Beskrivelse
Dobbeltstrenget RNA (dsRNA) fremkommer som et biprodukt under in vitro-transkriptionen af mRNA. Dette biprodukt besidder immunogene egenskaber i den menneskelige krop, som er i stand til at fremkalde en immunreaktion og som følge heraf mindske mRNA-niveauer. Dette gør dsRNA til en besværlig procesurenhed, der nødvendiggør grundig eliminering og stringent kontrol af dets resterende tilstedeværelse.
For at imødegå denne bekymring anvender det dobbeltstrengede RNA (dsRNA) ELISA-detektionskit de eksperimentelle principper for en dobbelt-antistof sandwich enzym-koblet immunoassay (ELISA) til kvantificering af resterende dsRNA. Kittet kan ikke kun bruges til påvisning af almindelige dsRNA'er, men også til påvisning af peudo UTP, N1-Me-peudo UTP og 5-OMe-UTP modificerede dsRNA'er.
Proceduren involverer tilsætning af både en standard- og testprøven på en enzymplade (betegnet som 36717-A), der tidligere er coatet med anti-dsRNA-antistoffer. Efterfølgende tilsættes biotin-mærkede dsRNA-detektionsantistoffer (36717-F) i fortyndet form. Til sidst introduceres Streptavidin-HRP (SA-HRP) (36717-G) for at skabe et kompleks, der omfatter antistoffer, antigener, biotin og SA-HRP.
Efter pladevask initierer tilsætning af TMB-chromogen opløsning (36717-K) farveudvikling. Under påvirkning af HRP-enzymkatalyse gennemgår TMB en transformation fra farveløs til blå, som derefter standses ved påføring af stopopløsningen (36717-L). I sidste ende resulterer denne transformation i en gul nuance, hvis intensitet korrelerer positivt med mængden af dsRNA identificeret i prøven.
Dette kit tjener et alsidigt formål, hvilket muliggør optimering af den biologiske produktrensningsproces, urenhedskontrol i mellemstadier og frigivelsestest til endelig produktvurdering.
Pprodukt Validation Rapport
Komponenter
| Ingen. | Navn | 36717ES48 | 36717ES96 |
| 36717-A | Anti-dsRNA coatede mikrotiterstrimler | 48 T | 96 T |
| 36717-B | STD 1: umodificeret, 5 ng/μL | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-C | STD 2: pUTP modificeret, 5 ng/μL | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-D | STD 3: N1-Me-pUTP modificeret, 5 ng/μL | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-E | STD 4: 5-OMe-UTP modificeret, 5 ng/μL | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-F | Opdagelse Antistof: Biotin-konjugeret Antistoffer (100x) | 60 μL | 120 μL |
| 36717-G | Streptavidin-HRP (100x) | 60 μL | 120 μL |
| 36717-H | Fortyndingsbuffer 1 | 25 ml | 50 ml |
| 36717-I | Fortyndingsbuffer 2 | 15 ml | 30 ml |
| 36717-J | Vaskebufferkoncentrat (20×) | 20 ml | 40 ml |
| 36717-K | TMB substrat | 6 ml | 12 ml |
| 36717-L | Stop Løsning | 3 ml | 6 ml |
| 36717-M | Pladeforsegler | 2 | 4 |
Forsendelse og opbevaring
Sættet leveres med en ispose og kan opbevares ved 2°C ~8°C. Uåbnet produkt er gyldigt i et år. Når reagenset er åbnet, er det gyldigt i et halvt år. Frys aldrig dette produkt.
Instruktioner
1. Forberedelse før forsøg
1) Eksperimentelle materialer, der ikke er inkluderet i dette sæt, men som kræves til eksperimentet:
en. RNase-fri tips;
b. RNase-fri centrifugerør;
c. Støvfrit papir;
d. RNase-fri prøveforbehandlingsplade;
e. Deioniseret vand eller dobbeltdestilleret vand.
2) Instrumenter og udstyr påkrævet, men ikke leveret:
en. Multifunktionel mikropladelæser (herunder dual-wavelength detection mode, der dækker 450nm og 650nm; i stand til at bruge 450nm som detektionsbølgelængde og 650nm som referencebølgelængde);
b. Fuldautomatisk pladevasker, vortexblander, konstanttemperaturblander, centrifuge;
c. Præcisionsmikropipetter og flerkanalsmikropipetter med forskellige specifikationer;
d. Timer, 4℃ køleskab;
e. Mikropladeryster.
2. Resultatanalyse
en. Hvis OD-værdien for prøven, der skal testes, overstiger OD-værdien på det højeste punkt på standardkurven, skal prøven fortyndes og måles igen.
b. Kurveudviklingsprocedure: Opret en standardkurve ved at plotte standardkoncentrationerne på x-aksen og de tilsvarende kalibrerede standardabsorbansværdier på y-aksen. Forskellige tegne- og statistiske softwareværktøjer kan hjælpe med generering af standardkurver og bestemmelse af ukendte prøvekoncentrationer. Det er tilrådeligt at anvende en tilpasningsmetode med fire parametre eller fem parametre til dette eksperiment.Beregn i sidste ende den resterende mængde af dsRNA i prøven ved at henvise til standardkurven og overveje prøvens fortyndingsfaktor.
c. Den medfølgende standardkurve er et illustrativt eksempel (kun til referenceformål). Faktisk prøveindhold bør bestemmes ved hjælp af en standardkurve, der er specifikt genereret til den samme eksperimentelle standard.
3. Eksperiment flowdiagram
Figur 5 Eksperimentflowdiagram
4. Produktets ydeevne
Ydeevnen af dette sæt er blevet fuldt ud evalueret. For detaljer, kontakt venligst teknisk personale for at få den tilsvarende ydeevneverifikationsrapport.
5. Noter
- Læs venligst denne brugsanvisning omhyggeligt, før du bruger dette sæt.
- Brug venligst dette produkt inden for gyldighedsperioden, og det er forbudt at blande relaterede reagenser fra forskellige batcher.
- Alle reagenser skal returneres til stuetemperatur før brug.
- For din sikkerhed og sundhed skal du bære en laboratoriefrakke og engangshandsker.
- Dette produkt er kun til videnskabelige forskningsformål.
Betaling og sikkerhed
Dine betalingsoplysninger behandles sikkert. Vi gemmer ikke kreditkortoplysninger og har heller ikke adgang til dine kreditkortoplysninger.
Forespørgsel
Du kan også lide
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.