Descripción
Este kit puede realizar de forma directa y rápida la amplificación por PCR de tejido de ratón (como cola de ratón, oreja de ratón, dedo del pie de ratón, músculo, etc.) y tiene una fuerte compatibilidad de muestras. Equipado con un potente tampón de lisis, este kit puede lisar rápidamente las muestras y liberar ADN genómico. El lisado se puede añadir directamente al sistema de reacción de PCR sin purificación y la operación es cómoda. Además, este kit requiere una entrada de muestra baja y se pueden utilizar 5 mg de tejido de ratón o 1-5 mm de cola de ratón para experimentos.
La mezcla de PCR directa 2× Mouse que se incluye en este kit es una solución de reacción de PCR de inicio rápido con una concentración doble. Contiene todos los componentes utilizados para la amplificación por PCR, excepto la plantilla y los cebadores, lo que simplifica enormemente el proceso operativo y reduce la posibilidad de contaminación. El kit se puede utilizar para la identificación de transgenes, la genotipificación de ratones, etc.
Características
- Se requiere menos muestra: 5 mg de tejido de ratón o 1-5 mm de cola de ratón
- Preparación conveniente de la plantilla: no es necesario moler, no es necesario refinar ni purificar el ADN, mayor flujo, ahorro de tiempo y dinero.
- Sistema de PCR optimizado: con mayor especificidad y mayor tolerancia al inhibidor de la reacción de PCR
Aplicaciones
- Identificación de ratones transgénicos
- Genotipado de ratones
- Análisis de eliminación de genes en ratones
Presupuesto
| Especificaciones del producto | Equipo |
| Arranque en caliente | Arranque en caliente incorporado |
| Condiciones de transporte | Paquetes de hielo |
| Tipo de producto | Kit de PCR directa |
| Aplicar a (solicitud) | Cola de ratón, oreja de ratón, dedo de rata, vísceras, piel, etc. |
Componentes
| Componentes No. | Nombre | 10185ES50 | 10185ES70 |
| 10185-A | Buffer Ml | 5 x 1 ml | 20 x 1 ml |
| 10185-B | Buffer MONTE | 0,6 ml | 2 x 1,25 ml |
| 10185-C | Mezcla de PCR directa de ratón 2× | 500 microlitros | 2×1 ml |
- a) Buffer ML es un tampón de lisis que contiene fuertes desnaturalizantes de proteínas, utilice guantes.
- b) El tampón MT es un tampón de detención utilizado para detener la función de lisis del tampón ML.
- c) 2× Mezcla de PCR directa de ratón: contiene ADN polimerasa Taq de inicio en caliente, mezcla de dNTP, MgCl2, tampón de reacción, potenciador de la reacción de PCR, optimizador, estabilizador, colorante indicador de electroforesis, etc.
Almacenamiento
- Componente A: El producto debe Se puede almacenar a una temperatura de entre 2 °C y 8 °C durante un año. Si se va a utilizar varias veces durante un período prolongado, se debe evitar la contaminación cruzada.
- Componente B/C: El producto Debe almacenarse en-25℃ ~-15℃ Durante un año. Evite congelaciones y descongelaciones repetidas.
Cifras
1. Resultado de la amplificación del gen objetivo (dentro de 1 kb)
Figura 1.Adecuado para la amplificación del gen objetivo dentro de 1 kb.
2. Demostración de la velocidad de extensión
Figura 2. Gen de 500 pb, la velocidad de extensión puede ser tan rápida como 1 s/kb.
Citado de "TFPI es un receptor de cripta colónica para TcdB del clado 2 hipervirulento de C. difficile. Cell. 17 de marzo de 2022;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.010. "
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI es un receptor de cripta colónica para TcdB del clado hipervirulento 2 C. Difícil. Cell. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] Zhao J, Chen J, Li YY, Xia LL, Wu YG. La tirosina quinasa de Bruton regula la inflamación inducida por macrófagos en el riñón diabético a través de la activación del inflamasoma NLRP3. Int J Mol Med. 2021;48(3):177. doi:10.3892/ijmm.2021.5010(IF:4.101)
| Problema común | Posible razón | Solución |
| No se encontraron bandas en el control positivo ni en las muestras a analizar. | El sistema de reacción de PCR o las condiciones de reacción no eran adecuados. | Utilice PCR en gradiente para explorar las condiciones de reacción óptimas para la PCR. |
| El almacenamiento inadecuado de los reactivos de PCR pierde actividad. | La mezcla PCR directa para ratones 2× debe almacenarse a -20 °C y evitarse la congelación y descongelación repetidas durante su uso. Si se usa con frecuencia, se puede almacenar a 4 °C durante un breve período. | |
| Cuestiones de diseño de cartilla. | Intente rediseñar los primers para comprobarlo. | |
| El control positivo tiene una banda de interés y la muestra a analizar no tiene banda o tiene una banda débil. | El almacenamiento inadecuado o el almacenamiento prolongado pueden provocar la pérdida de actividad del reactivo. | Utilice reactivos nuevos. |
| Añadir lisado de tejido en exceso. | Aumente el sistema de reacción o reduzca la cantidad de lisado. | |
| La mezcla de lisis de muestra se ha almacenado de forma inadecuada o durante demasiado tiempo y el genoma de ADN se ha degradado. | La mezcla de lisado se puede conservar a 4°C durante 2-3 días.Intente utilizar una mezcla de lisado recién preparada para la PCR. | |
| La cantidad de plantilla agregada no es adecuada. | La cantidad de plantilla agregada se optimizó dentro del rango de 1-10% del sistema de reacción. | |
| Número insuficiente de ciclos de PCR. | Aumentar el número de ciclos de PCR, preferiblemente 35-40 ciclos. Debido a la complejidad de la plantilla, las reacciones de PCR deben realizarse con 5-10 ciclos más que con la plantilla de ADN purificada. | |
| Amplificación no específica | La temperatura de hibridación de PCR es demasiado baja, el número de ciclo, la concentración de cebador o la concentración de plantilla son demasiado altos. | Aumente la temperatura de hibridación de PCR y disminuya el número de ciclos de PCR, la concentración de cebador o la concentración de plantilla. |
| Desajustes de cebadores de PCR. | Rediseño de cebadores de PCR. | |
| La temperatura es demasiado alta cuando se prepara el sistema de reacción de PCR o el tiempo es demasiado largo después de completarse la preparación. | La preparación del sistema de reacción de PCR se lleva a cabo a baja temperatura y la reacción de amplificación de PCR se lleva a cabo lo antes posible después de completarse la preparación. | |
| La banda objetivo aparece en el control negativo | Contaminación de herramientas o reactivos operatorios. | Todos los reactivos o equipos del experimento deben esterilizarse en autoclave. Tenga cuidado y manipúlelos con cuidado para evitar que la secuencia objetivo sea succionada hacia la pistola de muestra o se derrame fuera del tubo de centrífuga. |
| Contaminación cruzada entre muestras. | Cada muestreador se utiliza solo para una muestra; o después de tomar una muestra, sumerja el borde del muestreador en una solución de hipoclorito de sodio al 2%, enjuague repetidamente y luego seque el residuo con una toalla de papel limpia. |
Pago y seguridad
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