Hieff Canace^MT. La ADN polimerasa de alta fidelidad Uracil+ es una nueva generación de ADN de alta fidelidad Polimerasa basada en la ADN polimerasa Pfu. La Hieff Canace^MT. La ADN polimerasa de alta fidelidad Uracil+ permite reacciones de PCR rápidas y precisas para plantillas complejas. Su fidelidad se mejora significativamente y evita por completo el fallo de amplificación causado por el uso de cebadores/plantillas/dNTP que contienen dUTP. El producto está equipado con un tampón enzimático optimizado y la adición de componentes que mejoran la PCR, lo que hace que la enzima sea altamente eficiente y adaptable a una amplia gama de plantillas, adecuada para la amplificación de plantillas complejas.

Componentes del producto

Envío y almacenamiento

Los componentes se envían con bolsas de hielo y pueden almacenarse a -20 °C durante 1 año.

Aplicación del producto

Amplificación de biblioteca de alta fidelidad utilizando cebadores/plantillas/dNTP que contienen dUTP.

Precauciones

1. Para su seguridad y salud, utilice bata de laboratorio y guantes desechables durante la operación.

2. ¡Solo para uso en investigación!

Instrucciones

Hieff Canace^MT. La ADN polimerasa de alta fidelidad Uracil+ se utiliza de una forma ligeramente diferente a las enzimas de alta fidelidad convencionales. Lea atentamente las instrucciones antes de usarla.

1. Sistema de reacción recomendado

Todas las operaciones deben realizarse en hielo. 2×Canace^MT. El tampón de PCR Uracil+ debe mezclarse bien después de descongelarlo. Antes de configurar el sistema, precaliente el instrumento de PCR. Después de agregar los componentes, mezcle bien la muestra con una pipeta y centrifugúela hasta el fondo del tubo; luego, colóquela en el instrumento de PCR precalentado para la amplificación. Después de su uso, vuelva a colocar todos los componentes a -20 °C para su almacenamiento.

Tabla 1. Reacción de amplificación por PCR

[Notas]:

1) Reactivos: Descongele suficientemente cada componente antes de su uso;

2) Plantillas: El uso de plantillas de ADN purificadas de alta calidad puede mejorar significativamente la eficiencia y la tasa de éxito de la amplificación;

3) dNTP: la concentración final recomendada de dNTP es de 200 μM. Los dNTP que se proporcionan en el kit no contienen dUTP. Si circunstancias especiales requieren la preparación de plantillas que contengan dUTP, se puede agregar más dUTP hasta una concentración final de 400 μM.

4) Concentración de polimerasa: se recomienda 1 U/50 μL. Puede optimizarse entre 0,5-2 U/50 μL, sin superar las 2 U/50 μL. Para evitar que la polimerasa degrade los cebadores debido a la actividad del exonucleido 3' → 5', se sugiere agregar polimerasa al sistema de reacción en el último paso.

5) Concentración final de Mg2+: La concentración final del sistema es de 2 mM. Solicite a nuestra empresa un tampón con baja concentración de Mg2+ o sin Mg2+ si tiene necesidades especiales.

2. Procedimiento de reacción recomendado

Tabla 2. Procedimiento de reacción de amplificación por PCR

[Notas]：

1) Temperatura y tiempo de desnaturalización inicial: se recomiendan 98 ℃. El tiempo recomendado es de 30 segundos para plantillas simples como ADN plasmídico, 1 minuto para bibliotecas, 3 minutos para plantillas complejas como ADNc y ADN genómico, y de 5 a 10 minutos para plantillas con alto contenido de GC.

2) Temperatura y tiempo de hibridación: se recomiendan 60 ℃ o se puede configurar un gradiente de temperatura para encontrar la temperatura óptima para la hibridación del cebador según las necesidades. El tiempo de hibridación recomendado es de 20 segundos y se puede ajustar en un rango de 10 a 30 segundos. Un tiempo de hibridación demasiado prolongado puede provocar la dispersión de los productos amplificados en el gel.

3) Temperatura y tiempo de extensión: se recomiendan 72 ℃. El tiempo de extensión se ajusta según las necesidades reales.