Polyacrylamidgel (PAGE gel) bruges ofte til proteinelektroforese for at realisere proteinseparation. Denne form for gel er generelt sammensat af koncentreret gel og separationsgel. Førstnævnte spiller rollen som at koncentrere proteinprøver, mens sidstnævnte adskiller proteiner af forskellige størrelser i henhold til koncentrationen af ​​acrylamidmonomer og N,N-methylenbisacrylamid (methylenacrylamid) tværbindingsmiddel, der anvendes i gelen.

Dette sæt indeholder en række forskellige reagenser, der kræves til hurtig fremstilling af PAGE-gel. Brugere behøver kun at forberede deres eget gelpræpareringsudstyr for at forberede gel, hvilket i høj grad forenkler gelpræparationsprocessen. Gelen fremstillet af dette kit kan kun bruges til denaturerende PAGE-gelelektroforese. Denne specifikation kan fremstille omkring 125 stykker minigel (beregnet ved 0,75 mm tyk gel).

Specifikationer

Komponenter

Forsendelse og opbevaring

Produktet sendes med ispose og kan opbevares ved 2℃~8℃ i 1 år.

Instruktioner: Det anbefales ikke at konfigurere for mange stykker gel på én gang for at undgå at tilføje den øverste opløsning for sent (2-3 stykker anbefales højst)

1.Vælg den passende gelkoncentration i henhold til molekylvægten af ​​målproteinet (se tabel 1)

2.Gelfremstillingsproces (tag et stykke 0,75/1,0/1,5 mm Mini gel som eksempel)

2.1 Tag et lige stort volumen separationsgelbuffer og separationsgelopløsning og bland dem, dvs. tag henholdsvis 2,0/2,7/4,0 ml af de to opløsninger.

2.2 Afvej 0,1 g ammoniumpersulfat og opløs det i 1 ml deioniseret vand. Kunden skal selv købe ammoniumpersulfatet.

2.3 Tilsæt 35/45/70 μL APS til den blandede opløsning i trin 1 (den anvendte mængde APS kan reduceres til det halve, hvis størkningen er for hurtig) og blandes helt.

2.4 Injicer opløsningen i trin 2 i gelfremstillingsglaspladen. Bemærk, at den koncentrerede gel skal sprøjtes ind i gelformen inden for 2 minutter efter, at separationsgelen er tilsat, og hældningen af ​​den koncentrerede gel skal være langsom for at forhindre blanding af den koncentrerede gel og separationsgelen. Hvis den enkelte har svært ved at konfigurere, kan den også tilpasses til at konfigurere koncentreret gel efter forsegling med ethanol.

2.5 Fremstilling af koncentreret gel: Tag et lige stort volumen koncentreret gelbuffer og koncentreret gelopløsning, dvs. tag henholdsvis 0,5/0,75/1,0 ml af de to opløsninger, og tilsæt derefter 10/13/18 μL APS og bland godt.

2.6 Sprøjt det ind i gelfremstillingsglaspladen, og indsæt kamtænderne (anvend ikke overdreven kraft til forsigtigt at indsætte kamtænderne).

2.7 Efter at den koncentrerede gel er størknet i 15 min, kan kamtænderne fjernes og bruges til elektroforese. Bemærk: prøv venligst at bruge frisklavet elektroforesebuffer.

Noter

1. Det foreslås, at spændingen under elektroforese skal være mellem 100-120 V. Hvis det er nødvendigt at accelerere elektroforesehastigheden, kan den øges til 150 V.

2. Før gelpåfyldning skal du sørge for at afbalancere gelopløsningen til stuetemperatur (opbevar den f.eks. i flere minutter) for effektivt at undgå dannelse af bobler i gelen.

3. Kunden skal selv købe ammoniumpersulfatet. Vi anbefaler at bruge produktet med Cat#A3678 fra Sigma.

4. Mængden af ​​ammoniumpersulfatopløsning er kun til reference, og den faktiske mængde kan øges eller reduceres i henhold til personlige eksperimentelle vaner og erfaring. Tilsætning af mere ammoniumpersulfat kan accelerere gelhastigheden og omvendt. Koagulationshastigheden af ​​PAGE gel er tæt forbundet med temperaturen og mængden af ​​ammoniumpersulfat.

5. En passende mængde TEMED-erstatninger er blevet tilføjet til dette produkt. Hvis det er nødvendigt at accelerere gelhastigheden yderligere, kan en passende mængde TEMED tilsættes efter behov før dispensering.

6. Der er en signifikant positiv sammenhæng mellem gelstørkning og temperatur. Under de samme forhold, jo højere temperatur, jo hurtigere størkningshastighed.

7. Farvekoncentreret gel kan producere en lille mængde nedbør under opbevaring, hvilket er et normalt fænomen. Du er velkommen til at bruge den.

8. APS'en blev opbevaret ved -20℃. For nemheds skyld kan den APS, der er blevet åbnet og er i brug, opbevares ved 4℃.

9. Bær venligst det nødvendige PPE, såsom laboratoriefrakke og handsker, for at sikre din sundhed og sikkerhed!

10. Kun til forskningsbrug!

Tabel 1 Referenceadskillelsesområde for SDS-PAGE gel med forskellig koncentration

Dokumenter:

Sikkerhedsdatablad

20325-A-MSDS-CN20250110

20325-B-MSDS-CN20250110

20325-C-MSDS-CN20250110

20325-D-MSDS-CN20250110

Manualer

20325_Manual_CN20241218_DA

Citater og referencer:

[1] Su G, Wang W, Zhao X, et al. Enhancer-arkitekturafhængig flerlags transkriptionel regulering orkestrerer RA-signaleringsinduceret tidlig afstamningsdifferentiering af ESC'er. Nucleic Acids Res. 2021;49(20):11575-11595. doi:10.1093/nar/gkab1001(IF:16.971)

[2Li M, Niu Y, Tian L, et al. Astragalosid IV lindrer makrofag-ældning og d-galactose-induceret knogletab hos mus gennem STING/NF-KB-vejen. Int Immunopharmacol. 2024;129:111588. doi:10.1016/j.intimp.2024.111588(IF:5.6)

[3] Song M, Qian C, Zhang T, et al. Salvia mitiorrhiza Bunge-vandekstrakt dæmper infiltration af tumorassocierede makrofager og forstærker anti-PD-L1-immunterapi ved kolorektal cancer gennem modulerende Cox2/PGE2-kaskade. J Ethnopharmacol. 2023;316:116735. doi:10.1016/j.jep.2023.116735(IF:5.4)

[4] Zang C, Liu H, Ju C, et al. Gardenia jasminoides J. Ellis-ekstrakt lindrede skader på hvidt stof ved at fremme differentieringen af ​​oligodendrocyt-precursorceller via undertrykkelse af neuroinflammation. Mad funktion. 2022;13(4):2131-2141. Udgivet 21. februar 2022. doi:10.1039/d1fo02127c(IF:5.396)