Yeasen Gel de afinidad anti-DYKDDDDK (Flag): purificación precisa para proteínas de membrana de baja abundancia

En el campo de la investigación biomédica, la purificación de proteínas es una tecnología clave para explorar los misterios de la vida. Sin embargo, los métodos de purificación tradicionales son ineficientes y tienen un coste elevado, especialmente en el caso de las proteínas de membrana, que son el foco de la investigación en biología estructural. Estas proteínas son estructuralmente complejas, tienen bajos niveles de expresión en las membranas celulares y son sensibles a las condiciones ambientales, lo que hace que su purificación sea especialmente difícil. Yeasen La biotecnología, con sus destacadas capacidades de I+D, ha lanzado el sistema mejorado Gel de afinidad anti-DYKDDDDK(Flag) (Cat. n.° 20584ES), una herramienta poderosa para la purificación de proteínas eficiente y conveniente, incluso para proteínas de membrana difíciles.

Rendimiento del producto

1. Alta especificidad y alta capacidad de unión: ventajas clave para la captura de proteínas objetivo

Yeasen Gel de afinidad anti-DYKDDDDK(Flag) (Cat. n.° 20584ES) Se prepara mediante el acoplamiento covalente de anticuerpos monoclonales IgG2b de ratón de alta calidad con un gel de agarosa altamente reticulado al 4 %. Este proceso de fabricación único otorga al producto una especificidad extremadamente alta, lo que le permite reconocer y unirse con precisión a las proteínas de fusión con la etiqueta Flag. Ya sea la proteína de fusión Flag N-terminal modificada por Met (Proteína Met-Flag), la proteína de fusión Flag N-terminal (Proteína bandera), o la proteína de fusión Flag C-terminal (Bandera de proteína), el gel puede manipularlos con facilidad.

En la purificación de proteínas de membrana, esta especificidad es particularmente importante porque estas proteínas son estructuralmente complejas y propensas a la unión no específica con otras proteínas. La alta especificidad del gel Flag reduce eficazmente la interferencia de proteínas no específicas, lo que garantiza una alta pureza de las proteínas de membrana purificadas. Además, el gel tiene una alta capacidad de unión para las proteínas de fusión marcadas con Flag (al menos 1,1 mg de proteína/ml gel). Esto significa que incluso si la proteína objetivo se expresa en niveles bajos, aún puede capturarse y purificarse de manera eficiente utilizando el gel Flag.

2. Alta pureza y alto rendimiento: posibilitando aplicaciones posteriores

Yeasen Gel de afinidad anti-DYKDDDDK(Flag) (Cat. n.° 20584ES) Tiene una unión no específica mínima de impurezas, lo que da como resultado muestras de proteínas de alta pureza después de la purificación. Esto es crucial para aplicaciones posteriores, como ensayos de bioactividad y análisis estructural. Las muestras de proteínas de alta pureza brindan datos experimentales más precisos, lo que sienta una base sólida para los estudios de los investigadores.

3. Flujo de trabajo experimental optimizado: simplificación de los desafíos de la purificación de proteínas

La purificación de proteínas debe realizarse en condiciones suaves para evitar daños estructurales a las proteínas, especialmente en el caso de proteínas de membrana complejas. Yeasen Gel de afinidad anti-DYKDDDDK(Flag) (Cat. n.° 20584ES) está diseñado con esto en mente. Su búfer de almacenamiento es TBS que contiene 50% de glicerol a pH 7.4, que no solo protege la actividad del gel sino que también proporciona un entorno suave para la purificación de proteínas.

El proceso de purificación con el gel Flag es simple y eficiente. Para facilitar el uso de la elución del péptido 1×Flag, el paquete del producto incluye un péptido 1×Flag de cortesía (Cat#20572ES). Esto hace que el proceso de elución sea suave (prácticamente sin dañar las proteínas) y muy conveniente (mejorando aún más la facilidad de experimentación).

