Quick T4 DNA Ligase er et enkelt enzymprodukt, der kan bruges til ligering af DNA-fragmenter og adaptere i processen med NGS-bibliotekskonstruktion. Dette produkt er blevet verificeret ved high-throughput sekventering og har fremragende kvalitet. For kunder, der ikke har brug for eksperimentel systemjustering, anbefales det at købe Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module (kat#12607).

Produktkomponenter

Forsendelse og opbevaring

Produktet sendes med isposer og kan opbevares ved -20°C i to år.

Enhedsdefinition

I et 20 μL ligeringsreaktionssystem, når 6 μg λDNA-Hind Ⅲ reageres ved 16 ℃ i 30 minutter, blev den mængde enzym, der kræves for at give mere end 50 % ligering af DNA-fragmenterne, defineret som én enhed (U).

Forsigtig

1. Hvis der forekommer en lille mængde nedbør, når bufferen smelter, bedes du vende og blande godt før brug;

2. For din sikkerhed og sundhed skal du bære laboratoriefrakker og engangshandsker til betjening.

3. Dette produkt er KUN til forskningsbrug!

Instruktioner

1. De nuværende almindelige DNA-biblioteksbyggesæt renses generelt ikke efter end-reparation og A-Tailing-behandling og udfører direkte adapterligering. Se venligst følgende forberedelse til reaktionssystemet. Vortex grundigt, centrifuger kort og inkuber i 15 minutter ved 20°C.

[Bemærk]: *50 % PEG 6000 er ikke inkluderet i sættet, du skal forberede det selv.

**Se følgende tabel for antallet af adaptere.

***Mængden af ​​anvendt Quick T4 DNA Ligase kan tilsættes 1-5 μL efter behov.

2. Kvaliteten og koncentrationen af ​​adaptere, der anvendes, påvirker direkte ligeringseffektivitet og biblioteksudbytte. For meget adapterbrug kan producere flere adapterdimerer, mens lavere brug kan påvirke ligeringseffektiviteten og biblioteksudbyttet. Følgende tabel viser den anbefalede mængde adaptere, der bruges i forskellige input-DNA-situationer ved brug af dette sæt.

[Bemærk]: Input DNA mol (pmol)≈ Input DNA(ng)/ [0,66 × Input DNA gennemsnitslængde(bp)].

Adapterligeringsberegningseksempel: Hvor meget adapter skal tilføjes, når input-DNA er 100 ng og længden er 300 bp?

Trin 1: Beregn antallet af mol input DNA. Formel: Input DNA mol (pmol)≈ Input DNA(ng)/ [0,66 × Input DNA gennemsnitlig længde(bp)]; Input DNA-mol (pmol) = 100 ÷ (0,66 x 300) = 0,5 pmol;

Trin 2: I henhold til ovenstående tabel skal du beregne antallet af mol adapter tilføjet.; Når input-DNA'et er 100 ng, er det molære forhold mellem adaptere: input-DNA 100:1, og antallet af mol adaptere tilføjet = 100 × 0,5 pmol = 50 pmol;

Trin 3: Beregn adapterens tilsætningsvolumen. Adapterkoncentration = 15 μmol/L (hvis du bruger en anden virksomheds adapter, skal du bestemme dens koncentration i henhold til instruktionerne); Volumen af ​​adapter tilføjet = mol adapter tilføjet (50 pmol) ÷ koncentration af adapter (15 μmol/L) = 3,34 μL (Bemærk: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL);

Sammenfattende er volumen, som adapteren kan tilføjes, 3,4 μL. (Bemærk: Adapterens maksimale tilsætningsvolumen overstiger ikke 5 μL).