Concanavalin A (ConA) perler er superparamagnetiske polymermikrosfærer, der er blevet kovalent koblet med Concanavalin A (en plante mannose/glucosebindende lektin isoleret fra frøene af kornplanter) på deres overflade. Disse perler besidder flere bemærkelsesværdige egenskaber, herunder monodispersitet og stærk magnetisk reaktivitet. Når Ca²⁺ og Mg²⁺ ioner er til stede, kan ConA magnetiske perler effektivt og hurtigt adskille og oprense forskellige biomolekyler såsom polysaccharider, glycoproteiner og glycolipider ved at udnytte affiniteten mellem ConA globulin A og de terminale α-D-mannose- og α-D-glucosegrupper.

ConA magnetiske perler tilbyder en bekvem metode til at adskille eller fiksere celler, hvilket sikrer minimalt celletab under efterfølgende vasketrin. Derudover kan de anvendes til opsamling og fiksering af kerner. Desuden finder disse perler nytte i innovative teknikker såsom CUT & Run og CUT & Tag, som er revolutionerende tilgange, der bruges i ChIP-seq eksperimenter.

Sammenfattende er ConA magnetiske perler kraftfulde værktøjer til effektiv oprensning af biomolekyler, bekvem celleadskillelse og fiksering, indsamling af kerner og anvendelse i banebrydende eksperimentelle teknikker.

Specifikationer

Karakteristika

Figurer og tabeller

Tabel 1. Yeasen ConA-perlerne har høj indfangningshastighed. Mængden af ​​Concanavalin A (ConA) anvendt i forhold til mikrosfærerne er blevet verificeret for at sikre maksimal bindingskapacitet og samtidig forhindre overdreven aggregering af magnetiske perler efter cellebinding i CUT&Tag eksperimenter. For eksempel kan brug af 10 μL ConA-coatede perler binde en mængde celler svarende til E7-niveauer med en bindingseffektivitet på over 98%.

Figur 1. Yeasen ConA-perler viser høj dispersitet. I perlemærkningsprocessen blev en ikke-biologisk fugemasse valgt for at sikre en effektiv lukning uden at blive påvirket af batch-til-batch variationer. Dette garanterer fremragende forsegling af de magnetiske perler, og bevarer deres høje monodispersitet under opbevaring af ConA-coatede perler, hvilket er gavnligt for effektiv binding til kulhydratmolekyler i efterfølgende eksperimenter.

Figur 2. CUT&Tag kromatinsignalfordeling ved hjælp af Yeasen Con A Beads.

Opbevaring

Dette produkt skal opbevares ved 2~8 ℃ i 2 år.

Instruktioner

De følgende operationer tager oprensning af glycoproteiner eller isolering af celler som et eksempel, som for CUT&Tag eksperimenter , se Yeasen Cat# 12598ES for protokol.

1. Klargøring af buffere

1）Kundeleveret

1. Nødvendige materialer ikke inkluderet: magnetisk stativ, Eppendorf-rør, PCR-rør, magnetiske stativer, termocyklere osv.
2. Udligne Perler ved stuetemperatur i mindst 30 min. Resuspender perlerne grundigt ved at vortexe eller ryste flasken.

1. Prøvehåndtering ( tage pattedyrceller som eksempel ）

1. Forbered pattedyrceller (1,0 × 10 ⁴~1.0×10 ⁵ celler), centrifuger (4℃，600×g, 3~5 min) og forsigtigt kassere supernatanten.
2. Tilsæt 140 μL bindingsbuffer, bland godt og resuspender cellerne, centrifuger og opsaml (4℃，600×g, 3~5 min), forsigtigt kassere supernatanten.
3. Tilsæt 90 μL bindingsbuffer, bland godt og resuspender cellerne.
   Forsigtig: Tæt vedhængende pattedyrsceller kan opnås ved delvis fordøjelse ved hjælp af et enzym som trypsin. For dyrevæv, planteceller eller svampeceller kræver opnåelse af dispergerede celler eller protoplaster ofte specielle behandlinger, der er skræddersyet til deres specifikke egenskaber.

1. Forbered ConA-perler

1. Pipetter forsigtigt ConA-perlerne til fuldstændig suspension, placer 10 μL af perlesuspensionen i et nyt 200 μL centrifugerør.
2. Tilsæt 40 ​​μL bindingsbuffer, bland godt og stil på det magnetiske stativ i 1 min. og kassér supernatanten, efter at de magnetiske perler er adsorberet til centrifugerørets sidevæg.
3. Tilsæt 10 μL bindingsbuffer, bland godt og resuspender ConA-perlerne.

1. Prøvebinding

1. Tilføj den forberedte celleprøve til de forbehandlede perler, pipetter forsigtigt de resuspenderede perler, og inkuber derefter på en omvendt mixer (stuetemperatur 30 min eller 4 ℃ natten over).
2. Stå på et magnetisk stativ i 1 min, vent på, at de magnetiske perler adsorberer til centrifugerørets sidevæg, kassér forsigtigt supernatanten.
3. Tilføje 500 μL elueringsbuffer til celle-ConA-perlekomplekset og Pipetter forsigtigt til resuspender perlerne, så Stå på et magnetisk stativ i 1 min, vent på, at de magnetiske perler adsorberer til centrifugerørets sidevæg, kassér forsigtigt supernatanten.
4. Gentag trin 3) tre eller fire gange mere.

1. Eluering

1. Til glycoproteiner, tilsæt 50~250 μL elueringsbuffer, pipetter forsigtigt de resuspenderede perler og inkuber derefter på en omvendt mixer (stuetemperatur i 10~30 min). Efter inverteret blanding, stå på et magnetisk stativ i 1 min., opsaml supernatanten til et nyt 1,5 ml rør til trin SDS-PAGE eller Western blot.
2. For celle, ingen grund til eluering.

Noter

1. Udligne ConA perler ved stuetemperatur før brug.
2. Undgå frysning, ellers nedbrydning af perlematerialet eller tab af aktivitet.
3. ConA kræver tilstedeværelsen af ​​Ca2+ og Mn2+ ioner for at være aktive, så reagenser indeholdende EDTA eller andre metalionchelatorer bør undgås under eksperimentet.
4. Når de inkuberes med celler, kan ConA-perler aggregere, hvilket er normalt og ikke påvirker den normale brug af magnetiske perler.
5. Dette produkt er kun til forskningsbrug.
6. Brug venligst laboratoriefrakker og engangshandsker, for din sikkerhed.

Manuel