cyklusser. | Øg antallet af PCR-cyklusser passende, fortrinsvis 35-40 cyklusser. På grund af skabelonens kompleksitet er det generelt bedre at bruge 5-10 flere cyklusser af PCR-reaktion end at bruge oprenset DNA-skabelon. | |
| Uspecifik amplifikation | PCR-annealingstemperatur for lav, cyklusnummer, primerkoncentration eller skabelonkoncentration for høj. | Øg PCR-annealingstemperaturen og sænk PCR-cyklusnummer, primerkoncentration eller skabelonkoncentration. |
| PCR primer mismatch. | Redesign PCR primere. | |
| Temperaturen er for høj ved klargøring af PCR-reaktionssystemet, eller anbringelsestiden er for lang efter fremstillingen. | Fremstillingen af PCR-reaktionssystemet udføres ved lav temperatur, og PCR-amplifikationsreaktionen udføres så hurtigt som muligt, efter at fremstillingen er afsluttet. | |
| Målbånd vises i negativ kontrol | Forurening af driftsværktøj eller reagenser. | Alle reagenser eller udstyr i eksperimentet skal autoklaveres.Vær forsigtig og skånsom ved håndtering for at forhindre, at målsekvensen bliver suget ind i prøvepistolen eller spildt ud af centrifugerøret. |
| Krydskontaminering mellem prøver. | Hver prøvetager bruges kun til én prøve; eller efter at have taget en prøve, nedsænk prøvetagningsbladet i 2 % natriumhypochloritopløsning, skyl gentagne gange og tør derefter resten med et rent køkkenrulle. |
Betaling og sikkerhed
Dine betalingsoplysninger behandles sikkert. Vi gemmer ikke kreditkortoplysninger og har heller ikke adgang til dine kreditkortoplysninger.
Forespørgsel
Du kan også lide
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.