T7 ARN polimerasa de grado GMP (250 U/μL) -10625ES

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Sku: 10625ES10

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Precio de venta$105.00 Precio regular$140.00

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Descripción

Este producto es una ARN polimerasa del bacteriófago T7 derivada de la expresión de proteínas recombinantes en Escherichia coli. Cataliza la síntesis de ARN 5'→3' en ADN bicatenario a partir de su secuencia promotora T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') y utiliza NTP como sustratos. El ADN con extremos romos lineales bicatenarios o extremos salientes 5' puede utilizarse como molde para la ARN polimerasa T7, por lo que los plásmidos linealizados y los productos de PCR pueden utilizarse como moldes para análisis in vitro. síntesis de ARN.

Nota: G* es la primera base de la transcripción de ARN.

Este producto se elabora de acuerdo con las normas GMP y se suministra en forma líquida.

Característica

  • Sintetizar transcripciones largas y cortas, se pueden producir 100-200 μg de ARN con 1 μg de plantilla de ADN
  • Mayor rendimiento y fácil operación.
  • Endotoxinas más bajas
  • Probado para la ausencia de endonucleasas, exonucleasas y ARNasas.

Solicitud

  • Preparación de sondas de ARN radiomarcadas
  • Generación de ARN para estudios de estructura, procesamiento y catálisis del ARN
  • