Descripción
Este producto es una ARN polimerasa del bacteriófago T7 derivada de la expresión de proteínas recombinantes en Escherichia coli. Cataliza la síntesis 5'→3' de ARN en ADN bicatenario a partir de su secuencia promotora T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') y utiliza NTP como sustratos. El ADN con extremos romos lineales bicatenarios o extremos salientes 5' se puede utilizar como plantilla para la ARN polimerasa T7, por lo que los plásmidos linealizados y los productos de PCR se pueden utilizar como plantillas para análisis in vitro. síntesis de ARN.
Nota: G* es la primera base de la transcripción de ARN.
Este producto se elabora de acuerdo con las normas GMP y se suministra en forma líquida.
Característica
- Sintetizar transcripciones largas y cortas, se pueden producir 100-200 μg de ARN con 1 μg de plantilla de ADN
- Mayor rendimiento y fácil operación.
- Reducir las endotoxinas
- Probado para la ausencia de endonucleasas, exonucleasas y ARNasas.
Solicitud
- Preparación de sondas de ARN radiomarcado
- Generación de ARN para estudios de estructura, procesamiento y catálisis del ARN
- Control de expresión mediante ARN antisentido
- Síntesis de ARNm y ARNsg
Especificación
| Fuente | Expresado en E. coli con un gen de ARN polimerasa T7 recombinante |
| Temperatura óptima | 37℃ |
| Búfer de almacenamiento | 50 mM de Tris-HCl, 1 mM de EDTA, 10 mM de DTT, 100 mM de NaCl, 0,1 % de Triton X-100, 50 % (v/v) glicerina, pH 7,9 a 25℃ |
| Definición de unidad | La cantidad de enzima necesaria para incorporar 1 nmol de [3H] GMP al precipitado insoluble en ácido en 1 hora a 37 °C y pH 8,0 se define como 1 unidad. |
Calidad
| Artículos del COA | Estándar |
| Actividad | 250-300 U/μL |
| Proteína concentración | ≥0,5 mg/ml |
| Pureza | ≥95% |
| Endotoxin | <20 UE/mg |
| Proteasa residual | Negativo |
| Exonucleasa residual | Negativo |
| Nickasa residual | Negativo |
| ARNasa residual | Negativo |
| MI. proteína huésped coli | <50 ppm |
| Huésped de E. coli ADN | <10 fg/U |
| Micoplasma ADN | Negativo |
Componentes
| Componentes No. | Nombre | 10625ES10 (10 unidades) | 10625ES60 (100 KU) | 10625ES86 (2500 KU) | 10625ES99 (100 UM) |
| 10625 | ARN polimerasa T7 de grado GMP (250 U/μL) | 40 μl | 400 μl | 10 ml | 400 ml |
Envío y almacenamiento
Los productos de grado GMP de ARN polimerasa T7 se envían con hielo seco y pueden almacenarse a una temperatura entre -15 ℃ y -25 ℃ durante un año.
Cifras
Figura 1. El ARN estándar se sintetizó in vitro utilizando el kit de síntesis de ARN T7.
La reacción se incubó en un instrumento de PCR a 37 ℃ durante 2 h y luego se purificó con perlas magnéticas (Cat. n.° 12602). El resultado del rendimiento se analizó con un espectrofotómetro NanoDrop como se muestra en la Figura 1.
Figuras 2. Demostración de la transcripción de ARN de diferentes longitudes por el kit T7 respectivamente en el electroforetograma (Figuras 2A), el diagrama de electroforesis capilar (Figuras 2B) y el cromatograma (Figuras 2C).
Figura 3. Síntesis de ARN con capuchón in vitro.
La reacción se incubó en un instrumento de PCR a 37 ℃ durante 2 h y luego se purificó con perlas magnéticas (Cat. n.° 12602). El resultado del rendimiento se analizó con un espectrofotómetro NanoDrop, como se muestra en la Figura 3A. El resultado de integridad se analizó mediante electroforesis capilar, como se muestra en la Figura 3B.
Pago y seguridad
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Consulta
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Preguntas frecuentes
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