Beskrivelse
Hygromycin B, et aminoglycosid-antibiotikum syntetiseret af Streptomyces hygroscopicus, hæmmer proteinsyntesen ved at interferere med 70S ribosomal translokation og inducere fejllæsning af mRNA-skabelon, og dræber således prokaryoter (såsom bakterier), eukaryoter (såsom gærsvampe) og højere svampe fra mammale.
Hygromycinresistensgener (hyg eller hph) afledt af Escherichia coli koder for hygromycin B-phosphotransferase, som afgifter hygromycin B til et ikke-biologisk aktivt phosphoryleret produkt, hvilket gør det til en fremragende selektiv markør til screening og dyrkning af prokaryote eller eukaryote celler, der med succes er transficeret med hytromycin-genresistens. På grund af forskellige virkemåder anvendes Hygromycin B desuden ofte i kombination med G418 eller Blasticidin S til udvælgelse af dobbelt-resistente cellelinjer. Hygromycin B kan også anvendes som et antiviralt middel, fordi det selektivt trænger ind i celler med øget membranpermeabilitet på grund af virusinfektion og hæmmer translation. Det kan også virke insektafvisende via blandet med dyrefoder.
Dette produkt er en steril hygromycin B-opløsning (50 mg/ml i PBS-buffer) og kan fortyndes direkte til brug med et dyrkningsmedium.
Funktioner
Standardiseret produktion ved hjælp af fabrikkens masseproduktionstilstand
Ansøgninger
Steril
Screening af stabilt transficerede cellelinjer
Specifikationer
| CAS NR. | 31282-04-9 |
| Molekylær formular | C20H37N3O13 |
| Molekylvægt | 527,52 g/mol |
| Renhed | >90 % (HPLC) |
| Potens | ≥1000 U/mg |
| Struktur |
|
Komponenter
| Komponenter nr. | Navn | 60224ES03 | 60224ES10 |
| 60224 | Hygromycin B (50 mg/ml) | 1 g (20 ml) | 10 X 1 g (20 ml) |
Forsendelse og opbevaring
De Hygromycin B (50 mg/ml) produkter skal opbevares kl 2℃ ~ 8℃ for 2 år.
Instruktioner
1. Almindelig anvendt screeningskoncentration
Arbejdskoncentrationen af hygromycin B, der bruges til at screene stabile overførselsstammer, skal variere afhængigt af celletype, medium, vækstbetingelser og cellemetabolisme, med anbefalede koncentrationer på 50-1000 μg/ml. For det første forsøgssystem anbefales en drabskurve (dræbskurve), dosisreaktivitetskurven, for at bestemme den optimale screeningskoncentration.
Generelt pattedyrceller: 50-500 μg/ml; Bakterie-/planteceller: 20-200 μg/ml; Svampe: 300-1000 μg/ml.
2. Etablering af drabskurve
Bemærk: For at screene stabile cellelinjer er det nødvendigt at bestemme minimumskoncentrationen af antibiotika, der er i stand til at dræbe utransficerede værtsceller. Dette kan opnås ved at etablere en drabskurve (dosis-respons-kurve). Der bør arrangeres mindst fem koncentrationer.
1) Dag 1: Utransformerede celler plankes i en passende dyrkningsplade ved en celletæthed på 20-25% og dyrkes natten over.
Bemærk: Mængden af podningsceller kan øges for celler, der kræver højere tæthed for at detektere vitalitet.
2) Indstil koncentrationsgradienten inden for det passende område i henhold til celletypen. Pattedyrcelle kan indstille 50, 100, 250, 500, 750, 1000 μg/ml. Fortynd Hygromycin B-opløsningen 1:10 med deioniseret vand eller PBS-buffer til 5 mg/ml. Og fortynd derefter opløsningen til den tilsvarende arbejdskoncentration i henhold til følgende tabel.
| Endelig koncentration (μg/ml) | Mellem volumen (ml) | Tilsætningsvolumen på 5 mg/ml Hygromycin B (mL) |
| 50 | 9.9 | 0,1 |
| 100 | 9.8 | 0,2 |
| 250 | 9.5 | 0,5 |
| 500 | 9,0 | 1.0 |
| 750 | 8.5 | 1.5 |
| 1000 | 8,0 | 2.0 |
3) Dag 2: Erstat med et frisklavet medium indeholdende den tilsvarende koncentration af lægemidlet. Lav tre parallelle prøver for hver koncentration.
4) Udskift derefter med friske medier, der indeholder medicin hver 3.-4. dag.
5) Udfør levende celletællinger med faste intervaller (såsom hver anden dag) for at bestemme den passende koncentration, der hæmmer væksten af utransficerede celler. Vælg den laveste koncentration, der kan dræbe det store flertal af celler inden for det ideelle antal dage (normalt 7-10 dage) som arbejdskoncentration for stabil transfektantudvælgelse.
3. Screening af pattedyr stabilt transficerede cellelinjer
1) 48 timer efter transfektion blev cellerne subdyrket ved hjælp af screeningsmedium indeholdende hygromycin B i passende koncentration (direkte eller fortyndet).
Bemærk: Antibiotika virker bedst på aktivt delende celler. Hvis cellerne er for tætte, vil antibiotikummet ikke dræbe cellerne. Opdel cellerne således, at cellerne ikke er mere end 25 % sammenflydende.
2) Skift screeningsmediet hver 3-4 dag.
3) Mål cellekolonidannelsen efter 7 dages screening. Kolonidannelse kan tage endnu en uge eller mere, afhængigt af værtscelletype, transfektion og screeningseffektivitet.
4) Udvælg 5-10 resistente kloner og overfør til 35 mm cellekulturplader og dyrk med lægemiddelholdigt screeningsmedium i 7 dage.
5) Erstat med frisk medium uden medicin til dyrkning.
Dokumenter:
Sikkerhedsdatablad
Manualer
Betaling og sikkerhed
Dine betalingsoplysninger behandles sikkert. Vi gemmer ikke kreditkortoplysninger og har heller ikke adgang til dine kreditkortoplysninger.
Forespørgsel
Du kan også lide
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.