Beskrivelse
ArCas12a, afledt af CRISPR-systemet af Agathobacter rectalis bakterier og også kendt som Cpf1, er et monomert protein bestående af 1263 aminosyrer. Som et klasse II (type V) medlem af CRISPR/Cas-systemet fungerer ArCas12a udelukkende gennem et enkelt effektorprotein og udviser signifikante forskelle fra Cas9, såsom målretning af motiver rige på T, der ikke kræver transaktiverende crRNA, producerer klæbrige ender ved DNA-dobbeltstrengsbrud, deltager i RNA-nuklease-aktivitet og besidder DNA-nukleaseaktivitet.
ArCas12a mangler HNH-domænet og kan uafhængigt bruge dets RuvC-domæne til at genkende PAM-regionen rig på thymin (T) i 5'-enden af målnukleinsyren under vejledning af CRISPR RNA (crRNA), hvilket initierer spaltning af mål-DNA'et. Det er med succes blevet brugt til genomredigering i mange pattedyr og planter. Derudover udviser ArCas12a trans-spaltningsaktivitet, der er i stand til vilkårligt at skære ikke-mål enkeltstrenget DNA (ssDNA) i reaktionssystemet.
Sammenlignet med andre LbCas12a/AsCas12a demonstrerer ArCas12a højere temperaturtilpasningsevne (25-55oC), hvilket gør den velegnet til genomredigering og nukleinsyredetektionsapplikationer.
Funktioner
Bredt reaktionstemperaturområde: Udviser spaltningsaktivitet inden for temperaturområdet 25-55oC
Lav nukleaserester: Ingen resterende exonuklease, nickase eller RNase
Cis-spaltningsaktivitet: Meget effektiv spaltning af dobbeltstrenget DNA in vitro
Trans-spaltningsaktivitet: Høj trans-spaltningsaktivitet, velegnet til nukleinsyrepåvisning
Ansøgninger
CRISPR/Cas-genredigering
Diagnostik og detektion baseret på CRISPR/Cas-systemet
Andre detektionsapplikationer kombineret med isotermiske nukleinsyreamplifikationsteknologier (RPA og LAMP) osv.
Specifikationer
| Kilde | Cpf1 genet fra Agathobacter rectalis udtrykkes gennem rekombinant ekspression i E. coli |
| Molekylvægt | 149 KDa |
| PAM sekvens | TTTN eller TTTV |
| Reaktionsbetingelser | 50 mM NaCI, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, pH 7.9 @25oC |
| Koncentration | 10 µM |
| Renhed | >95 % (SDS-SIDE) |
| Inaktiveringsbetingelser | 85oC, 5-10 min |
Komponenter
| Komponenter Ingen. | Navn | 14702ES65 | 14702ES80 |
| 14702-A | ArCas12a Nuclease (10 μM) | 100 μL | |
| 14702-B | 10×ArCas12a reaktionsbuffer | 1 ml | 1 ml |
Forsendelse og opbevaring
Dette produkt bør opbevares ved -25 ~ -15oC i 2 år.
Figurer
Figur 1. Test af ArCas12a cis-spaltningsaktivitet: M: Markør; C: Template dobbeltstrenget DNA (dsDNA)
Note: Under vejledning af crRNA kan det effektivt spalte dsDNA (600 bp) for at producere to fragmenter (200 bp + 400 bp).
Figur 2. ArCas12a Trans-spaltningsaktivitetstestresultater
Note: Ved at bruge dsDNA som mål blev ArCas12a, crRNA og en ssDNA-reporterprobe (indeholdende en fluorescerende reportergruppe) tilføjet til in vitro-spaltning. Når ArCas12a danner et kompleks med crRNA og mål-DNA'et, aktiverer det trans-spaltningsaktivitet, skærer ssDNA-reporterproben og udsender derved fluorescens.
Dokumenter:
Sikkerhedsdatablad
Manualer
Betaling og sikkerhed
Dine betalingsoplysninger behandles sikkert. Vi gemmer ikke kreditkortoplysninger og har heller ikke adgang til dine kreditkortoplysninger.
Forespørgsel
Du kan også lide
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.