La purificación de proteínas es una técnica fundamental en bioquímica y biología molecular, ampliamente utilizada en investigación, diagnóstico y aplicaciones terapéuticas. Para estudiar una proteína específica, el primer paso es aislarla y purificarla a partir de muestras biológicas. Sin embargo, lograr una proteína de alta pureza puede ser un desafío, dada la diversidad de proteínas y la complejidad de los sistemas biológicos. Comprender los principios básicos de la purificación de proteínas y seleccionar las técnicas adecuadas para su investigación puede mejorar en gran medida la eficiencia y el rendimiento de su flujo de trabajo.
Los fundamentos de la purificación de proteínas
La purificación de proteínas se basa en las diferencias en las propiedades físicas y químicas de las proteínas, como el tamaño, la carga, la hidrofobicidad y la afinidad por ligandos específicos. Al aprovechar estas diferencias, los investigadores pueden separar eficazmente las proteínas objetivo de otros componentes biológicos, lo que minimiza la contaminación.
A continuación se presentan las principales técnicas de purificación de proteínas basadas en distintos mecanismos de separación:
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| Filtración en gel | Intercambio iónico | Interacción hidrofóbica | Afinidad |
| Mecanismo de separación | Tamaño | Carga superficial de la proteína | Hidrofobicidad | Afinidad específica |
| Selectividad | Medio | Alto | Alto-medio | Muy alto |
| Capacidad de carga | Bajo | Alto | Alto | Alto |
| Velocidad de purificación | Medio-bajo | Alto | Alto | Alto |
| Biocompatibilidad | Muy bien | Bien | Medio-bueno | Bien |
| Rendimiento de proteína objetivo | Alto | Alto | Medio-alto | Alto |
Cada una de estas técnicas se puede optimizar seleccionando los materiales y las columnas adecuados. El método ideal depende de las características de la proteína y del nivel de pureza requerido para las aplicaciones posteriores.
Optimización del flujo de trabajo de purificación de proteínas con Yaliviar Productos de Biología
En Yeasen En el campo de la biología, ofrecemos una amplia gama de reactivos y materiales de alta calidad diseñados para optimizar la purificación de proteínas. Ya sea que esté manipulando muestras biológicas complejas o que requiera proteínas de alto rendimiento y alta pureza, ofrecemos herramientas para mejorar su proceso de purificación. A continuación, se incluye una descripción general de algunos de nuestros productos clave para ayudarlo a optimizar sus flujos de trabajo de purificación:
Su etiqueta de purificación de proteínas ((Cat. n.° 20502ES):
En la expresión de proteínas recombinantes, la Su etiqueta (normalmente 6×His) se utiliza ampliamente debido a su pequeño tamaño, baja inmunogenicidad e impacto mínimo en la función de la proteína. Las proteínas de etiqueta His se pueden purificar eficientemente mediante resinas de afinidad queladas con iones de níquel, como las resinas Ni-NTA. Resina de agarosa HisSep Ni-NTA (Cat#20502ES) proporcionado por Yaliviar Biología Utiliza un gel de agarosa altamente reticulado como matriz, combinado con el ligando de ácido triacético nitrogenado (NTA) de coordinación cuádruple para formar quelatos de iones de níquel estables. La estructura combinada garantiza una unión de proteínas y un rendimiento de elución eficientes.
Purificación por afinidad de anticuerpos de etiqueta
La purificación por afinidad de los anticuerpos de etiqueta utiliza una unión altamente específica entre el anticuerpo y su etiqueta específica para lograr la purificación de la proteína de fusión. Las etiquetas comunes incluyen Bandera, HA, Myc, etc. Al utilizar los medios de afinidad de anticuerpos correspondientes, la proteína de interés se puede aislar de manera eficiente de muestras complejas.
Biología de Yeasen Proporciona una variedad de productos de purificación por afinidad de anticuerpos de etiqueta:
- Afinidad anti-bandera Gel (Gato n.° 20584ES):
Preparado a partir de anticuerpo monoclonal IgG2b murino de alta calidad con gel de agarosa altamente reticulado al 4 % a través deugh acoplamiento de suministro, tiene una alta capacidad de carga de proteína de fusión Flag-tag, suapto para inmunoprecipitación y purificación de proteínas Flag-tag. yeasen.com
- Gel de afinidad anti-HA(Gato n.° 20586ES):
Preparado a partir de anticuerpo monoclonal IgG1 murino de alta calidad y gel de Sepharosa 4B a través del acoplamiento de suministro, tiene una alta capacidad de carga de proteínas de fusión HA-tag, adecuado para inmunoprecipitación y purificación de proteínas HA-tag.con
- Gel de afinidad anti-Myc（Gato n.° 20587ES）:
El anticuerpo monoclonal IgG1 murino de alta calidad está acoplado al gel Sepharose 4B, diseñado para la purificación de proteínas marcadas con Myc, con alta especificidad y alta capacidad de unión.
