Beskrivelse
Globin mRNA-udtømningsprobe (menneske) er designet til at fjerne humant Globin mRNA. Det kan effektivt fjerne Globin mRNA fra voksen, spædbarn og embryonic kilder, herunder HBA1/2, HBB, HBD, HBM, HBG1/2, HBE1, HBQ1 og HBZ. Dette produkt bruges sammen med Hieff NGSTM MaxUp rRNA Depletion Kit (menneske/mus/rotte) (Yeasen#12253) til effektivt at fjerne rRNA og Globin mRNA fra totalt RNA. Dette sæt er velegnet til både intakte og nedbrudte RNA-prøver. RNA-prøverne efter rRNA- og Globin-mRNA-fjernelse kan bruges til high-throughput-sekventeringsanalyse af mRNA og ikke-kodende RNA, som signifikant øger andelen af gyldige data i sekventeringsresultater og cDNA-syntese eller andre downstream-applikationer.
Produktanvendelse
Velegnet til 100 ng~1 μg total RNA-prøver mennesker, mus og rotte blodressource, og for både intakte eller delvist nedbrudte RNA-prøver.
Produktkomponenter
| Produktnavn | Specifikation | |
| Globin Probe (menneske) | 12806ES24 | 24 T |
| 12806ES96 | 96 T |
Forsendelse og opbevaring
Alle komponenterne leveres med tøris og kan opbevares ved -20°C i et år.
Figur
I alt 500 ng og 100 ng totalt RNA fra humant blod gennemgik henholdsvis rRNA-fjernelse og kombineret rRNA & Globin-fjernelse. Efter bibliotekskonstruktion og sekventering blev indholdet af Globin mRNA sammenlignet.
Forsigtig
1. Brug venligst forbrugsstoffer, der er fri for RNase-kontamination, og rengør forsøgsområdet regelmæssigt. Det anbefales at bruge ThermoFishers RNAZapTM højeffektiv nukleinsyrefjernelsesspray for at fjerne RNase-kontamination.
2. RNA-prøven bør være fri for genomisk DNA-kontamination. Hvis gDNA forbliver i prøven, skal den fordøjes med DNase I og oprenses før brug.
3. Det maksimale inputvolumen af RNA-prøve er 10 μL. Hvis prøvevolumenet er stort, kan det koncentreres først.
4. For din sikkerhed og sundhed skal du bære laboratoriefrakker og engangshandsker til betjening.
5. Kun til forskningsbrug!
Instruktioner
1. Probehybridisering til RNA
1.1 Fortynd 10 ng-1 μg total RNA med nukleasefrit vand til et slutvolumen på 10 μL i et PCR-rør. Behold RNA på is.
1.2 Samle følgende RNA/probe hybridiseringsreaktion på is ifølge tabel 1.
Tabel 1 RNA/probe hybridiseringsreaktion
| Komponenter | Volumen (μL) |
| Hybridiseringsbuffer | 3 |
| Probe Mix (H/M/R) | 1 |
| Globin Probe (menneske) | 1 |
| Total RNA | 10 (100 ng~1 μg) |
| Total | 15 |
1.3 Bland grundigt ved forsigtigt at pipettere op og ned mindst 10 gange. Drej kortvarigt røret ned i en mikrocentrifuge for at opsamle væsken fra siden af røret.
1.4 Placer røret i en termocykler og kør følgende program i tabel 2 med det opvarmede låg indstillet til 105°C.
Tabel 2 Reaktionsprogram for RNA/probe hybridisering
| Temperatur | Varighed |
| Varmt låg 105°C | På |
| 95°C | 2 min |
| 95°C-22°C | 0,1°C/s |
| 22°C | 5 min |
| 4°C | holde |
2. RNase H Fordøjelse
2.1 Saml følgende RNase H-fordøjelsesreaktion på is ifølge tabel 3.
Tabel 3 RNase H-fordøjelsesreaktion
| Komponenter | Volumen (μL) |
| RNase H-buffer | 3 |
| RNase H | 2 |
| Hybridiseret RNA (trin 1.4) | 15 |
| Total | 20 |
2.2 Bland grundigt ved forsigtigt at pipettere op og ned mindst 10 gange. Drej kortvarigt røret ned i en mikrocentrifuge for at opsamle væsken fra siden af røret.
2.3 Placer røret i en termocykler og kør følgende program: låg 50°C; 37°C, 30 min; 4°C, hold.
3. DNase jeg Fordøjelse
3.1 Saml følgende DNase I-fordøjelsesreaktion på is i henhold til tabel 4.
Tabel 4 DNase Ⅰ-fordøjelsesreaktion
| Komponenter | Volumen (μL) |
| DNase I-buffer | 27,5 |
| DNase I | 2.5 |
| RNase H-behandlet RNA (trin 2.3) | 20 |
| Total | 50 |
3.2 Bland grundigt ved forsigtigt at pipettere op og ned mindst 10 gange. Drej kortvarigt røret ned i en mikrocentrifuge for at opsamle væsken fra siden af røret.
3.3 Placer røret i en termocykler og kør følgende program: låget af; 37°C, 30 min; 4°C, hold.
4. RNA-oprensning
4.1 Udlign Hieff NGSTMRNA Cleaner (Cat#12602) til stuetemperatur og resuspender perlerne grundigt ved vortexing før brug.
4.2 Tilføj 110 µL (2,2×) perler til RNA-opløsningen fra trin 3.3 og bland grundigt ved at pipettere op og ned mindst 10 gange.
4.3 Inkuber ved stuetemperatur i 5 minutter for at binde RNA til perlerne.
4.4 Anbring røret på et magnetisk stativ for at adskille perlerne fra supernatanten. Når opløsningen er klar (ca. 3 minutter), kasseres supernatanten. Pas på ikke at røre ved perlerne med pipettespidserne.
4.5 Hold røret på det magnetiske stativ. Tilsæt 200 µL frisklavet 80 % ethanol til røret. Inkuber ved stuetemperatur i 30 sekunder og kassér derefter supernatanten. Pas på ikke at røre ved perlerne med pipettespidserne.
4.6 Gentag trin 4.5 én gang for i alt to vaske.
4.7 Fjern resterende ethanol med 10 µL - pipettespidser. Hold røret på det magnetiske stativ, og lufttør perlerne i op til 5 minutter med låget åbent.
4.8 Fjern røret fra det magnetiske stativ. Eluer RNA'et fra perlerne ved at tilsætte 11 μL nukleasefrit vand. Bland grundigt ved at pipettere op og ned mindst 10 gange og drej kortvarigt røret.
4.9 Inkuber i 5 minutter ved stuetemperatur. Placer røret på det magnetiske stativ, indtil opløsningen er klar (~ 3 minutter).
4.10 Overfør 10 µL af supernatanten til et nukleasefrit rør.
Bemærk: Hvis du har brug for at stoppe på dette tidspunkt, kan prøverne opbevares ved –80°C.
Betaling og sikkerhed
Dine betalingsoplysninger behandles sikkert. Vi gemmer ikke kreditkortoplysninger og har heller ikke adgang til dine kreditkortoplysninger.
Forespørgsel
Du kan også lide
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.