Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit er designet til at detektere antistoffer og associerede antigener direkte eller indirekte mærket med peberrodsperoxidase (HRP). Princippet i Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit er, at proteiner eller nukleinsyrer blev overført til den prægede membran efter elektroforese, og målproteinerne på membranen blev bundet af primært antistof og sekundært antistof mærket med HRP, eller nukleinsyrerne på membranen blev bundet direkte eller indirekte med HRP-mærkede prober. Efter vask af membranen blev ECL-arbejdsopløsningen fremstillet af produktet anvendt til at inkubere membranen ved stuetemperatur i adskillige minutter. Den påtrykte membran blev pakket ind i plastfolie og fikseret til røntgeneksponeringskassetten. Derefter presses røntgenfilmen på membranen i et mørkekammer og eksponeres i flere sekunder til flere timer. Efter udvikling og fiksering kan protein- eller nukleinsyrebånd tydeligt vises på røntgenfilmen.

Dette sæt har et unikt selvlysende substratsystem, der reducerer eksponeringsbaggrunden, mens introduktion af en ny oxidant forbedrer sættets stabilitet i høj grad, hvilket gør det muligt at være stabilt ved stuetemperatur i op til et år. Ud over røntgen kan fluorescerende CCD-scanning også bruges direkte hovedsageligt til WB-detektion og kemiluminescens-immundetektionssystem.

Funktioner

Høj følsomhed og højt signal-til-støj-forhold, det kan detektere medium pick-grade antigener.

Skinn hurtigt og klart, det påtrykte filmbånd kan observeres under lysstofrør.

Særligt velegnet til påvisning af måloverflod er højere, konventionelle proteinprøver.

Ny oxidant, stabil ved stuetemperatur i op til et år.

Ansøgninger

Kemiluminescens ELISA

Western Blot

Dot Blot-DNA/RNA

Southern blot-DNA

Northern blot-RNA

Specifikationer

Komponenter

Forsendelse og opbevaring

Produktet sendes med stuetemperatur og kan opbevares ved stuetemperatur i et år. Hvis den ikke bruges i længere tid, anbefales det at opbevare ved 2℃~8℃ at forlænge gyldighedsperioden.

Bemærkninger: 36222-A bør opbevares væk fra lys!

Instruktioner (f.eks. røntgenfilm)

1. Rutinemæssig elektroforese, overførselsmembran, antistof mærket med HRP eller nukleinsyreprobe mærket med HRP inkubations- og vaskemembran.

Bemærkninger: ECL luminescerende opløsning er farvesubstratet for HRP, så detektionssystemet skal være baseret på HRP enzym-mærket antistof eller nukleinsyreprobe.

2.Samtidig med at membranen blev vasket for sidste gang, blev den luminescerende arbejdsopløsning tilberedt frisk (100-200 μL luminescerende arbejdsopløsning/cm2 membran): tag den samme volumen af ​​reagens A og B, bland godt til senere brug.

Bemærk: Tag reagens A, og reagens B skal bruge forskellige spidser. Det anbefales at bruge arbejdsvæsken med det samme. Den kan stadig bruges efter et par timer ved stuetemperatur, men følsomheden er lidt reduceret.

3.Brug en flad pincet til at tage membranen ud, læg den på filterpapir for at dræne lotionen, gør ikke membranen helt tør. Nedsænk membranen fuldstændigt i selvlysende arbejdsopløsning, tilstrækkelig kontakt med selvlysende arbejdsvæske. Inkuber ved stuetemperatur i 1-2 minutter og klargør straks til tableteksponering.

4. Tag membranen op med en pincet og læg den på filterpapir for at dræne den selvlysende arbejdsvæske. Men vask ikke den selvlysende væske af.

5.Læg et stykke plastfolie større end membranen på den indvendige overflade af røntgenfilmen obscura. Fastgør den påtrykte membran til plastfolien, fold plastfolien helt rundt om den påtrykte membran, og fjern gasboblen og fold, kan skære kanten af ​​overskydende plastfolie af. Brug filterpapir til at suge overskydende lysende arbejdsvæske op. Fastgør plastikfolien, der dækker den påtrykte membran i obscuraen med tape, med proteinbåndet opad.

6. Et stykke røntgenfilm blev taget fra mørkerummet og lagt på den indpakkede membran. Filmen blev presset og eksponeret i 30 sekunder - 2 minutter. Derefter blev filmen fremkaldt og fikset.

Bemærkninger: Eksponeringstiden bør justeres i henhold til eksponeringsintensiteten.Hvis baggrunden er for høj, skal du bruge to røntgenfilm på samme tid.

Andre eksponeringsmetoder

Hvis brugen af ​​CCD-fotografering: membranen kan placeres i arbejdsvæsken, efter støvlen i henhold til brugen af ​​instruktionerne, fjern filmen, tag billeder. Derudover kan maskinens måleparametre justeres i overensstemmelse med situationen for at forbedre signal-til-støj-forholdet.

Noter

1. Bobler bør undgås ved membranoverførsel, forsegling og inkubation. Derudover vil handsker undgå at efterlade fingeraftryk på membranen og holde den ren.