- Perlas inmunomagnéticas anti-bandera（Cat.#20565ES）:
Esta perla inmunomagnética está acoplada a microesferas de agarosa magnéticas utilizando un anticuerpo monoclonal IgG2b derivado de ratón de alta calidad, que puede purificar rápidamente proteínas marcadas con Flag bajo la acción de campos magnéticos y es adecuado para la purificación de muestras de tamaño pequeño.
Purificación por afinidad de anticuerpos (Cat#36401ES):
Purificación por afinidad de anticuerpos es un método que utiliza la unión específica de un anticuerpo a su antígeno para la purificación de proteínas. La resina de purificación de agarosa de proteína A recombinante resistente a los álcalis (Cat#36401ES) se utiliza comúnmente como medio de purificación por afinidad de anticuerpos y se utiliza ampliamente para la purificación y el enriquecimiento de anticuerpos.
Proteinasa
En los estudios de proteínas, se emplean proteasas para escindir las etiquetas de fusión y restaurar el estado natural de la proteína objetivo. La incorporación de estas proteasas en el flujo de trabajo de purificación de proteínas puede mejorar la calidad y la funcionalidad de las proteínas objetivo, lo que facilita los proyectos de investigación y desarrollo avanzados.
- Enteroquinasa recombinante (Cat#20401ES):
La enteroquinasa, también conocida como enteropeptidasa, es una serina proteasa que escinde específicamente después de la secuencia de aminoácidos DDDDK. La enteroquinasa recombinante de Yeasen se expresa en Escherichia coli y está libre de etiquetas, lo que garantiza que no interfiera con las aplicaciones posteriores. Esta enzima es ideal para eliminar las etiquetas de fusión de las proteínas recombinantes, lo que facilita la producción de proteínas nativas para estudios estructurales y funcionales.
- yoPNGase F (Cat. n.° 20407ES):
La PNGasa F es una amidasa que escinde específicamente los residuos de GlcNAc y Asn más internos de las glicoproteínas ligadas a N. La PNGasa F de Yeasen se proporciona en una concentración de 100 000 U/ml, lo que ofrece una alta actividad para las reacciones de desglicosilación. Esta enzima es crucial para estudiar las estructuras y funciones de las glicoproteínas, ya que elimina los glicanos ligados a N sin afectar la estructura principal del péptido.
- Tripsina recombinante (MS-SAFE) (Cat#20416ES):
La tripsina es una proteasa de serina que rompe los enlaces peptídicos en el lado carboxilo de los residuos de lisina y arginina. La tripsina recombinante de Yeasen es MS-SAFE, lo que significa que es adecuada para aplicaciones de espectrometría de masas debido a su alta pureza y actividad autolítica mínima. Esta enzima es ideal para estudios proteómicos, incluida la digestión de proteínas para análisis de espectrometría de masas.
| Purificación Método | Tipo de reactivo | Tipo de producto | Productos recomendados |
| Filtración en gel | Dextrano Gel Cromatografía | Rellenos desalinizadores Columnas preempacadas para desalinización Columnas de gravedad para desalinización Columnas giratorias
| Columna de desalinización G25 M（Cat. n.° 20590ES） Columna de desalinización por centrifugación, 0,5 ml （Gato n.° 20599ES） Columna de desalinización por gravedad, 8.3 ml (Gato n.° 20741ES） |
| Agarosa Gel Cromatografía | Relleno Columnas preempacadas | Geldex 200 PG, cromatografía en gel de agarosa de alta resolución (10-600 kDa) (n.° de cat. 20598ES) Columna de cromatografía Geldex 200 PG （Gato n.° 20593ES） | |
| Intercambio iónico | Intercambio aniónico Cromatografía | Relleno Columnas preempacadas | Agarosa Q HP (cromatografía de intercambio aniónico fuerte Q HP) (Cat. n.° 20460ES) Columna preempacada de intercambio aniónico fuerte Q HP, 5 ml (Cat. n.° 20462ES) |
| Cromatografía de intercambio catiónico | Agarosa SP HP (relleno de cromatografía de intercambio catiónico fuerte SP HP) (Cat. n.° 20463ES) Columna preempacada de intercambio catiónico fuerte SP HP, 5 ml (Cat. n.° 20465ES) | ||
| Cromatografía de interacción hidrofóbica | Hidrofóbico débil Cromatografía | Relleno Columnas preempacadas | Medio de cromatografía hidrofóbica débil de butilo de alta resolución (Cat. n.° 20484ES) Columna precargada para cromatografía débilmente hidrofóbica de butilo HP, 5 ml (Cat. n.° 20485ES) |
| Fuertemente hidrofóbico Cromatografía | Medio de cromatografía de fenilo de alta resolución fuertemente hidrofóbico (Cat. n.° 20486ES) Columna precargada para cromatografía fuertemente hidrófoba Phenyl HP, 5 ml (Cat. n.° 20487ES) | ||
