En el proceso de cultivo celular, a menudo se requiere la digestión celular, por lo que la tripsina utilizada para digerir las células será indispensable para el cultivo celular y también es muy importante, lo que afectará el estado de crecimiento de las células.

La tripsina se puede dividir en dos tipos: una es la tripsina recombinante y la otra es la tripsina no recombinante.

• La tripsina no recombinante es una proteína derivada de extracción animal, de origen animal, y también es el uso tradicional de la tripsina, que se encuentra comúnmente en el sistema digestivo animal y se extrae directamente del tejido pancreático del ganado o de los cerdos.
• La tripsina recombinante se produce mediante tecnología genética recombinante y no es de origen animal.

Introducción y aplicación del producto

Tripsina no recombinante (derivada de animales)

Características del producto:

La tripsina no recombinante (también conocida como tripsina) es una enzima proteolítica de serina extraída del páncreas de ganado vacuno, ovino y porcino, que puede escindir específicamente el extremo carboxilo terminal de la lisina y la arginina cargadas positivamente, purificada por cristalización múltiple y preparada adicionalmente mediante tecnología de cromatografía y ultrafiltración, con origen animal.

Debido a que las enzimas pancreáticas pueden actuar sobre proteínas transmembrana y proteínas en la matriz extracelular, como cadherina, integrina, etc., ahora se utilizan comúnmente para disociar tejidos y células en monocapa. Aunque la tripsina puede hidrolizar la proteólisis entre células para formar células discretas, la reacción de diferentes tejidos o células a la tripsina es diferente, y la actividad de las células dispersas también está relacionada con la concentración de tripsina, la temperatura y el tiempo de reacción, y la capacidad de la tripsina para dispersar las células es más fuerte en las condiciones de pH de 7-9 y temperatura de 37 °C. La adición de EDTA a la solución de tripsina como agente quelante une el calcio y el magnesio en una estructura de seis dientes, lo que puede debilitar la adhesión célula-célula y mejorar la adquisición de enlaces peptídicos específicos hidrolizados por parte de la tripsina.

La principal aplicación de la tripsina en los primeros tiempos en el campo biofarmacéutico era la producción de insulina, y pronto se utilizó también en otros campos de cultivo celular. Las enzimas pancreáticas animales se utilizan habitualmente en el cultivo de suero, y la composición y concentración de tripsina añadida a diferentes células son diferentes.

Aplicaciones

1. producción de insulina y vacunas inactivadas;
2. Aislamiento y cultivo de células tisulares;
3. Uso clínico y quirúrgico;
4. Coadyuvantes de elaboración en la industria alimentaria;

Tripsina recombinante (libre de origen animal)

Características del producto

La tripsina recombinante es una enzima producida mediante tecnología de ingeniería genética, que tiene las ventajas de una buena estabilidad, una alta pureza y no tener origen animal. En el proceso de producción de los biofarmacéuticos modernos, el uso de materias primas que contienen origen animal puede introducir en el producto posibles fuentes de virus que causan enfermedades zoonóticas, como la EEB de la enfermedad de las vacas locas, el virus de la fiebre aftosa, etc. Para reducir la fuente de contaminación, la tripsina se sintetiza mediante tecnología de ingeniería genética, lo que resuelve el riesgo de contaminación por virus que puede traer la tripsina porcina o bovina tradicional.

La tripsina recombinante se expresa principalmente de forma recombinante mediante el sistema de levadura o E. coli recombinante y se purifica mediante cromatografía de múltiples pasos, sin contaminación por heterozimas como la quimotripsina. La tripsina recombinante tiene las mismas propiedades que la tripsina extraída naturalmente, con una secuencia de aminoácidos homóloga a la secuencia de tripsina porcina, que escinde específicamente los grupos carboxilo en los residuos de lisina y arginina en la cadena polipeptídica.Debido a su contaminación de origen no animal y su alta pureza, tiene una amplia gama de aplicaciones en el desarrollo farmacéutico, la investigación bioquímica, la proteómica y otros campos.

La tripsina recombinante más utilizada en el mercado es la tripsina porcina recombinante expresada en Escherichia coli o levadura mediante tecnología de recombinación de ADN, y su secuencia de aminoácidos es completamente consistente con la tripsina porcina, con la misma actividad y especificidad que la tripsina natural. Está compuesta por 223 aminoácidos y contiene 6 pares de enlaces disulfuro. La enzima contiene dos formas activas de tripsina: α-tripsina y β-tripsina. Su actividad es inhibida por inhibidores de la serina proteasa como PMSF y TLCK, quelantes de iones metálicos como EDTA, etc. La tripsina recombinante se utiliza en cultivos sin suero y, al igual que la tripsina, se añaden diferentes células con diferentes componentes y concentraciones de tripsina.

Aplicaciones

1. producción de vacunas e insulina recombinante;
2. Preparación de muestras de tejido para análisis celular;
3. Terapia de células inmunes;
4. Producción biofarmacéutica;
5. Secuencia de proteínas, estructura e investigación ómica