2. Langvarig eksponering eller for meget protein vil uddybe baggrunden og få ændringen af ​​båndstyrken til at miste lineær relation. Undereksponering vil sløre båndene.

3. Noget plastikfolie kan slukke fluorescensen, når den påtrykte membran pakkes ind. Plastfolie af høj kvalitet bør vælges.

4. Undgå at placere flere membraner i samme vaskemembranboks, da gensidig adsorption eller friktion kan forårsage en dyb baggrund.

5. Placeringen og størrelsen af ​​båndene på filmen kan bestemmes nøjagtigt ved hjælp af synlige præfarvede proteinmarkører og fluorescerende autoradiografi eksponeringsmærker.

6. Brug et biotin-avidin-system og undgå at bruge mælkelukning, som kan få baggrunden til at være for høj.

7. Metaloxidpartikler kan forårsage granulære pletter på membranen. Undgå at bruge rustne saks og pincet. Brug en flad plastpincet.

8. Natriumazid (NaN3) kan hæmme HRP-aktivitet, hvis genvindingen af ​​HRP-mærket probe eller antistof bør undgå at bruge NaN3, om nødvendigt, ikke mere end 0,01 %.

9. Dette produkt har ingen særlig toksicitet ifølge almindelig kemisk behandling.

10. Bær venligst det nødvendige PPE, såsom laboratoriefrakke og handsker, for at sikre din sundhed og sikkerhed!

11. Kun til forskningsbrug!

Dokumenter:

Sikkerhedsdatablad

36222-A-MSDS-CN20250110

36222-B-MSDS-CN20250110

Manualer

36222_Manual_HB221212_DA

Citater og referencer:

[1] He X, Li J, Zhou G, et al. Gating af hippocampus rytmer og hukommelse ved synaptisk plasticitet i hæmmende interneuroner. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)

[2] Wang X, Zhang S, Jin D, et al. μ-opioidreceptoragonist letter cirkulerende tumorcelledannelse i blærekræft via MOR/AKT/Slug-vejen: en omfattende undersøgelse inklusive randomiseret kontrolleret forsøg.Cancer Commun (Lond). 2023;43(3):365-386. doi:10.1002/cac2.12408(IF:16.2)

[3] Li Y, Zhou S, Song H, Yu T, Zheng X, Chu Q. CaCO3 nanopartikler inkorporeret med KAE for at muliggøre amplificeret calciumoverbelastningskræftbehandling. Biomaterialer. 2021;277:121080. doi:10.1016/j.biomaterials.2021.121080(IF:12.479)

[4] Xu Z, Xu J, Sun S, et al. Mecheliolid fremkalder ROS-medieret ERS-drevet immunogen celledød i hepatocellulært karcinom. Redox Biol. 2022;54:102351. doi:10.1016/j.redox.2022.102351(IF:11.799)

[5] Cai Z, Zhang Y, Zhang W, et al. Arsenretention i erytrocytter og overdreven erythrofagocytose er relateret til lav selenstatus ved nedsat redox-homeostase. Redox Biol. 2022;52:102321. doi:10.1016/j.redox.2022.102321(IF:11.799)

[6] Kaushik AC, Wu Q, Lin L, et al. Exosomal ncRNAs profilering af mycobakteriel infektion identificerede miRNA-185-5p som en ny biomarkør for tuberkulose. Kort Bioinform. 2021;22(6):bbab210. doi:10.1093/bib/bbab210(IF:11.622)

[7] Hu P, Li H, Sun W, et al. Kolesterol-associeret lysosomal lidelse udløser celledød af hæmatologisk malignitet: Dynamisk analyse af cytotoksiske virkninger af LW-218. Acta Pharm Sin B. 2021;11(10):3178-3192. doi:10.1016/j.apsb.2021.02.004(IF:11.614)

[8] Wang X, Ni J, You Y, et al. SNX10-medieret LPS-sensing forårsager tarmbarrieredysfunktion via en caspase-5-afhængig signaleringskaskade. EMBO J. 2021;40(24):e108080. doi:10.15252/embj.2021108080(IF:11.598)

[9] Jiang K, Chen H, Fang Y, et al. Eksosomal ANGPTL1 dæmper levermetastaser fra kolorektal cancer ved at regulere Kupffer-cellesekretionsmønster og forhindre MMP9-induceret vaskulær lækage. J Exp Clin Cancer Res. 2021;40(1):21. Udgivet 7. januar 2021. doi:10.1186/s13046-020-01816-3(IF:11.161)

[10] Zhang S, Yang Z, Bao W, et al. SNX10 (sortering af nexin 10) hæmmer initiering og progression af kolorektal cancer ved at kontrollere autofagisk nedbrydning af SRC. Autofagi. 2020;16(4):735-749. doi:10.1080/15548627.2019.1632122(IF:11.059)

[11] Liu L, Liang L, Yang C, Zhou Y, Chen Y. Ekstracellulære vesikler af Fusobacterium nucleatum kompromitterer tarmbarrieren gennem målretning af RIPK1-medieret celledødsvej. Tarmmikrober. 2021;13(1):1-20. doi:10.1080/19490976.2021.1902718(IF:10.245)