| Purificación por afinidad | Su etiqueta Purificación de proteínas | Resina Columnas preempacadas Perlas magnéticas de purificación
| Resina purificadora de proteína agarosa con etiqueta His (Cat. n.° 20502ES) Columna precargada de purificación de proteínas con etiqueta His, 5 ml (Cat. n.° 20504ES) Perlas magnéticas para purificación de proteínas con etiqueta His (Cat. n.° 20561ES) |
| Impuesto sobre bienes y servicios-etiqueta Purificación de proteínas | Resina Columnas preempacadas Perlas magnéticas de purificación
| Resina de glutatión agarosa (para purificación de proteínas marcadas con GST) (Cat#20507ES) Columna precargada de purificación de proteínas etiquetadas con GST, 5 ml (Cat. n.° 20510ES) Perlas magnéticas para purificación de proteínas etiquetadas con GST (Cat. n.° 20562ES) | |
| MBP-etiqueta Purificación de proteínas | Resina Columnas preempacadas
| Resina de purificación altamente reticulada con proteína etiquetada con MBP (Cat. n.° 20515ES) Columna precargada de purificación de proteínas etiquetadas con MBP, 5 ml (Cat. n.° 20517ES) | |
| estreptococo(Ⅱ) Etiqueta Purificación de proteínas | Resina Columnas preempacadas
| Resina de purificación de proteína de agarosa marcada con Strep(II) (Cat. n.° 20495ES) | |
| Biotina-etiqueta Purificación de proteínas | Resina Columnas preempacadas Perlas inmunomagnéticas | Resina de purificación de agarosa y estreptavidina (n.° de cat. 20512ES) Columna precargada de purificación molecular de biotina, 5 ml (Cat. n.° 20514ES) Perlas inmunomagnéticas de estreptavidina (SAV) (n.° de cat. 47503ES) | |
| Purificación por afinidad de anticuerpos de etiqueta | Gel Perlas inmunomagnéticas | Gel purificador de afinidad anti-bandera (Cat. n.° 20584ES) Gel purificador de afinidad anti-HA (Cat. n.° 20586ES) Gel purificador de afinidad anti-Myc (Cat. n.° 20587ES) Perlas inmunomagnéticas anti-bandera (Cat. n.° 20565ES) | |
| Purificación por afinidad de anticuerpos | Resina Columnas preempacadas Perlas inmunomagnéticas | Resina de purificación de proteína A recombinante en agarosa (Cat. n.° 36401ES) Resina de purificación de proteína G con agarosa (Cat. n.° 36405ES) Resina de purificación de proteína A/G con agarosa (Cat. n.° 36403ES) Perlas inmunomagnéticas de proteína A/G (Cat.#36417ES) | |
| Otras purificaciones por afinidad de anticuerpos | Resina Columnas preempacadas
| Resina purificadora de alta eficiencia para la eliminación de endotoxinas (Cat. n.° 20518ES) Medio de purificación por afinidad de heparina (Cat. n.° 20493ES) | |
| El hombre que se fue | Proteasas | Enzimas de escisión de etiquetas Glicosidasas Enzimas de grado espectrométrico de masas | MI.Enteroquinasa recombinante expresada en E. coli (sin etiqueta) (Cat. n.° 20401ES) Trombina bovina (alta viabilidad, >2000 UI/mg) (Cat#20402ES) Proteasa rTEV Proteasa recombinante del virus del grabado del tabaco (Cat. n.° 20403ES) PNGasa F, N-glicosidasa F (100000 U/mL) (Cat. n.° 20407ES) Tripsina recombinante (MS-SAFE) Tripsina recombinante (grado de espectrometría de masas) (Cat. n.° 20416ES) |
| Consumibles para cromatografía | Columnas vacías de flujo por gravedad Tipo Columnas Vacías Columnas YXK Bolsas de diálisis | Columna vacía para cromatografía de gravedad de 12 ml (n.° de cat. 20523ES) Columna vacía tipo C de 5 ml (conectada a Akata, jeringa o bomba peristáltica) (Cat. n.° 20526ES) Columna vacía para cromatografía YXK16/70 (n.° de cat. 20443ES) Bolsa de diálisis de 27 mm (MWCO 50 kDa) (Cat. n.° 20534ES) |
Conclusión: adapte su flujo de trabajo a sus necesidades
Optimizar el flujo de trabajo de purificación de proteínas es fundamental para lograr proteínas de alta pureza y alto rendimiento para su investigación o aplicación. Si comprende los principios de purificación y selecciona las herramientas adecuadas, podrá optimizar su proceso y evitar errores comunes. Yeasen Biology proporciona reactivos y consumibles de la más alta calidad para todas las etapas de la purificación de proteínas, garantizando que sus proteínas sean puras, funcionales y listas para el análisis.
Para obtener más información sobre cómo nuestros productos pueden mejorar su proceso de purificación de proteínas, visite nuestras páginas de productos o comuníquese con nuestro equipo para obtener recomendaciones personalizadas.
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