1. Material enzimático central: Taq ADN polimerasa

A medida que se expanden los campos de prueba de aplicaciones y aumenta la demanda del mercado, la ADN polimerasa Taq de tipo salvaje ya no puede satisfacer por completo los requisitos. La plataforma de modificación de enzimas ZymeEditor™ de Yeasen ha modificado de manera integral y direccional la ADN polimerasa Taq para satisfacer diversas necesidades de aplicación, lanzando una serie de ADN polimerasas Taq de arranque en caliente adecuadas para aplicaciones premezcladas, resistentes a inhibidores, ultralimpias y otras.

• Estabilidad superior: formulado en una solución de premezcla completa que contiene cebadores y sondas, después del tratamiento a 37 °C durante 7 días, no hay cambios en la detección de baja concentración.

Figura 1: Utilizando el ácido nucleico del VHB como plantilla, se preparó una solución de premezcla completa para qPCR con 10726ES y se analizaron todos los componentes, excepto la plantilla, para determinar su estabilidad acelerada a 37 °C durante 7 días. Los resultados mostraron que no hubo cambios significativos en los valores de Ct y de fluorescencia en concentraciones altas, medias y bajas, lo que indica que la solución de premezcla preparada con 10726ES tiene un rendimiento estable.

• Residuos bajos de ADN genómico del huésped: el ADN genómico residual de E. coli es inferior a 0,5 copias por cada 100 U.

Figura 2: Rango lineal del ADN genómico de E. coli: 30 fg/μL a 300 pg/μL, con un coeficiente de correlación R2 de 0,9999. (B) El ADN genómico residual de E. coli en tres lotes de ADN polimerasa Taq sensible Hieff UCF.ME® es inferior a 0,5 copias por 100 U.

2. Material enzimático central: transcriptasa inversa

Como uno de los componentes clave de la reacción RT-qPCR, la transcriptasa inversa debe poseer una velocidad de transcripción inversa más rápida, un mayor rendimiento de síntesis y una mejor resistencia al calor. Para obtener una transcriptasa inversa más adecuada para RT-qPCR, Yeasen Biotech ha desarrollado la serie Hifair® de transcriptasas inversas basadas en M-MLV mediante modificación genética.Estas enzimas presentan una menor actividad de ARNasa H, mayor estabilidad térmica y mayores capacidades de síntesis continua.

• Puede soportar una temperatura de reacción de 58 ℃ y es adecuado para la transcripción inversa de plantillas de ARN complejas.

Figura 3: La transcriptasa inversa Hifair® V y la transcriptasa inversa T* de marca importada se incubaron a 55 °C y 58 °C durante 30 minutos para detectar la actividad enzimática residual. Los resultados muestran que la transcriptasa inversa Hifair® V mantiene una actividad del 70 % después de la incubación a 58 °C durante 30 minutos, superando significativamente a la marca importada.

• Tasa de detección superior en RT-qPCR en comparación con otras marcas, con un rango de detección de 1 pg a 1 μg

Figura 4: Utilizando el ARN total de células 293T en concentraciones que van desde 1 pg a 1 μg (7 gradientes) como plantilla, se realizó la transcripción inversa utilizando Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix para qPCR (Cat#11142), V* y T*. El ADNc resultante se sometió luego a qPCR para análisis cuantitativo. Los resultados indican que la sensibilidad de 11142ES puede alcanzar 1 pg, con una tasa de detección superior a la de los productos de la competencia.

3. Otras enzimas e inhibidores de enzimas: inhibidor de la ARNasa, enzima UDG

Yeasen Biotech ofrece una variedad de enzimas e inhibidores de enzimas que han sido validados para aplicaciones industriales de diagnóstico in vitro, incluidos inhibidores de ARNasa y enzimas UDG, lo que proporciona una amplia selección de soluciones de materias primas de alta calidad para el desarrollo y la producción de una amplia gama de productos de diagnóstico in vitro. Estos productos relacionados con enzimas se utilizan ampliamente en la protección de productos objetivo de detección molecular.

ARNasa inhibidor:Yeasen expresa y purifica inhibidores de ARNasa recombinantes de ratón/porcino en una forma soluble dentro de E. coli, que pueden inhibir ampliamente varios tipos de ARNasas (ARNasa A, B, C) sin suprimir la actividad de las polimerasas. Estos inhibidores han sido validados para su uso generalizado en múltiples aplicaciones, como RT-PCR/qPCR, RNA-seq, clonación de ADNc y construcción de bibliotecas. Además de los inhibidores de ARNasa convencionales, Yeasen también ha desarrollado inhibidores de ARNasa procesados ​​con la tecnología de residuos ultrabajos UCF.ME®, que tienen un menor residuo en el huésped y son adecuados para aplicaciones con requisitos más estrictos para las bacterias de fondo, lo que ayuda a resolver la interferencia bacteriana de fondo en la detección de patógenos y mejora la precisión de la detección.

