De Magnetisk Rest DNA Prøve Forberedelseskit er egnet for de forbehandling af resterende DNA i forskellige biologiske prøver. Det kan maksimere adskillelsen og oprensningen af ​​spormængder af værtscelle-resterende DNA i prøver ved at bruge unikke magnetiske perler og en omhyggelig optimeret buffersystem.

Det magnetiske Resterende DNA prøveforberedelseskit kan anvendes med en række forskellige værtscellers resterende DNA detektionskit, inklusive CHO-værtscelle-DNA-restdetektionskit (Kat#41301ES), HEK293 Værtscelle DNA-restdetektionskit (Kat#41302ES), Vero værtscelle DNA-restdetektionskit (Kat #41303ES), og E.coli værtscelle DNA-restdetektionskit (Kat #41304ES).

Produktkomponenter

Forsendelse og opbevaring

1. Del I sendes med en ispose, 4°C i 1 år eller -20°C til langtidsopbevaring.

2. Del II sendes ved stuetemperatur og opbevares i 1 år ved stuetemperatur.

3. Del III sendes på tøris og opbevares ved -20°C i 1 år.

4. Efter at have modtaget varerne, bedes du kontrollere, om de tre komponenter i del I, del II og del III er komplette, og opbevare dem straks i den tilsvarende opbevaringstemperatur.

Forsigtig

1. Læs venligst brugsanvisningen omhyggeligt før brug, og brug i nøje overensstemmelse med brugsanvisningen. Prøvebehandling anbefales at udføres på en ren bænk eller et biologisk sikkerhedsskab.

2. Vær opmærksom på, om der er nedbør eller uklarhed af opløsningen opbevaret ved stuetemperatur (især når rumtemperaturen er lav som om vinteren), du kan tage et vandbad ved 37°C, indtil opløsningen er klar for at undgå at påvirke brugseffekten.

3. Der kan være resterende magnetiske perler under eluering, så prøv at undgå at aspirere magnetiske perler, når du tager prøver.

4. Skift spidserne ofte for at undgå krydskontaminering, når du arbejder med dette produkt.

5. For din sikkerhed og sundhed skal du bære personlige værnemidler (PPE), såsom laboratoriefrakker og engangshandsker, når du arbejder med dette produkt.

6. Dette produkt er KUN til forskningsbrug!

Forberedelse

1. Selvforsynet udstyr: hvirvelryster, vandbad eller metalbad, centrifuge, magnetisk separationsstativ, Hangzhou Aosheng Auto-Pure32A automatisk nukleinsyreekstraktor eller andre mærker af fuldautomatisk nukleinsyreekstraktor.

2. Selvforsynende forbrugsstoffer: 10μL-1000μL filterspidser med lav adsorption, 1,5 mL centrifugerør med lav adsorption, PCR-rør eller 96-brønds plader og tilsvarende rørhætter eller membraner.

3. Selvfremstillede reagenser: absolut ethanol (analytisk kvalitet), 1×PBS-buffer (pH 7,4, fri for Mg- og Ca-ioner), ultrarent vand.

4. Til den første brug tilsættes vandfri ethanol med den mængde, der er angivet på etiketten eller i instruktionerne, til flaskerne med vaskeopløsning A* og vaskeopløsning B*, bland grundigt inden brug, og marker dem godt. Luk flasken tæt efter brug for at opretholde ethanolniveauet i flasken.

Manuel resterende DNA-ekstraktion

1. Prøvebehandling

1.1 Hvis prøven indeholder et relativt højt DNA-indhold, såsom en vaccine, bedes du fortynde den i et passende forhold med 1×PBS-buffer (pH 7.4, fri for Mg- og Ca-ioner) og derefter ekstraheres (fortynding af prøven er for at få påvisningsværdien til at ligge inden for standardkurvens lineære område og derefter sikre nøjagtigheden af ​​påvisningen. og sædvanligvis kan en 100 gange fortynding overvejes).

1.2 Hvis prøven, der skal testes er et tørt pulver, fortynd det til 10 mg/ml eller 100 mg/ml med ultrarent vand før brug.

1.3 Hvis prøven har en kompleks matrix, skal der udføres et standardtilsætnings- og genvindingseksperiment for at bestemme den passende fortynding.

2. Tilføj 100 μL prøve til 1,5 mL rør, tilsæt derefter 100 μL lysisbuffer, 10 μL proteinase K, vortex og bland i 10 sek.

[Noter]: Tilsæt 10 μL proteinase K, hvis koncentrationen af ​​proteinprøven er 0-100 mg/mL, og tilsæt 20 μL proteinase K, hvis koncentrationen af ​​proteinprøven er 100-200 mg/mL.

3. Inkuber ved 60°C i 20 min.

4. Tilføj derefter 400 μL af bindingsopløsningen, 9 μL glykogen og 6 μL Poly A kaliumsalt, og vortex og bland godt.

5. Tilsæt 20 μL magnetiske perler, vortex og bland godt, og lad stå i 10 minutter. Vortex og bland det i 10 sekunder hvert 3. min.

[Noter]: De magnetiske perler skal vortexes før brug for at sikre, at de magnetiske perler er grundigt resuspenderet. Efter tilsætning af prøver 4-5 gange ad gangen, anbefales det at blande igen.

7. Centrifuger kort for at få opløsningen ned, og anbring centrifugerøret på magnetstativet i 1-2 minutter. Efter at de magnetiske perler er fuldstændig absorberet, skal du forsigtigt fjerne væsken.

8. Tilsæt 500 μL vaskeopløsning A (tjek venligst, om absolut ethanol er tilsat før brug), ryst eller vortex for at blande for at sikre, at de magnetiske perler er spredt, og at der ikke er nogen magnetiske perler samlet på centrifugerørets væg.

9. Centrifuger kort, og anbring centrifugerøret på et magnetisk stativ i 1-2 minutter. Efter at de magnetiske perler er fuldstændig absorberet, skal du forsigtigt fjerne væsken.

10. Tilsæt 500 μL vaskeopløsning B (tjek venligst om absolut ethanol er tilsat før brug) ryst eller vortex for at blande for at sikre, at de magnetiske perler er spredt og ingen magnetiske perler samles på centrifugerørets væg.

11. Centrifuger kort, og anbring centrifugerøret på et magnetisk stativ i 1-2 minutter. Efter at de magnetiske perler er fuldstændig absorberet, skal du forsigtigt fjerne væsken.

12. For at sikre, at den resterende væske fjernes så meget som muligt, centrifugeres røret i 10 sek anbring den hurtigt på et magnetisk stativ, og brug en 10 μL pipette til at aspirere den resterende væske.

13. Åbn hætten på røret og lad det stå ved stuetemperatur i 3 minutter indtil ethanolen er helt fordampet. Ingen refleksion eller tilsynekomst af revner på overfladen af ​​de magnetiske perler indikerer, at ethanolen er fuldstændig fordampet.

14. Fjern røret fra det magnetiske stativ, tilsæt 50-100 μL forvarmet eluat ved 65°C, ryst og bland godt. Centrifuger derefter kortvarigt, inkuber det ved 65°C i 5 minutter, ryst og bland en gang hvert 2.-3. minut.

15. Centrifuger kort igen, anbring centrifugerøret på et magnetisk stativ i 2 minutter. Efter at de magnetiske perler er fuldstændigt adsorberet, overføres forsigtigt DNA-opløsningen til et nyt centrifugerør og opbevares ved -20°C eller ved -80°C til langtidsopbevaring.