Descripción
Descripción del Producto
2×Hief Canace™ Plus PCR Master Mix (con colorante) es una solución premezclada 2× lista para usar que contiene Hieff Canace™ Además, incluye ADN polimerasa de alta fidelidad, dNTP y un sistema de tampón optimizado. La mezcla incluye dos anticuerpos monoclonales que inhiben la actividad de la polimerasa y la actividad de la exonucleasa 3'→5' a temperatura ambiente, lo que permite una PCR de inicio en caliente altamente específica. La adición de factores de elongación permite la amplificación de fragmentos largos, con fragmentos objetivo de hasta 13 kb. Esta enzima exhibe actividad de ADN polimerasa 5'→3' y actividad de exonucleasa 3'→5', con una fidelidad 83 veces mayor que la de la ADN polimerasa Taq y 9 veces mayor que la de la ADN polimerasa Pfu común. Es adecuada para amplificar plantillas complejas y producir productos de PCR de extremos romos.
2×Hief Canace™ Plus PCR Master Mix (With Dye) ofrece ventajas como simplicidad, alta sensibilidad, fuerte especificidad y excelente estabilidad. El sistema de reacción solo requiere la adición de cebadores y plantilla, y se puede utilizar un protocolo de PCR de dos pasos para simplificar el procedimiento y ahorrar tiempo. El producto incluye un colorante de seguimiento de electroforesis, lo que permite la carga directa de productos de PCR para análisis en gel. Además, contiene un agente protector especial que garantiza una actividad estable incluso después de repetidos ciclos de congelación y descongelación.
Presupuesto
Cat. No. | 10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08 / 10154ES60 |
Tamaño | 100 μL / 1 mL / 5×1 mL / 100×1 mL |
Almacenamiento
Este producto debe almacenarse a -25~-15℃ durante 1 años.
Instrucciones
1. Sistemas de reacción de PCR recomendados.
Componentes | Volumen(microlitros) | Final concentración |
2× Hieff Canace™ Más Mezcla maestra de PCR (con colorante)* | 25 | 1× |
Plantilla*** | incógnita | - |
Adelante PAGrimer(10 μmol/Yo)** | 2 | 0.4 μmol/Yo |
Reverso PAGrimer(10 μmol/Yo)** | 2 | 0,4 μmol/Yo |
DdH2Oh | Hasta 50 | - |
*La concentración final 1× de la mezcla contiene 1 U/50 μL de polimerasa, 2 mmol/L de Mg2+y 200 μmol/L de dNTP.
**La concentración final recomendada de cebadores en la reacción de PCR es de 0,2 a 1 μmol/L, siendo 0,4 μmol/L el valor preferido..
***Cantidades de plantilla recomendadas para un sistema de reacción de 25 μL:
Tipo de plantilla | Tamaño del fragmento (1 kb-10 kb) |
ADN genómico | 50 ng-200 ng |
ADN plasmídico o viral | 10 págs. - 20 ng. |
ADNc | 1-2,5 μL (sin exceder 1/10 del volumen total de PCR) |
2. Programa de reacción.
1)Protocolo de dos pasos (preferible):
Ciclo paso | yoemp. | Tiempo | Ciclos |
Desnaturalización inicial | 98℃ | 3 mín. | 1 |
Desnaturalización | 98℃ | 10 segundos | 30-35 |
Extensión | 68℃ | 30 seg/kb | |
Ffinal miextensión | 72℃ | 5 mín. | 1 |
2)Protocolo de tres pasos (convencional):
Ciclo paso | yoemp. | Tiempo | Ciclos |
Desnaturalización inicial* | 98℃ | 3 mín. | 1 |
Desnaturalización | 98℃ | 10 segundos | 30-35 |
Recocido** | 60℃ | 20 segundo | |
Extensión*** | 72℃ | 30 segundos/kb | |
Ffinal miextensión | 72℃ | 5 mín. | 1 |
*Desnaturalización inicial: recomendada a 98 °C durante 3 minutos (5 a 10 minutos para plantillas de alto GC).
**Recocido: se recomienda a 60 °C durante 20 segundos (ajustable entre 10 y 30 segundos). El recocido prolongado puede provocar manchas en los geles.
***Extensión: recomendada a 72 °C durante 30 segundos/kb (hasta 60 segundos/kb para plantillas complejas).
3)Protocolo de recocido en gradiente (recomendado para objetivos difíciles):
Ciclo paso | yoemp. | Tiempo | Ciclos |
Desnaturalización inicial | 98℃ | 3 mín. | 1 |
Desnaturalización | 98℃ | 10 segundos | 15 (disminución de 1 °C por ciclo) |
Recocido de gradiente | 70-55 °C | 20 segundo | |
Extensión | 72℃ | 30 segundos/kb | |
Desnaturalización | 98°C | 10 segundos | 20 |
Recocido | 55°C | 20 segundos | |
Extensión | 72°C | 30 segundos/kb | |
Ffinal miextensión | 72℃ | 5 mín. | 1 |
4)Características de los diferentes protocolos de PCR:
Tipo de protocolo | Velocidad | Especificidad | Rendimiento de PCR | Tasa de detección |
Dos pasos | Lo más rápido | Alto | Medio | Alto |
Tres pasos | Medio | Medio | Más alto | Medio |
Recocido de gradiente | Lento | Alto | Medio | Alto |
Notas
1.Este producto es solo para uso de investigación.
2. Por favor, trabaje con bata de laboratorio y guantes desechables.,Para su seguridad.
Pago y seguridad
Su información de pago se procesa de forma segura. No almacenamos detalles de la tarjeta de crédito ni tenemos acceso a la información de su tarjeta de crédito.
Consulta
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Preguntas frecuentes
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