Naturligt protein A er et cellevægsoverfladeprotein fundet i Staphylococcus aureus, det ligner protein G isoleret fra slægt G eller C Streptococcus, bind mest pattedyr IgG ved interagerer først og fremmest med de Fc område af immunoglobulin (Ig), men adskiller sig i deres bindingsspecificitet. Det kan bruges til adskillelse og oprensning af en række antistoffer (monoklonalt antistof og polyklonalt antistof). Protein A og Protein G adskiller sig i deres bindingsegenskaber til forskellige immunglobulinunderklasser (se bilag 1 for detaljer).
Dette produkt bruger genetisk modificeret protein A, som ikke kun bevarer dets Ig-affinitetsegenskaber, men også fjerner det ikke-større bindingsdomæne af det naturlige protein selv for at reducere uspecifik binding. SuRi rProtein A Agarose Resin, som er stærkt tværbundet agarosegel som matrix og modificeret alkali-resistent rekombinant protein A som en ligand, har høj fysisk-kemisk stabilitet. Antistof med høj renhed kan opnås fra prøver af ascites, serum og dyrkningsmedier ved et-trins affinitetskromatografi med dette produkt, som er praktisk at bruge og udbredt.

Komponenter

Specifikationer

Forsendelse og Opbevaring

Produkterne sendes med ispose.   Det kan opbevares stabilt ved 2 ~ 8 ℃ i 5 år.

Instruktioner

1. Buffer forberedelse

Det anbefales, at følgende buffere skal filtreres med en 0,22 μm eller 0,45 μm filtermembran før brug. Balance/binding/vaskebuffer: 0,15 M NaCl, 20 mM Na2 HPO4, pH 7,0

Elueringsbuffer: 0,1 M glycin, pH 3,0

Neutraliserende buffer: 1 MTris-HCl, pH 8.5

2. Prøveforberedelse

Sikre at de prøve løsning har de passende ionisk styrke og pH før indlæsning de kolonne, enten ved fortynding af serumprøven, ascites eller cellekulturopløsningen med en binde/vaskebuffer eller ved dialyse af prøven med en binde/vaske buffer.

3. Kolonnepakning

Indlæs SuRi rProtein EN Agaroseharpiks i en passende kromatografisk søjle, og pas på at undgå bobler.

4. Prøveoprensning

1) Balance: Den kromatografiske søjle er balanceret med en bindende Buffer af 5 gange de kolonne bind, så at pakningen er i samme buffersystem som målproteinet, og spiller rollen som beskyttelse af proteinet.

2) Prøve indlæsning: De prøve var indlæst til de velafbalanceret rProtein EN Agarose Harpiks til sikre fuld kontakte mellem målproteinet og harpiksen, forbedre restitutionen hastigheden af ​​målproteinet, og opsaml spildevandet til blive testet.

3) Vask: Vask med 10-15 gange kolonne bind af vask Buffer, fjerne de urenhed protein med mindre specifikt adsorberet, opsaml vaskeopløsningen.

4) Eluering: Eluering med 5-10 gange kolonne bind af eluering Buffer, samle eluent, at er, de mål protein komponent.

5) CIP rengøring og bevarelse: Generelt bruge 0,1-0,5 M NaOH større end 3CV, og de kontakte tid er 15 min; Så skyl med 5CV balanceopløsning indtil neutral. Endelig er det balanceret med 20 % ethanol på 5 gange søjlen bind, og så gemt  i 20 %  ethanol  af de  samme  bind  på  4°C  til  forhindre  de  pakning  fra  væren forurenet af bakterier.

5. SDS-PAGE detektion

De prøver opnået i de oprensning behandle (inklusive original prøver, spildevand komponenter, vask og elueringskomponenter osv.) blev påvist ved SDS-PAGE for at bestemme oprensningseffekten.

Noter

1. Stil ikke produktet på køl.
2. rProteinAAgarose Resin skal vendes fuldstændigt flere gange før brug, så agaroseharpiksen blandes jævnt.
3. Under alle operationer skal prøven betjenes ved 4°C eller på is.
4. For din sikkerhed og sundhed skal du bære laboratoriefrakker og engangshandsker til betjening.
5. Kun til forskningsbrug.

Vedhæftet tabel 1: Sammenfatning af bindingsevne of proteinerne A og G til Ig i forskellige arter

SuRi rProtein En agarose Harpiks