Comparación detallada de productos

productos	Tripsina no recombinante (derivada de animales)	Tripsina recombinante (libre de origen animal)
Artículo	40123ES (rojo fenol(-),EDTA(+)) 40124ES (rojo fenol (-), EDTA (-)) 40126ES (rojo fenol(+),EDTA(-)) 40127ES (rojo fenol(+),EDTA(+))	40512ES 20416ES (MS SEGURO)
Fuente	Extraído del páncreas de ganado vacuno, porcino y ovino.	colibacilo (40512ES) Pichia pastoris（20416ES）
Seguridad	Contaminación con patógenos potenciales	Sin contaminación viral exógena
Pureza	Más del 90% de la solución de tripsina 1:250 es impureza.	Alta pureza (β-tripsina ≥ 70%, α-tripsina ≤ 20%）
Tipo de célula de digestión	La mayoría de las líneas celulares fuertemente adherentes contiguas	La mayoría de las líneas celulares fuertemente adherentes contiguas
Límite de quimotripsina	No más de 50 unidades de quimotripsina por 2500 unidades de tripsina.	Sin contaminación por mirosinasa ni otras enzimas impurezas.
Actividad específica	≥2500 Unidades USP/mg de proteína	≥3800 Unidades USP/mg de proteína
Efecto digestivo	inestabilidad	Digestión fuerte y baja cantidad de enzimas.
Tasa de autocorte	Es fácil autocortarse y producir fragmentos autocortantes, lo que afecta los resultados del análisis de espectrometría de masas.	Es fácil autocortarse y producir fragmentos autocortantes, lo que afecta los resultados del análisis de espectrometría de masas.
Líquido disuelto	Solución HBSS con o sin Ca2+, Mg2+	Solución HBSS con o sin Ca2+ y Mg2+ (40512ES); 1 mM de HCl (20416ES)
Supervivencia celular	Normal	Normal
Si es necesaria la congelación y descongelación	Sí	Sí

Además de la tripsina más común utilizada en la digestión celular, existen muchos otros tipos de productos enzimáticos digestivos que también pueden utilizarse, como los siguientes.

Sobre el campo de aplicación de la colagenasa

La colagenasa es una endonucleasa peptidasa que puede reconocer específicamente la secuencia Pro-X-Gly-Pro y escindir el enlace peptídico entre el aminoácido neutro (X) y la glicina (Gly) en la secuencia, la colagenasa es la única proteasa que puede degradar las fibrillas de colágeno natural con una estructura superenrollada de tres hebras y puede hidrolizar eficazmente otras proteínas, polisacáridos y lípidos en la matriz extracelular del tejido conectivo y el tejido epitelial, lo que hace que este producto sea muy adecuado para la digestión de tejidos.

1. Colagenasa I, comúnmente utilizada como preparación de células epiteliales, de hígado, de pulmón, de grasa y de tejido suprarrenal;
2. Colagenasa II, que se utiliza para la preparación de células derivadas de tejidos como el corazón, los huesos, los músculos, el hígado, la tiroides y el cartílago;
3. Colagenasa III, comúnmente utilizada en la preparación de células mamarias;
4. Colagenasa IV, que se utiliza comúnmente para la preparación de células de los islotes pancreáticos o para experimentos de preparación de células donde es necesario mantener la integridad del receptor.
5. Colagenasa V., adecuada para el aislamiento de células de los islotes pancreáticos y células del tejido conectivo.

Sobre el campo de aplicación de la tripsina compuesta

Accutase es un digesto celular que contiene actividad proteolítica y colagenasa, y es un reemplazo perfecto para los digestos de tripsina-EDTA para digerir células de recipientes de cultivo de tejidos convencionales y recipientes de cultivo adherentes. Accutase es adecuado para la disociación de tejidos y el aislamiento de células, ya que las células aisladas conservan antígenos de superficie intactos y no contienen ningún componente derivado de animales o bacterias, lo que puede cumplir con los requisitos de experimentos posteriores, como el etiquetado de la superficie celular, el análisis del crecimiento viral, la citometría de flujo y los ensayos relacionados con biorreactores.

Áreas de aplicación de los sustitutos de enzimas pancreáticas

Los productos enzimáticos PerfCell Tryzyme™ Express son altamente puros, causan poco daño celular, son suaves en la digestión y se pueden almacenar de manera estable a temperatura ambiente, lo que los convierte en una enzima digestiva ideal para cultivos de diferentes líneas celulares. Este tipo de producto no requiere el uso de inhibidores de tripsina para la inactivación y no contiene origen animal, lo que es más amigable para algunos experimentos de crecimiento de células adherentes sin suero.

Acerca del área de aplicación de dispase

Dispasa II La dispasa II, una metaloproteinasa no específica, se utiliza habitualmente en biología celular para aislar células individuales de diferentes tejidos u órganos, y se utiliza en cultivos celulares posteriores, como el aislamiento de células primarias, el pase de células, etc., y también se puede utilizar para eliminar la agregación celular que se produce durante el cultivo de células en suspensión. En comparación con otras proteasas de uso común en biología celular (por ejemplo, tripsina, colagenasa, pronasa, etc.), esta enzima tiene las siguientes ventajas:

1. Enzimas de digestión celular rápidas, efectivas y suaves, con poco daño a las células y que pueden mantener la integridad de las membranas celulares;
2. Derivado de bacterias, sin contaminación por micoplasma u otros virus animales;
3. Fuerte estabilidad, no se ve afectada por la temperatura, el pH y los componentes del suero;
4. Se puede utilizar para el aislamiento de varios tipos de tejidos y células.

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Número de catálogo	Nombre del producto	Tamaño
40123ES60	Tripsina-EDTA PerfCel™l (0,25 %), rojo fenol	100 ml
40124ES60	PerfCell™ Tripsina sin EDTA (0,25 %), sin rojo fenol	100 ml
40126ES60	Tripsina PerfCell™ (0,25 %), rojo fenol	100 ml
40127ES60	PerfCell™ Tripsina-EDTA (0,25 %), rojo fenol	100 ml
40101ES25	Tripsina 1:250 (polvo)	25 gramos
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20416ES60	Tripsina recombinante (MS-SAFE)	100 miligramos
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40135ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 ml
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40104ES60/80	Dispasa II	100 mg/1 g