Descripción
El kit de PCR directa de tejido vegetal es un kit que puede amplificar directamente diferentes tipos de hojas de plantas mediante PCR, con una amplia adaptabilidad y una fuerte estabilidad. El kit utiliza un sistema de tampón de lisis único, que puede lisar rápidamente una variedad de muestras de plantas y liberar ADN genómico. El ADN genómico liberado se puede utilizar directamente como plantilla sin eliminar proteínas, ARN o metabolitos secundarios en la reacción de PCR. Además, el kit requiere una pequeña cantidad de muestra, se pueden utilizar hojas de plantas de tan solo 1 mm para experimentos.
La mezcla maestra 2×Plant que se incluye en este kit tiene una gran compatibilidad con la amplificación y permite utilizar directamente el lisado de la muestra como plantilla para una amplificación eficiente y específica. Este reactivo es una mezcla de reacción de PCR concentrada al doble, que contiene todos los componentes utilizados para la amplificación por PCR, excepto la plantilla y los cebadores, lo que simplifica enormemente el proceso de operación y reduce la posibilidad de contaminación.
El kit se puede utilizar para la identificación de plantas transgénicas, genotipificación de plantas, etc.
Envío
Los productos se envían con bolsas de hielo.
Almacenamiento
1. El reactivo 10187-A [Buffer P1] se puede almacenar a 4℃ durante 1 año.
2. Reactivo 10187-B [Buffer P2], utilizado para neutralizar el lisado, que es beneficioso para almacenar la muestra durante más tiempo y puede almacenarse a 4 ℃ durante 1 año.
3. El reactivo 10187-C [2× Plant Master Mix] se puede almacenar a -20 ℃ durante 1 año. Evite congelarlo y descongelarlo repetidamente.
Precauciones
1. Al realizar experimentos con hojas, se recomienda utilizar tejido de hojas recién recolectadas. Si se trata de un tejido congelado a largo plazo, debe almacenarse a -80 °C. Se debe evitar la congelación y descongelación repetidas tanto como sea posible para evitar la degradación de la plantilla y afectar la eficiencia de la PCR. El tejido de hojas es adecuado para hojas jóvenes. Si se trata de una hoja madura, evite utilizar el tejido de la vena principal de la hoja.
2. Se recomienda amplificar el fragmento dentro de 1 kb de longitud para obtener la mejor eficiencia de amplificación.
3. Al tomar muestras, utilice un punzón o un cuchillo para tomar una muestra del tamaño adecuado. Si las muestras son diferentes, es necesario limpiar el punzón o el cuchillo antes de procesar la muestra.
4. Para el tejido de las hojas, se recomienda tomar hojas de 1 a 10 mm, una longitud de hoja demasiado pequeña dará lugar a un bajo rendimiento de amplificación por PCR, demasiada inhibirá la reacción de PCR, utilice el método de craqueo térmico, triturando con una punta de pipeta y triturando con un molinillo para tratar las hojas de las plantas. Después del tratamiento, es necesario agitarlas y centrifugarlas. Asegúrese de tomar el sobrenadante para la prueba. La precipitación inhibirá gravemente la reacción de PCR.
5. Para su seguridad y salud, utilice bata de laboratorio y guantes desechables durante la operación.
6. ¡Este producto es SÓLO para uso en investigación!
| Problemas comunes | Posibles causas | Soluciones |
| No se encontraron bandas en el control positivo ni en las muestras a analizar. | El sistema de reacción de PCR o las condiciones de reacción no eran adecuados. | Utilice PCR en gradiente para explorar las condiciones de reacción óptimas para la PCR. |
| El almacenamiento inadecuado de los reactivos de PCR los inactiva. | La mezcla 2×PCR debe almacenarse a -20 ℃. Evite congelarla y descongelarla repetidamente durante su uso. Si se usa con frecuencia, puede almacenarse a 4 °C durante un período breve. | |
| Cuestiones de diseño de cartilla. | Intente rediseñar los primers para comprobarlo. | |
| El control positivo tiene una banda de interés y la muestra a analizar no tiene banda o tiene una banda débil. | La proporción de tampón de lisis y tampón de neutralización es inadecuada y la mezcla de lisis afectará el valor de pH del sistema de PCR. | En condiciones normales, el pH de la mezcla de lisis neutralizada debe estar alrededor de 7-8 (el producto de lisis y el tampón P2 deben neutralizarse en estricta conformidad con la proporción de 5:1). |
| La mezcla de lisis de muestra se ha almacenado de forma inadecuada o durante demasiado tiempo y el genoma de ADN se ha degradado. | La mezcla de lisado se puede almacenar a 4 °C durante 5 días; intente utilizar una mezcla de lisado recién preparada para PCR. | |
| La cantidad de plantilla agregada no es adecuada. | Optimice la cantidad de plantilla agregada dentro del rango de <5% del sistema de reacción. | |
| Número insuficiente de ciclos de PCR. | Aumente adecuadamente el número de ciclos de PCR, preferiblemente 35-40 ciclos. Debido a la complejidad de la plantilla, generalmente es mejor utilizar entre 5 y 10 ciclos más de reacción de PCR que usar una plantilla de ADN purificada. | |
| Amplificación no específica | La temperatura de hibridación de PCR es demasiado baja, el número de ciclo, la concentración de cebador o la concentración de plantilla son demasiado altos. | Aumente la temperatura de hibridación de PCR y disminuya el número de ciclos de PCR, la concentración de cebador o la concentración de plantilla. |
| Desajuste de cebadores de PCR. | Rediseño de cebadores de PCR. | |
| La temperatura es demasiado alta cuando se prepara el sistema de reacción de PCR o el tiempo transcurrido es demasiado largo después de la preparación. | La preparación del sistema de reacción de PCR se lleva a cabo a baja temperatura y la reacción de amplificación de PCR se lleva a cabo lo antes posible después de completarse la preparación. | |
| La banda objetivo aparece en el control negativo | Contaminación de herramientas o reactivos operatorios. | Todos los reactivos o equipos utilizados en el experimento deben esterilizarse en autoclave.Tenga cuidado y sea cuidadoso al manipularlo para evitar que la secuencia objetivo sea succionada hacia la pistola de muestra o se derrame fuera del tubo de centrífuga. |
| Contaminación cruzada entre muestras. | Cada muestreador se utiliza solo para una muestra; o después de tomar una muestra, sumerja la cuchilla del muestreador en una solución de hipoclorito de sodio al 2%, enjuague repetidamente y luego seque el residuo con una toalla de papel limpia. |
Pago y seguridad
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Consulta
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Preguntas frecuentes
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