Al utilizar enzimas tradicionales de alta fidelidad para PCR, es inevitable encontrarse con algunos problemas espinosos. Por ejemplo, la fidelidad puede no ser suficiente, lo que lleva a mutaciones o deleciones en las bases objetivo incluso después de secuenciar los fragmentos amplificados. El tiempo de amplificación también es relativamente largo; a veces, amplificar un fragmento de 5 kb puede llevar casi 2 horas. ¡Ahora, XiaoYi presenta una PCR rápida de alta fidelidad para resolver sus problemas! -- Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (premezcla de PCR ultrarrápida de alta fidelidad).
El 2× Hieff Canace™ Mezcla maestra de PCR AdvanceFast (con colorante) Contiene un indicador de electroforesis preagregado, lo que permite que los productos de PCR se utilicen directamente para la electroforesis. Los productos amplificados tienen extremos romos. Esta mezcla de enzimas de alta fidelidad ofrece las ventajas de ser rápida, simple, altamente sensible, altamente específica y estable. En el sistema de reacción, solo se deben agregar cebadores y plantillas. Además, el producto también contiene un protector específico, que garantiza que la premezcla de PCR de alta fidelidad mantenga una actividad estable incluso después de congelaciones y descongelaciones repetidas.
Características del producto
- Alto Fidelidad: Bajo desajuste tasa, con a base desajuste relación de 231/300.000 en alto GC propenso a mutaciones secuencias;
- Rápido Amplificación Velocidad: Extensión tasa como rápido como 5 artículos de segunda clase por KB;
- Ancho Aplicabilidad: Capaz de cubierta genes con 20-80% GC contenido, tolera ratón lisados y 20% sangre;
- Bien Estabilidad: Poder ser almacenado en 37°C para 7 días sin conmovedor producto actuación;
- Rápido y Conveniente: Simplemente agregar cebadores y plantilla para amplificación, llega con cargando teñir para directo electroforesis.
Demostración del rendimiento del producto
Alta fidelidad, baja tasa de desajustes
Utilizando genomas de diferentes especies como plantillas, se seleccionaron para la amplificación seis fragmentos ricos en GC que son altamente propensos a mutaciones/pérdidas de bases. Los respectivos productos de PCR se clonaron en vectores y se seleccionaron 100 clones individuales para cada secuencia para la secuenciación con el fin de confirmar la aparición de desajustes de bases/mutaciones. Los resultados mostraron que la mezcla maestra de PCR rápida de alta fidelidad (10164ES) tuvo una tasa superior de desajustes de bases/mutaciones en comparación con los reactivos de marcas nacionales e internacionales.
El tiempo de extensión puede alcanzar hasta 5 segundos./kb
Utilizando la premezcla enzimática de alta fidelidad rápida (10164ES) y el Producto T, se amplificaron fragmentos de diferentes longitudes (0,4-10 kb) a partir de 100 ng de plantilla de ADN genómico humano a una velocidad de extensión de 5 s/kb, con un tiempo de extensión requerido de 5 s/kb. Los resultados mostraron que la premezcla enzimática de alta fidelidad rápida (10164ES) puede amplificar fragmentos de hasta 10 kb a una velocidad de extensión de 5 s/kb.
Puede amplificar fragmentos de genes con diferente contenido de GC
Utilizando la premezcla enzimática de alta fidelidad rápida (10164ES) para amplificar fragmentos de genes con un contenido de GC del 23 al 76 % a partir de plantillas de ADN genómico humano, con un tiempo de extensión establecido en 5 s/kb. Los resultados mostraron que el producto tiene una buena especificidad de amplificación y es capaz de amplificar fragmentos con diferentes contenidos de GC.
Capaz de amplificar fragmentos de genes con contenido variable de GC
Utilizando la premezcla enzimática de alta fidelidad rápida (10164ES) para amplificar fragmentos de longitudes variables de diferentes muestras, con un tiempo de extensión establecido en 5-10 segundos por kilobase. Los resultados indican que este producto exhibe una excelente especificidad de amplificación y es compatible con la amplificación de diferentes fragmentos de varias plantillas.