Uracilo ADN glicosilasa (enzima UDG/UNG):La enzima uracilo-ADN glicosilasa (UDG), cuando se utiliza junto con dUTP, puede establecer un sistema de prevención de contaminación por PCR. La enzima termolábil y de bajo contenido de UDG de Yisheng puede evitar la actividad residual de las enzimas UDG convencionales después de la inactivación, que puede causar la degradación de los productos de amplificación que contienen dU a temperatura ambiente. También evita los falsos positivos en los resultados de PCR causados ​​por las bacterias de fondo presentes en las enzimas moleculares. Esto es crucial para identificar con precisión los patógenos infecciosos y ayudar en el diagnóstico clínico de infecciones y enfermedades infecciosas.

Anticuerpo Taq ADN polimerasa:La amplificación no específica es uno de los principales problemas que afectan significativamente el rendimiento de la PCR, y la tecnología de inicio en caliente puede reducir eficazmente la amplificación no específica. La enzima de inicio en caliente modificada con anticuerpos tiene una alta eficiencia de sellado y un excelente rendimiento, siendo estable a temperatura ambiente con una rápida tasa de liberación de la actividad enzimática.La enzima Taq de inicio en caliente con doble anticuerpo desarrollada por Yisheng Biotech no solo sella la actividad de la polimerasa 5'→3' de la enzima Taq, sino que también sella simultáneamente la actividad de la exonucleasa 5'→3'. Este enfoque dual previene eficazmente la amplificación inespecífica causada por errores de emparejamiento o dímeros de cebadores y también previene la generación de señales inespecíficas debido a la degradación de sondas o cebadores, mejorando así doblemente la estabilidad de los reactivos.

4、Mezcla maestra qPCR de un solo tubo de alto rendimiento universal

Yeasen Biotech ofrece reactivos de qPCR de alta calidad, que incluyen una polimerasa Taq de arranque en caliente de alto rendimiento combinada con un sistema de tampón optimizado. La empresa ofrece una gama de productos, que incluyen mezclas maestras universales, mezclas maestras todo en uno, mezclas maestras de genotipado y mezclas maestras liofilizadas. Estos reactivos se caracterizan por su facilidad de uso, alta sensibilidad y gran estabilidad, lo que acelera el desarrollo de sus productos de diagnóstico molecular.

• buena versatilidad：Es adecuado para múltiples tipos de cebadores y sondas múltiples (se han verificado más de 40 tipos diferentes de objetivos) y tiene un excelente rendimiento de amplificación;
• yo Premezcla de estabilidad súper completa: estable a 37 ℃ durante 14 días, 4 ℃ durante 28 días, congelación y descongelación repetidas 50 veces;

• Alta sensibilidad y buena especificidad: La sensibilidad puede detectar 0,25 copias/μL y la especificidad de 48 agujeros no tiene pico negativo;
• Programa de soporte rápido:compatible con programa rápido, 30 minutos pueden producir resultados;
• Sistema anticontaminación dUP/UDG: Se introduce el sistema anticontaminación dUTP/UDG para prevenir eficazmente la contaminación por aerosoles;
• Aplicación multiplataforma y multisistema: Bio-Rad CFX96, ABI Q5, 7500, Slan, Tianlong, etc.

Figura 5: Con base en el estudio de estabilidad del reactivo premezclado todo en uno, 16710ES se trató de tres maneras diferentes (4 °C, 37 °C y ciclos de congelación-descongelación). Los grupos experimentales se trataron a 4 °C y 37 °C durante 7 días, respectivamente, y se sometieron a 50 ciclos de congelación-descongelación, mientras que el grupo de control (almacenado a -20 °C) se evaluó para la estabilidad bajo cuatro sistemas de amplificación multiplex (los grupos 1, 2 y 4 son sistemas de amplificación cuádruplex, y el grupo 3 es un sistema de amplificación triplex). Los resultados demostraron que la desviación de los valores de Ct (ΔCt) entre los grupos experimental y de control estaba dentro de ±0,5, y la desviación del valor de fluorescencia estaba dentro del 15%, lo que demuestra que el reactivo premezclado todo en uno de Yeasen posee una excelente estabilidad en la amplificación multiplex.

