Lineariseret polyethylenimin PEI 25000 transfektionsreagens er en højt ladet kationisk polymer, der let binder negativt ladede nukleinsyremolekyler, danner et kompleks og tillader komplekset at trænge ind i cellen. Transfektionsreagenset er et forbigående transfektionsreagens med lav cytotoksicitet, høj transfektionseffektivitet og høj genekspressionseffektivitet i celler såsom HEK293 og CHO. Det er blevet bekræftet, at det lineære PEI-transfektionsreagens er bredt anvendeligt til en række cellelinjer, herunder HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 og Hela-celler osv. Reagenset er kompatibelt med serum-holdige celler, der effektivt kan introducere cellesyreholdige medier.

Specifikation

Forsendelse og opbevaring

Produktet sendes ved stuetemperatur og pulveret kan opbevares ved 2-8ºC i to år. Stamopløsningen opbevares ved 2-8 ºC i 3 måneder.

Forsigtig


1) Efter at den forberedte PEI-opløsning er taget ud fra -20 ºC og optøet, kan den opbevares i et 4 ºC køleskab og må ikke genfryses.

2) For de fleste celler kan 3,0 μL PEI-transfektionsreagens pr. 1 μg DNA opnå høj transfektionseffektivitet. Du kan også prøve at bruge 1,5 ~ 4 μL volumen lineær PEI-transfektionsreagens pr. 1 μg DNA til optimering.

3) For din sikkerhed og sundhed skal du bære en laboratoriefrakke, engangshandsker og et stinkskab til drift.

4) Dette produkt er kun til videnskabelige forskningsformål, ikke til human brug.

Stamopløsningsforberedelse (1 mg/ml)


1. Materialer

PEI 25000, Milli-Q® vand/vand til injektion (WFI) eller lignende vand af biologisk kvalitet, 12 mol/L saltsyre (HCl), 10 mol/L natriumhydroxid (NaOH), engangs 0,1~0,2 μm PES vakuum sterilt filter, steril HDPE eller polypropylen opbevaringsflaske.

2. Forbered stamopløsning (1 mg/ml)

1) Tilsæt 1 g PEI 25000-pulver i et 1 L glasbæger i 900 ml Milli-Q® ultrarent vand eller andet tilsvarende biologisk vand, og omrør jævnt på en magnetomrører for at frembringe en lille hvirvel.

2) Tilsæt saltsyre (12 mol/L) dråbevis under omrøring for at justere pH indtil pH <2,0.

3) Dæk toppen af ​​bægeret og omrør i 3 timer, indtil det er helt opløst; Hold pH < 2,0 under hele processen.

【Bemærk】: Der kan være nogle små fibrøse partikler, som ikke kan opløses, hvilket er et normalt fænomen.

4) Tilsæt NaOH (10 mol/L) dråbevis under omrøring for at justere pH, indtil den når 6,9 ~ 7,1.

5) Overfør opløsningen til en målecylinder, og tilsæt vand for at fylde op til 1 L.

6) Filtrer og steriliser med et engangs 0,1-0,2 µm PES vakuumfilter for at opnå en 1 mg/ml stamopløsning.

7) Alikvoter efter behov og opbevares ved -20 °C, stabil i 1 år.

【Bemærk】: Efter genoptøning af opbevaringsopløsningen kan den opbevares ved 4 °C og er stabil i 2 uger, men den må ikke genfryses

Transfektionsprocedure (med 6-brønds plade som eksempel)


1. Cellepodning: For at forbedre transfektionseffektiviteten anbefales det at inokulere cellerne en dag før transfektion, og celletætheden på transfektionstidspunktet er fortrinsvis 70%~80%.

2. Forbered DNA-PEI-komplekset: Forbered DNA-PEI-nukleinsyre-transfektionsreagenskomplekset i henhold til følgende system:

1) For hver brønd af celler fortyndes 2 μg mål-DNA med 100 μL serumfrit medium og blandes grundigt for at danne en DNA-fortynding.

[Bemærk]: Opti-MEM eller ddH2O anbefales til serumfri fortynder

2) Tilsæt straks 5 μL PEI 25000 transfektionsreagens til 100 μL DNA-fortynder, vortex i 10 sekunder, og bland godt.

3) Inkuber ved stuetemperatur i 10-25 minutter for at danne DNA-PEI kationisk nukleinsyretransfektionsreagenskompleks.

3. Transficerede celler:

1) Fjern cellevækstmediet under kompleksdannelse og tilsæt 2 mL frisk forvarmet komplet medium til hver brønd.

2) Tilsæt 100 μL DNA-PEI-nukleinsyre-PEI-kompleks direkte til cellerne, ryst kulturpladen og bland forsigtigt.

3) Dyrk i en 37°C, 5% CO2-inkubator, og ekspressionen af ​​transgenet kan påvises så snart som 7 timer efter transfektion. Bestem venligst selv den passende testtid.

4. Screening med konstant rotation (valgfrit)

24 timer efter transfektion blev cellerne subdyrket i frisk vækstmedium (fortynd cellerne mere end 10 gange) og inkuberet natten over ved 37 °C i en 5% CO2-inkubator. Den næste dag blev et screeningslægemiddel, der matchede transfektionsresistensgenet, tilføjet. Lægemiddelresistente kloner kan screenes på omkring 1 til 2 uger. I denne periode skal vækstmediet, der indeholder screeningslægemidlerne, udskiftes hyppigt.

Transfektionsdosis for forskellige cellekulturkar (kun til reference):