Figur 3. Ligering af ultralange fragmenter. Resultaterne viser, at antallet af kolonier i 10923ES er højt, med en positiv rate på 100%. A: Rekombinant transformationsplade. Det molære forhold mellem vektoren (21 kb) og insertfragmentet (4,5 kb) er 1:2.B: PCR-identifikationselektroforese af insertfragmentet, M: Yeasen 10505ES.Vektormængde: 200 ng i et 20 μL reaktionssystem, reaktionsbetingelser: 50°C, 40 min.
Beskrivelse
Hieff Clone™ Universal II One Step Cloning Kit er et nyligt opgraderet kloningskit.
Den omhyggeligt optimerede 2. generation 2× Hieff Clone™ Universal II Enzyme Premix kombinerer det rekombinante enzym og den buffer, der kræves til den rekombinante reaktion, med tilføjelsen af en unik rekombinant forstærker for at forbedre effektiviteten af rekombinant kloning væsentligt.
Sættet kan rettes til at klone PCR-produkter til et hvilket som helst sted i enhver vektor, kompatibelt med urensede PCR-produkter, direkte genvundne PCR-produkter, lav koncentration af gummiudvundne produkter, dette produkt kan gensamle det homologe arm-GC-indhold på 30%-70% af ledfragmentet. Vektoren var fuldstændig lineariseret, og homologe sekvenser af enden af den lineariserede vektor på 15-25 bp blev indført i 5'-enden af de positive og reverse PCR-primere af det indsatte fragment, således at 5'- og 3'-enderne af PCR-produkterne af det indsatte fragment havde nøjagtig den samme sekvens af henholdsvis de to lineariserede vektorer svarende til de to endelige. Under påvirkning af rekombinant enzym kan den rekombinante reaktion af PCR-produkt og lineariseret vektor fuldføres på så lidt som 5 minutter ved 50 ℃. Den positive kloningsrate kan nå mere end 95%.
Funktioner
Simpelt: Klon op til seks DNA-fragmenter i en enkelt reaktion.
Fleksibel: Designretningslinjer tillader samling i enhver vektor efter eget valg.
Effektiv: Effektiv til ligering af et til syv fragmenter.
Ansøgninger
Hurtig Kloning: Det tillader flere overlappende DNA-fragmenter at blive sømløst forbundet i en et-trins, 5-50 minutters isotermisk reaktion.
Instrueret kloning; Sted-dirigeret mutagenese.
Specifikationer
| Ligation | Op til 7 fragmenter |
| Produkttype | DNA samling |
Komponenter
| Komponenter nr. | Navn | 10923ES05(5 T） | 10923ES20(20 T） | 10923ES50(50 T） |
| 10923-EN | 2 × Hieff klonTM Universal II Enzyme Premix | 50 μL | 200 μL | 500 μL |
| 10923-B | 500 bp kontrolindsats (25 ng/μL) | 5 μL | 5 μL | 5 μL |
| 10923-C | pUC 19 kontrolvektor, lineariseret (50 ng/μL) | 5 μL | 5 μL | 5 μL |
Opbevaring
Dette produkt skal opbevares ved -25~-15 ℃ i 1 år.
Figurer
Figur 1. 10 ng lav-input enkelte fragmenter blev forbundet i den ikke-genoplivningsreceptive tilstand af det 6μL lille system. Resultaterne viste, at 10923ES havde bedre ydeevne end konkurrerende produkter, med høj forbindelseseffektivitet, flere kolonier og en positiv rate på 100%. AB: Clony plade. Det molære forhold mellem bærer (10 kb) og indsat fragment (1 kb) var 1:2. C: Elektroforesekort identificeret ved insertionsfragment PCR, M: YEASEN 10505ES.
Figur 2. Seks fragmenter (en total længde på 7,6 kb) blev klonet ind i et 11,6 kb plasmid. Resultaterne viste, at 10923ES havde bedre ydeevne end konkurrerende produkter med flere kolonier og en positiv rate på 100%. AB: Koloniplade. Det molære forhold mellem bærer (11,6 kb) til indsættelse af fragmenter var 1:2. C: Elektroforeseanalyse af insertionsfragmentet, M: YEASEN 10505ES. Plasmid input:200 ng/20 μL, 50°C, 50 min.
Relaterede citater og referencer:
[1] Zhang H, Shao S, Zeng Y, et al. Reversibel faseadskillelse af HSF1 er påkrævet for en akut transkriptionel respons under varmechok. Nat Cell Biol. 2022;24(3):340-352. (IF:28.824)
[2] Xu Y, Yu Q, Wang P, et al. En selektiv c-Myc-nedbryder med lille molekyle regresserer potentielt dødelige c-Myc-overudtrykkende tumorer. Adv Sci (Weinh). 2022;9(8):e2104344. (IF:16.806)
[3] Guan B, Jiang YT, Lin DL, Lin WH, Xue HW. Fosfatidinsyre undertrykker autofagi gennem kompetitiv hæmning ved at binde GAPC (glyceraldehyd-3-phosphat dehydrogenase) og PGK (phosphoglycerat kinase) proteiner [publiceret online forud for tryk, 2022 15. marts]. Autofagi. 2022;1-15. (IF:16.016)
[4] He X, Li Y, Chen Q, et al. O-GlcNAcylering og stabilisering af SIRT7 fremmer progression af bugspytkirtelkræft ved at blokere SIRT7-REGγ-interaktionen [publiceret online forud for tryk, 2022 14. april]. Celledød er forskellig. 2022;10.1038/s41418-022-00984-3.(IF:15.828)
[5] Zhou T, Zhu X, Ye Z, et al. Lupus enhancer risikovariant forårsager dysregulering af IRF8 gennem samarbejdsvillig lncRNA og DNA methyleringsmaskineri. Nat Commun. 2022;13(1):1855. Udgivet 2022 6. april. (IF:14.919)
[6] Li T, Chen X, Qian Y, et al. En syntetisk BRET-baseret optogenetisk enhed til pulserende transgenekspression, der muliggør glukosehomeostase i mus. Nat Commun. 2021;12(1):615. Udgivet 2021 27. januar. (IF:14.919)
[7] Wu P, Zhang T, Liu B, et al. Mekano-regulering af peptid-MHC klasse I konformationer bestemmer TCR-antigengenkendelse. Mol Cell. 2019;73(5):1015-1027.e7. (IF:14.548)
[8] Xiong L, Liu S, Chen S, et al. En ny type DNA-phosphorothioation-baseret antiviralt system i archaea. Nat Commun. 2019;10(1):1688. Udgivet 2019 11. april. (IF:11.878)
[9] Jiang L, Wang Y, Xia A, et al. En naturlig single-nukleotid polymorfi variant i sulfit reduktase påvirker svovl assimilering i majs. Ny Phytol. 2021;232(2):692-704. (IF:10.152)
Betaling og sikkerhed
Dine betalingsoplysninger behandles sikkert. Vi gemmer ikke kreditkortoplysninger og har heller ikke adgang til dine kreditkortoplysninger.
Forespørgsel
Du kan også lide
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.