Beskrivelse
Hifair™ Super Reverse Transcriptase er en næste generations revers transkriptase, hvilke var engineret fra M-MLV. Dette enzym mangler RNase H-aktivitet og udviser væsentligt forbedret termisk stabilitet og tolererer reaktionstemperaturer på op til 70°C. Det er særdeles velegnet til effektiv revers transkription af RNA-skabeloner med komplekse sekundære strukturer.
Ansøgninger
Dette produkt er velegnet til RT-PCR, RT-qPCR, RT-LAMP, RNA-seq og cDNA synteseeksperimenter. Temperaturen for omvendt transkriptionsreaktion kan nå op til 70°C.
Enhedsdefinition
En enhed (U) enzymaktivitet er defineret som den mængde enzym, der kræves for at inkorporere 1 nmol dTTP i syreuopløseligt materiale inden for 10 minutter ved 37°C, ved at anvende Poly(A).Oligo(dT) som template-primeren.
Komponent
| Komponent | Navn | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | Hifair™ Super Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
Opbevaringsbetingelser
Opbevares ved -25˚C til -15˚C i op til 18 måneder.
Brugsvejledning
Første-strengs cDNA-synteseprocedure
1. RNA-denaturering (valgfrit trin)
1. RNA-denaturering hjælper med at åbne sekundære strukturer, hvilket væsentligt forbedrer førstestrengs cDNA-udbytte.
| Komponent | Bind |
| RNase-fri ddH2O | til 13 μL |
| Oligo(dT)18 (50 μM) eller tilfældige primere (50 μM) eller genspecifikke primere (2 μM) | 1 μL |
| Skabelon RNA | Total RNA: 10 pg - 5 μg eller mRNA: 10 pg - 500 ng |
· Opvarm ved 65°C i 5 minutter, afkøl derefter hurtigt på is i 2 minutter.
· Centrifuger kort for at opsamle reaktionsvæsken og tilsæt reaktionsblandingen til omvendt transkription som vist nedenfor.
2. Opsætning af omvendt transkriptionsreaktion (20 μL system)
| Komponent | Bind |
| Reaktionsblanding fra det foregående trin | 13 μL |
| 5× reaktionsbuffer | 4 μL |
| dNTP-mix (10 mM) | 1 μL |
| Hifair® Super Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
| RNase-hæmmer (40 U/μL) | 1 μL |
3. Indstillinger for omvendt transskriptionsprogram
| Temperatur | Tid |
| 25°C* | 5 min |
| 50-70°C | 15-30 min |
| 85°C** | 5 min |
*Når du bruger Random Primere, inkuberes ved 25°C i 5 minutter. Hvis du bruger Oligo(dT)18 eller Gene-Specific Primere, kan dette trin udelades.
85°C opvarmning i 5 minutter inaktiverer revers transkriptase og kan justeres efter behov.
Det omvendte transkriptionsprodukt kan bruges med det samme til efterfølgende PCR- eller qPCR-reaktioner, opbevares kortvarigt ved -20°C eller til langtidsopbevaring ved -80°C efter alikvotering for at undgå fryse-tø-cyklusser.
Forholdsregler
1. Oprethold et rent laboratoriemiljø; bære rene handsker og masker. Sørg for, at alle eksperimentelle forbrugsstoffer er RNase-fri for at forhindre kontaminering.
2. Udfør alle operationer på is for at forhindre RNA-nedbrydning.
3. Brug RNA-prøver af høj kvalitet for at sikre effektiv revers transkription.
4. Dette produkt er kun til forskningsbrug.
5. For din sikkerhed og sundhed skal du bære en laboratoriefrakke og engangshandsker, mens du håndterer produktet.
Dokumenter:
Betaling og sikkerhed
Dine betalingsoplysninger behandles sikkert. Vi gemmer ikke kreditkortoplysninger og har heller ikke adgang til dine kreditkortoplysninger.
Forespørgsel
Du kan også lide
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.