4. Múltiples tamaños y opciones de envío flexibles: satisfaciendo diversas necesidades experimentales

Teniendo en cuenta las diferentes escalas y necesidades de los distintos laboratorios, Yeasen ofrece el gel Flag en varios tamaños, incluidos 1 ml, 5 ml, 25 ml y 100 mlYa sea para una exploración preliminar a pequeña escala o para la producción de proteínas a gran escala, existe una opción adecuada disponible. Para compras anuales de gran volumen, los clientes pueden optar por recibir los envíos en lotes, lo que les permite disfrutar de descuentos en los precios y evitar la presión de un inventario excesivo.

Datos de prueba

M: Marcador de proteína 1: Muestra cruda de la precolumna de proteína Flag-N/Flag-M/Flag-C 2: Flujo posterior a la columna de la proteína Flag-N/Flag-M/Flag-C 3: Elución (elución a pH 2,7) 4: Elución (elución a pH 12) 5: Elución (1×Elución del péptido bandera) 6: Gel purificado (elución a pH 2,7) 7: Gel purificado (elución a pH 12) 8: Gel purificado (1×Elución del péptido bandera) a:Bandera-N   b:Bandera-M   do:Bandera-C

Figura 1.   Yeasen Gel de afinidad anti-DYKDDDDK(Flag) Resultados de purificación para proteínas de baja expresión (Flag-N (a), Flag-M (b), Flag-C (c)) mostrados en SDS-PAGE.

M: Marcador de proteína 1: Muestra cruda de proteína Flag-C antes de la columna 2: Flujo posterior a la columna de la proteína Flag-C 3: Elución (elución a pH 2,7) 4: Elución (elución a pH 12) 5: Elución (1×Elución del péptido bandera) 6: Gel purificado (pH 2.7 elución) 7: Gel purificado (elución a pH 12) 8: Gel purificado (1×Elución del péptido bandera) a:Yeasen b:Marca S*   do:Marca G*

Cifra 2. Comparación de Yeasen (a) conBrand S* (b) y Brand G* (c) Geles anti-Flag para purificar proteínas de baja expresión (por ejemplo, proteínas de membrana) que se muestran en SDS-PAGE.

Conclusiones:

1. Yeasen Gel de afinidad anti-DYKDDDDK(Flag) (Cat. n.° 20584ES) tiene alta especificidad y puede unirse a etiquetas Flag en varias posiciones (proteínas de fusión Flag N-terminal, proteínas de fusión Flag N-terminal modificadas con Met, proteínas de fusión Flag C-terminal).

2. En condiciones de expresión de proteína diana extremadamente baja (por ejemplo, proteínas de membrana), Yeasen Gel de afinidad anti-DYKDDDDK(Flag) (Cat#20584ES) logra rendimientos y purezas significativamente mayores en comparación con los competidores. El uso de Yeasen El péptido 1×Flag complementario (Cat#20572ES) para elución proporciona resultados aún mejores.

Soluciones completas para proteínas de fusión con etiqueta de bandera:

Enteroquinasa recombinante (Cat#20395ES):Proteasa específica que escinde el extremo carboxilo de la lisina precedido por cuatro ácidos aspárticos: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys. Esta secuencia forma parte de la etiqueta octapeptídica Flag (DYKDDDDK). La enteroquinasa recombinante (rEK) puede eliminar fácilmente la etiqueta Flag de las proteínas de fusión, lo que la convierte en una herramienta ideal para estudiar la estructura y la función de las proteínas nativas.

Perlas magnéticas anti-DYKDDDDK(bandera) (Cat. n.° 20565ES):Microesferas magnéticas de polímero preparadas mediante el acoplamiento covalente de anticuerpos monoclonales de ratón anti-DYKDDDDK (Flag) de alta calidad con perlas magnéticas a base de sílice (diámetro de 200 nm). Estas perlas son adecuadas para la inmunoprecipitación (IP) o co-inmunoprecipitación (Co-IP) de proteínas con la etiqueta Flag.

Información del producto

Nombre del producto	Número de producto	Especificación
Gel de afinidad anti-DYKDDDDK(Flag)	20584ES03/25/08	1 ml/5 ml/25 ml
Enteroquinasa bovina recombinante, His, expresada en levadura	20395ES60/76/90	100 tú/500 U/5000 U
Perlas magnéticas anti-DYKDDDDK(bandera)	20565ES03/08	1 ml/5 ml