Nota: 1. ADN genómico de ratón 1 kb; 2. ADN genómico de ratón 2 kb; 3. ADN genómico de ratón 6 kb; 4. ADN genómico de maíz 1 kb; 5. ADN genómico de arroz 2 kb-A; 6. ADN genómico de arroz 2 kb-B; 7. ADNc de células 293 humanas 1 kb; 8. ADNc de células 293 humanas 2 kb; 9. ADNc de células 293 humanas 3 kb; 10. ADNc de células 293 humanas 12 kb; 11. Caldo de E. coli 8 kb; 12. Caldo de E. coli 16 kb; 13. ADN genómico de arroz 10 kb-A; 14. ADN genómico de arroz 10 kb-B; 15. ADN genómico de arroz 10 kb-C; 16. ADN genómico de arroz 20 kb-A; 17. ADN genómico de arroz 20 kb-B; 18. Amplificación directa de sangre humana 3 kb.
Alta tasa de detección de amplificación de plantillas en diferentes especies
Utilizando la premezcla enzimática de alta fidelidad rápida (10164ES), se amplificaron fragmentos con contenido de GC de entre 0,5 y 10 kb en Arabidopsis, colza y patata, con un tiempo de extensión de 5 s/kb. Los resultados demostraron que la premezcla enzimática de alta fidelidad rápida (10164ES) puede garantizar una amplificación exitosa.
Utilizando la premezcla enzimática rápida de alta fidelidad (10164ES), se amplificaron secuencias aleatorias (seleccionadas al azar) de Arabidopsis, colza, moscas de la fruta, Caenorhabditis elegans y pez cebra, con tamaños de fragmentos que oscilaban entre 0,5 y 10 kb y que cubrían entre el 20 y el 80 % del contenido de GC. El tiempo de extensión se estableció en 5 s/kb. Los resultados mostraron que la premezcla enzimática rápida de alta fidelidad (10164ES) tiene una alta tasa de detección.
Buena estabilidad
Utilizando la premezcla enzimática de alta fidelidad rápida (10164ES) que se ha acelerado por calor y se ha almacenado a 37 ℃ durante 3 días y 7 días, respectivamente, para amplificar fragmentos de ADN de 3 kb y 5 kb a partir de 100 ng de ADN genómico humano, con un tiempo de extensión establecido en 5 s/kb. Los resultados muestran que el producto tiene buena estabilidad.
Comentarios de los clientes sobre la prueba
Animal ADN genómico-120 pb-50 % GC
Evaluación del cliente: El proceso de PCR es rápido, las bandas son apropiadas y se pueden cargar directamente en la electroforesis en gel de agarosa. Las bandas de la marca N están sesgadas hacia arriba, lo que puede deberse a la influencia de su propio tampón, y dado que no se agregó ningún tampón de carga, este producto puede reemplazar la enzima de alta fidelidad en mi protocolo experimental actual.
Planta ADNc-729 pb-45,13 % GC
Evaluación del cliente: En comparación con la marca T, las bandas de clonación son más claras y uniformes, y todo el proceso de PCR es más rápido. No es necesario agregar colorante adicional al ejecutar el gel, lo que resulta muy conveniente y ahorra tiempo.
Microbiano ADN genómico: 1158, 1953 pb, 58,8 %, 52,9 % GC
Evaluación del cliente: En comparación con la marca V, el efecto es comparable, pero personalmente lo encuentro aún mejor.
Planta ADNc-2000 pb-40%GC
Evaluación del cliente: El efecto es muy bueno y la tira es clara.
Guía de selección de PCR de alta fidelidad
| Posicionamiento del producto | Nombre del producto | Gato# |
| 5s/kb, asegura fidelidad y velocidad (Con Teñir) | 2× Hieff Canace™ Mezcla maestra de PCR AdvanceFast (con colorante) | 10164ES |
| 5s/kb, asegura fidelidad y velocidad (Sin Dye) | 2× Hieff Canace™ Mezcla maestra de PCR AdvanceFast | 10163ES |
| 83×Taq, alta tasa de detección (con colorante) | 2×Hief Canace™ Plus PCR Master Mix (con colorante) | 10154ES |
| 83×Taq enzima única + tampón separado | 10153ES |