2 × Hieff Canace ™ Plus PCR Master Mix (con tinte) _ 10154es

Sku: 10154ES01

Tamaño: 100 μl
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Precio de venta$15.00

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Descripción

Descripción del Producto

2×Hief Canace Plus PCR Master Mix (con colorante) es una solución premezclada 2× lista para usar que contiene Hieff Canace Además, incluye ADN polimerasa de alta fidelidad, dNTP y un sistema de tampón optimizado. La mezcla incluye dos anticuerpos monoclonales que inhiben la actividad de la polimerasa y la actividad de la exonucleasa 3'→5' a temperatura ambiente, lo que permite una PCR de inicio en caliente altamente específica. La adición de factores de elongación permite la amplificación de fragmentos largos, con fragmentos objetivo de hasta 13 kb. Esta enzima exhibe actividad de ADN polimerasa 5'→3' y actividad de exonucleasa 3'→5', con una fidelidad 83 veces mayor que la de la ADN polimerasa Taq y 9 veces mayor que la de la ADN polimerasa Pfu común. Es adecuada para amplificar plantillas complejas y producir productos de PCR de extremos romos.

2×Hief Canace Plus PCR Master Mix (With Dye) ofrece ventajas como simplicidad, alta sensibilidad, fuerte especificidad y excelente estabilidad. El sistema de reacción solo requiere la adición de cebadores y plantilla, y se puede utilizar un protocolo de PCR de dos pasos para simplificar el procedimiento y ahorrar tiempo. El producto incluye un colorante de seguimiento de electroforesis, lo que permite la carga directa de productos de PCR para análisis en gel. Además, contiene un agente protector especial que garantiza una actividad estable incluso después de repetidos ciclos de congelación y descongelación.

Presupuesto

Cat. No.

10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08 / 10154ES60

Tamaño

100 μL / 1 mL / 5×1 mL / 100×1 mL

Almacenamiento

Este producto debe almacenarse a -25~-15℃ durante 1 años.

Instrucciones

1. Sistemas de reacción de PCR recomendados.

Componentes

Volumenmicrolitros

Final concentración

Hieff Canace™ Más Mezcla maestra de PCR (con colorante)*

25

Plantilla***

incógnita

-

Adelante PAGrimer10 μmol/Yo**

2

0.4 μmol/Yo

Reverso PAGrimer10 μmol/Yo**

2

0,4 μmol/Yo

DdH2Oh

Hasta 50

-

*La concentración final 1× de la mezcla contiene 1 U/50 μL de polimerasa, 2 mmol/L de Mg2+y 200 μmol/L de dNTP.

**La concentración final recomendada de cebadores en la reacción de PCR es de 0,2 a 1 μmol/L, siendo 0,4 μmol/L el valor preferido..

***Cantidades de plantilla recomendadas para un sistema de reacción de 25 μL:

Tipo de plantilla

Tamaño del fragmento (1 kb-10 kb)

ADN genómico

50 ng-200 ng

ADN plasmídico o viral

10 págs. - 20 ng.

ADNc

1-2,5 μL (sin exceder 1/10 del volumen total de PCR)

2. Programa de reacción.

1)Protocolo de dos pasos (preferible):

Ciclo paso

yoemp.

Tiempo

Ciclos

Desnaturalización inicial

98℃

3 mín.

1

Desnaturalización

98

10 segundos

30-35

Extensión

68

30 seg/kb

Ffinal miextensión

72

5 mín.

1

2)Protocolo de tres pasos (convencional):

Ciclo paso

yoemp.

Tiempo

Ciclos

Desnaturalización inicial*

98℃

3 mín.

1

Desnaturalización

98

10 segundos

30-35

Recocido**

60

20 segundo

Extensión***

72

30 segundos/kb

Ffinal miextensión

72

5 mín.

1

*Desnaturalización inicial: recomendada a 98 °C durante 3 minutos (5 a 10 minutos para plantillas de alto GC).

**Recocido: se recomienda a 60 °C durante 20 segundos (ajustable entre 10 y 30 segundos). El recocido prolongado puede provocar manchas en los geles.

***Extensión: recomendada a 72 °C durante 30 segundos/kb (hasta 60 segundos/kb para plantillas complejas).

3)Protocolo de recocido en gradiente (recomendado para objetivos difíciles):

Ciclo paso

yoemp.

Tiempo

Ciclos

Desnaturalización inicial

98℃

3 mín.

1

Desnaturalización

98

10 segundos

15 (disminución de 1 °C por ciclo)

Recocido de gradiente

70-55 °C

20 segundo

Extensión

72

30 segundos/kb

Desnaturalización

98°C

10 segundos

20

Recocido

55°C

20 segundos

Extensión

72°C

30 segundos/kb

Ffinal miextensión

72

5 mín.

1

4)Características de los diferentes protocolos de PCR:

Tipo de protocolo

Velocidad

Especificidad

Rendimiento de PCR

Tasa de detección

Dos pasos

Lo más rápido

Alto

Medio

Alto

Tres pasos

Medio

Medio

Más alto

Medio

Recocido de gradiente

Lento

Alto

Medio

Alto

Notas

1.Este producto es solo para uso de investigación.

2. Por favor, trabaje con bata de laboratorio y guantes desechables.Para su seguridad.

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