5. Mezcla maestra universal de RT-qPCR de alto rendimiento

Los reactivos RT-qPCR de un solo paso integran el rendimiento superior de la transcriptasa inversa y las enzimas de arranque en caliente, complementados con un sistema de amortiguación optimizado, lo que permite la detección rápida y sensible de plantillas de copia de un solo dígito. Validados por varios mercados de clientes, incluidos los de enfermedades respiratorias, epidemias animales y sistemas de investigación, estos reactivos pueden satisfacer las necesidades de varias direcciones de aplicación.

• buena versatilidad:Es adecuado para la amplificación por qPCR y la detección de ácidos nucleicos de microorganismos patógenos, genomas humanos, plantas y otras especies;
• Alta sensibilidad：El sistema de tampón cuidadosamente optimizado mejora la sensibilidad de detección de plantillas de baja concentración hasta 250 copias/ml;
• Sistema anticontaminación dUP/UDG：Se introduce el sistema anticontaminación dUTP/UDG termolábil para degradar eficientemente la contaminación por aerosoles de los productos, reducir los falsos positivos y garantizar resultados auténticos;
• Programa de soporte rápido: compatible con programa rápido, 40 minutos pueden producir resultados;
• Súper estabilidad: Estable a 37 ℃ durante 14 días, congelación y descongelación repetidas 10 veces.

Evaluación de la sensibilidad de detección

Figura 6: Utilizando la premezcla RT-qPCR de Yeasen (16630ES) y un producto comparable del Proveedor-A, se realizó la detección simultánea de cuatro patógenos (virus de la parainfluenza humana HPIV2, virus de la parainfluenza humana HPIV4, virus respiratorio sincitial HRVA y rinovirus RSVA). Los resultados indicaron que la sensibilidad de detección de 16630ES fue mayor que la del Proveedor-A.

Recomendación de producto

产品类型	El hombre que se esconde detrás	货号
Serie de enzimas de PCR	ADN polimerasa Hieff UNICON® Hotstart E-Taq, 5 U/μL	10726ES
	Transcriptasa inversa Hifair® V (200 U/μL)	11300ES
	Uracilo ADN glicosilasa (UDG/UNG), termolábil, 1 U/μL	10303ES
	Inhibidor de la ARNasa murina (40 U/µL)	10603ES
	Mezcla de dNTP (25 mM cada uno)	10125ES
Serie de enzimas únicas de PCR ultralimpia con residuos de hospedador ultrabajos	ADN polimerasa Taq sensible al inicio en caliente Hieff UCF.ME® (5 U/μL)	14314ES
	Transcriptasa inversa Hifair UCF.ME® V (200 U/μL)	14608ES
	UCF.ME® Uracilo ADN glicosilasa (UDG/UNG), termolábil, 1 U/μL	14466ES
	Universidad de California en Berkeley.Inhibidor de la ARNasa murina ME® (40 U/µL)	14672ES
Serie de monoenzimas PCR Lyo-Ready	ADN polimerasa Hieff UNICON® HotStart E-Taq, sin glicerol (5 U/μL)	14316ES
	Transcriptasa inversa Hifair® V, sin glicerol (600 U/μL)	11301ES
	Uracilo ADN glicosilasa (UDG), termolábil (1 U/μL, sin glicerol)	10707ES
	Inhibidor de la ARNasa murina (200 U/µL, sin glicerol)	10703ES
Mezcla maestra de RT-qPCR	Kit de sondas RT-qPCR multiplex de un solo paso Hifair® C203P1 (UDG Plus)	16630ES
	Kit de sondas RT-qPCR de un solo paso Hifair® V Multiplex (UDG Plus)	11899ES
	Kit RT-qPCR de un solo paso Hifair® Lyo Multiplex	11831ES
Mezcla maestra para qPCR	Mezcla para qPCR Hieff Unicon® Universal TaqMan Pro U+ (un tubo)	16710ES
	Mezcla maestra para qPCR Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex (UDG plus)	13891ES
	Mezcla maestra para qPCR TaqMan Hieff Unicon® Superpro Ⅰ (UDG plus)	11827ES
	Mezcla maestra para qPCR Hieff Unicon® Purepro Ⅰ TaqMan (UDG plus)	11853ES
	Mezcla maestra para qPCR Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex (UDG plus)	11893ES