Beskrivelse
Hieff® Blood Advanced Direct PCR-kittet er et kit, der direkte kan amplificere fuldblodsprøver uden DNA-oprensning eller prøveforbehandling, og det er kompatibelt med frisk blod, kølet (frosset) blod og kommercielle tørrede blodpletter, der indeholder konventionelle antikoagulantia, såsom EDTA, heparin, citrat osv. Sættet indeholder en kombination af genetisk modificeret DNA og DNA-fideltorisk resistens over for PCR. 2× Hieff® Blood Advanced PCR-buffer med stærk forlængelsesfaktor, amplifikationsforstærkningsfaktor og optimeret buffersystem til effektivt at amplificere 8 kb af genomiske fragmenter under hurtige forlængelsesbetingelser og indstille 3-5 sek/kb forlængelsestid for fragmenter under 2 kb, hvorved tiden for blodprøveidentifikation og -testning væsentligt forkortes.
Specifikationer
| Troskab (vs. Taq) | 1 × |
| Hot Start | Ja |
| Overhæng | 3'-A |
| Polymerase | Taq DNA-polymerase (kat.: 10726) |
Komponenter
| Ingen. | Navn | 10188ES20 | 10188ES60 |
| 10188-A | 2× Hieff® Blood Advanced PCR-buffer | 500 μL | 2,5 ml |
| 10188-B | Hieff® Avanceret High-Fidelity DNA Polymerase Mix | 20 μL | 100 μL |
| 10188-C | Positiv kontrol primerblanding (10 μM hver) | 100 μL | 200 μL |
| 10188-D | 10× DNA-ladningsbuffer | 1 ml | 1 ml |
Instruktioner
Anbefalede PCR-reaktionssystemer.
| Komponenter | Volumen (μL) |
| ddH2O | til 50 μL |
| 2× Hieff® Blood Advanced PCR-buffer | 25 μL |
| Fremadprimer (10 μM) | 2 μL |
| Reverse Primer (10 μM) | 2 μL |
| Hieff® Avanceret High-Fidelity DNA Polymerase Mix | 1 μL |
| Blodprøve | X |
2. En slutkoncentration på 0,4 μM pr. primer anbefales, for høj vil resultere i uspecifik amplifikation.
3. Den optimale fuldblodsskabelonkoncentration går fra 0,5 % til 20 %, og den anbefalede anvendelse er 10 % som den indledende prøvetilstand, det vil sige, at 5 μL fuldblod tilsættes som skabelon til 50 μL reaktionssystemet, idet man sørger for at undgå aspirerende blodpropper. For tørrede blodpletter gemt på Whatman®-filterkort kan ca. 1 mm2 runde stykker papir med blodpletter tages og amplificeres direkte ind i PCR-reaktionen uden forbehandling.
Reaktionsprogram
| Cyklus trin | Temp. | Tid | Cykler |
| Indledende denaturering | 95℃ | 5 min | 1 |
| Denaturering | 95℃ | 15 sek | 30-35 |
| Udglødning | 60℃ | 15 sek | |
| Forlængelse | 72℃ | 3-10 sek/kb | |
| Finale forlængelse | 72℃ | 5 min | 1 |
Udglødningstemperaturen er en generisk Tm-værdi eller 1-2°C under primerens Tm-værdi. Hvis amplifikationsproduktet er mindre specifikt, kan der etableres en annealingstemperaturgradient for at finde optimale annealingsbetingelser.
Forlængelsestid på 10 sek/kb kan amplificere de fleste af målfragmenterne under 8 kb, og 3-5 sek/kb kan amplificere de fleste fragmenter under 2 kb. Hvis amplifikationseffektiviteten er lav, kan tiden passende forlænges til 20-30 sek/kb og bør ikke overstige 60 sek/kb.
Forsendelse og opbevaring
Produkterne skal opbevares ved -15℃ ~ -25℃ for 1 år
Figurer
Noter
1. Det anbefales, at blodskabelonen bruges som 10 % af det totale reaktionsvolumen, dvs. 5 μL fuldblod tilsættes 50 μL reaktionssystemet som skabelon, idet man sørger for at undgå aspirerende blodpropper.
2. Forlængelsestid på 10 sek/kb kan amplificere de fleste af målfragmenterne under 8 KB, og 3-5 sek/kb kan amplificere de fleste af fragmenterne under 2 KB. Hvis forstærkningseffektiviteten er lav, kan tiden forlænges til 30 sek/kb.
3. Efter PCR-reaktionen anbefales det at centrifugere reaktionsproduktet ved 4000 rpm (1000× g) i 1-3 minutter for at udfælde blodcellefragmenter og tage supernatanten til nedstrømsanalyse.
4. Dette produkt kan ikke bruges direkte til medicinsk diagnose.
5. For din sikkerhed og sundhed skal du bære en laboratoriefrakke og engangshandsker.
Betaling og sikkerhed
Dine betalingsoplysninger behandles sikkert. Vi gemmer ikke kreditkortoplysninger og har heller ikke adgang til dine kreditkortoplysninger.
Forespørgsel
Du kan også lide
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.