Beskrivelse
Hieff Trans™ universal transfektionsreagens er et multifunktionelt, praktisk og effektivt liposomtransfektionsreagens udviklet baseret på den nyeste nanoteknologi. Det er velegnet til transfektion af DNA, RNA og oligonukleotider, herunder primære celler, svært transficerede celler, herunder neuroner, har høj transfektionseffektivitet. Dens unikke formel gør det muligt at tilføje det direkte til mediet, og tilstedeværelsen af serum påvirker ikke transfektionseffektiviteten, hvilket reducerer skaden på celler forårsaget af serumfjernelse. Det er ikke nødvendigt at fjerne nukleinsyre-transfektionsreagenskomplekset eller erstatte med frisk medium efter transfektion, og det friske medium kan også erstattes efter 4-6 timer i henhold til cellernes næringsstofstatus.
Produktkomponenter
| Komponentnummer | Komponenter | Kat #/størrelse | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-A | Universal-A | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 ml |
| 40808-B | Universal-B | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 ml |
Forsendelse og opbevaring
Produktet sendes med isposer og kan opbevares ved 2-8 ℃ i et år. Må ikke fryses!
Forsigtig
1) Under transfektionsoperationen er det bedre, at cellekonfluensen når 70%-90%, og den specifikke pletteringstæthed bestemmes i henhold til cellernes situation.
2) Fremstilling af transfektionskomplekser kræver fortynding af DNA og transfektionsreagenser i serumfrit medium.
3) Antibiotika kan ikke tilsættes til mediet under transfektion.
4) Brugen af højrent DNA eller RNA hjælper med at opnå højere transfektionseffektivitet, og endotoksin i plasmider er transfektionens fjende.
5) Opbevar ved 2-8ºC, pas på ikke at åbne låget gentagne gange i lang tid.
6) Nukleinsyrekoncentrationen og reagensvolumen bør optimeres til den første brug for at opnå den maksimale transfektionseffektivitet.
7) Dette produkt er kun til videnskabelige forskningsformål!
Instruktioner
Transfektion af DNA
[Note] Mængden af anvendt transfektionsreagens påvirkes af celletypen og andre eksperimentelle forhold. Det anbefales at indstille en gradient for at optimere den optimale mængde brug for første gang.
1) Cellerne udplades, og cellekonfluensen bør være 70%-90% på tidspunktet for transfektion.
2) Fortynd Universal-B-opløsningen med Opti-MEM-medium i henhold til nedenstående tabel og bland forsigtigt.
3) Fortynd DNA med Opti-MEM-medium for at opnå DNA-premix, tilsæt derefter Universal-A-opløsning og bland forsigtigt for at opnå fortyndet DNA.
4) Tilføj det fortyndede DNA til den fortyndede Universal-B-opløsning (1:1-forhold).
5) Inkuber ved stuetemperatur i 5 minutter.
6) Tilføj DNA-liposomkomplekset til cellerne dråbevis og bland forsigtigt.
7) Inkuber ved 37°C, 5% CO2-inkubator i 48-96 timer indtil genekspressionsanalyse.
Transfektion af siRNA
Proceduren for transfektion af siRNA er den samme som for DNA-transfektion, bortset fra at Universal-A-opløsning (trin 3) ikke skal tilsættes ved fortynding af siRNA.
Tabel 1 Mængden af transfektion i forskellige cellekulturbeholdere (kun til reference)
| Cellekulturkar | 96-brønd | 24-brønd | 6-brønd | |
| Vedhæftende celler | 1-4×104 | 0,5-2×105 | 0,25-1×106 | |
| Fortynd Universal-B-opløsningen med Opti-MEM-medium i henhold til nedenstående tabel og bland forsigtigt. | Opti-MEM medium | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| Universal-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Fortynd DNA med Opti-MEM medium for at opnå DNA premix, tilsæt derefter Universal-A opløsning og bland forsigtigt for at opnå fortyndet DNA. | Opti-MEM medium | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| DNA (0,5-5 μg/μL) | 0,1 μg | 0,5 μg | 2,5 μg | |
| Universal-A (2 μL/μg DNA) | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Tilføj det fortyndede DNA til den fortyndede Universal-B-opløsning (1:1-forhold). | Fortyndet DNA-opløsning | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| Universal-B | 5 μL | 25 μL | 125 μL | |
| Inkuber ved stuetemperatur i 5 minutter. | ||||
| DNA-liposomer kompleks | Komponenter (hver brønd) | 96-brønd | 24-brønd | 6-brønd |
| Opti-MEM | 10 μL | 50 μL | 250 μL | |
| DNA (0,5-5 μg/μL) | 0,1 μg | 0.5 μg | 2,5 μg | |
| Universal-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Universal-A | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Tilføj DNA-liposomkomplekset til cellerne dråbevis og bland forsigtigt. | DNA-liposomer kompleks | 10 μL | 50 μL | 250 μL |
[Bemærk] Det beløb, der er brugt i tabellen, er kun til reference. Den specifikke mængde DNA og Universal-B-opløsning, der anvendes, bør optimeres i henhold til celletypen og andre eksperimentelle forhold. Det anbefales at holde forholdet mellem 1:0,5-1:5.
(1) Spørgsmål: Kan serum være til stede ved fremstilling af nukleinsyretransfektionsreagenskompleks?
A: Tilstedeværelsen af serum vil påvirke dannelsen af liposomer. Det anbefales at bruge serumfrit medium (generelt MEM-medium) ved fremstilling af nukleinsyretransfektionsreagenskomplekser.
(2) Sp.: Kan transfektionsreagenset fryses?
A: Dette reagens skal opbevares ved 2-8°C og bør undgås gentagen og langvarig åbning af hætten, da langvarig åbning af hætten vil forårsage liposomoxidation og påvirke transfektionseffektiviteten.
(3) Sp.: Hvad skal jeg være opmærksom på, når jeg bruger Hieff Trans™ Universal Transfection Reagent?
A: 1) Under transfektionsoperationen er det bedre, at cellekonfluensen når 70%-90%, og den specifikke pletteringsdensitet bestemmes i henhold til cellernes situation.
2) Fremstilling af transfektionskomplekser kræver fortynding af DNA og transfektionsreagenser i serumfrit medium.
3) Antibiotika kan ikke tilsættes mediet under transfektion.
4) Brugen af højrent DNA eller RNA hjælper med at opnå højere transfektionseffektivitet, og endotoksin i plasmider er transfektionens fjende.
5) Opbevar ved 2-8ºC, pas på ikke at åbne låget gentagne gange i lang tid.
6) Nukleinsyrekoncentrationen og reagensvolumen bør optimeres til den første brug for at opnå den højeste transfektionseffektivitet.
(4) Sp.: Behøver det at blive afsluttet efter transfektion?
A: Ikke nødvendigt. Det er ikke nødvendigt at fjerne nukleinsyre-transfektionsreagenskomplekset eller erstatte med frisk medium efter transfektion, og det friske medium kan også erstattes efter 4-6 timer i henhold til cellernes næringsstofstatus.
(5) Sp.: Kan transfektionsreagenset bruges til transfektion af viral vektorpakning?
A: Ja.Effektiviteten af viral vektorpakning er ikke nødvendigvis relateret til effektiviteten af transfektion, men også til udvælgelsen af pakningsplasmider og forholdet mellem plasmider.
Betaling og sikkerhed
Dine betalingsoplysninger behandles sikkert. Vi gemmer ikke kreditkortoplysninger og har heller ikke adgang til dine kreditkortoplysninger.
Forespørgsel
Du kan også lide
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.