Beskrivelse
Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye) er et hurtigt omvendt transkriptionskit udviklet baseret på Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Ingen farvestof), velegnet til PCR-amplifikation og RT-qPCR-eksperimenter. Sammenlignet med Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Ingen farvestof), det kan prale af stabile detektionshastigheder, specificitet og udbyttesikkerhed, med den samlede revers transkriptionstid potentielt reduceret til mindre end 6 minutter, hvilket signifikant forkorter eksperimentel varighed.
Sættet inkluderer gDNA Digester Mix, som kan eliminere genomisk DNA-kontamination, der er tilbage i RNA-skabelonen, hvilket sikrer mere pålidelige efterfølgende resultater. Sættet indeholder to typer cDNA-synteseprimere: Random Primere N6 og Oligo (dT)18. Brugere kan vælge mellem Random Primere N6, Oligo (dT)18eller genspecifikke primere som revers transkriptionsprimere i overensstemmelse med deres behov. Det syntetiserede enkeltstrengede cDNA-produkt kan anvendes direkte til efterfølgende PCR- eller qPCR-reaktioner.
Specifikationer
| Kat.nr. | 11150ES10 / 11150ES60 |
| Størrelse | 10 T/100 T |
Komponenter
| Komponenter nr. | Navn | 11150ES10 | 11150ES60 |
| 11150-A | 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (ingen farvestof) | 50 μL | 500 μL |
| 11150-B | 5×gDNA Digester Mix | 20 μL | 200 μL |
| 11150-C | Tilfældige primere (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-D | Oligo d(T)18 Primere (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-E | RNase-frit vand | 200 μL | 2×1 ml |
Opbevaring
Dette produkt skal opbevares ved -25~-15 ℃ til 1 år.
Instruktioner
- Hvis eksperimentet kræver fjernelse af resterende genomisk DNA
1) gDNA-fordøjelse
I et RNase-frit centrifugerør forberedes følgende blanding og pipetteres forsigtigt for at blande godt. Inkuber ved 42 ℃ i 2 minutter.
| Komponenter | Volumen (μL) |
| RNase-frit vand | Til 10 μL |
| 5× gDNA Digester Mix | 2 μL |
| Total RNA* | 10 pg-5 μg |
| eller mRNA* | 10 pg-500 ng |
* Det anbefales, at inputmængden af Total RNA ikke må overstige 2 μg. Hvis ekspressionsniveauet af målgenet er lavt, kan inputmængden øges til maksimalt 5 μg Total RNA.
2） Forberedelse af omvendt transkriptionsreaktionssystem (20 μL system)
| Komponenter | Volumen (μL) |
| reaktionsopløsningen fra det foregående trin | 10 μL |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (ingen farvestof) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Primere (50 μmol/L)** | 2 μL |
| eller Random Primere (* for qPCR) (50 μmol/L)** | eller 2 μL |
| RNase-frit vand | Til 20 μL |
* Mængden af primere kan justeres i henhold til mængden af skabeloninput. Hvis revers transkriptionsproduktet bruges til qPCR-eksperimenter, kan Random Primere tilsættes i systemet i henhold til den anbefalede mængde.
** Det anbefales først at tilføje 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (ingen farve), bland godt og derefter tilsætte revers transkriptionsprimeren for at sikre, at primeren ikke påvirkes af gDNA Digester.
3） Indstillinger for omvendt transskriptionsprocedure
| Temp. | Tid |
| 55℃* | 5 min** |
| 85℃ | 5 sek |
* For skabeloner med højt GC-indhold eller komplekse skabeloner kan den omvendte transkriptionstemperatur øges til 60 ℃.
** Dette produkt kan syntetisere cDNA-sekvenser under 14 kb. Hvis du har brug for længere cDNA-produkter, kan du passende forlænge revers transkriptionstiden.
- Hvis eksperimentet ikke kræver fjernelse af genomisk DNA
1） Forberedelse af omvendt transkriptionsreaktionssystem (20 μL system)
| Komponenter | Volumen (μL) |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (ingen farvestof) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Primere (50 μmol/L)** | 2 μL |
| eller Random Primere (* for qPCR) (50 μmol/L)** | eller 2 μL |
| Total RNA* | 10 pg -5 μg |
| eller mRNA | 10 pg - 500 ng |
| RNase-frit vand | Til 20 μL |
* Det anbefales, at inputmængden af Total RNA ikke må overstige 2 μg. Hvis ekspressionsniveauet af målgenet er lavt, kan inputmængden øges til maksimalt 5 μg Total RNA.
** Mængden af primere kan justeres i henhold til mængden af skabeloninput. Hvis revers transkriptionsproduktet bruges til qPCR-eksperimenter, kan Random Primere tilsættes i systemet i henhold til den anbefalede mængde.
2） Indstillinger for omvendt transskriptionsprocedure
| Temp. | Tid |
| 55℃* | 5 min** |
| 85℃ | 5 sek |
* For skabeloner med højt GC-indhold eller komplekse skabeloner kan den omvendte transkriptionstemperatur øges til 60 ℃.
** Dette produkt kan syntetisere cDNA-sekvenser under 14 kb. Hvis du har brug for længere cDNA-produkter, kan du passende forlænge revers transkriptionstiden.
Noter
- Alle operationer bør udføres på is og bør udføres på en måde, der undgår RNase-kontamination.
- Dette produkt er kun til forskningsbrug.
- Brug venligst laboratoriefrakker og engangshandsker, for din sikkerhed.
Dokumenter:
Betaling og sikkerhed
Dine betalingsoplysninger behandles sikkert. Vi gemmer ikke kreditkortoplysninger og har heller ikke adgang til dine kreditkortoplysninger.
Forespørgsel
Du kan også lide
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.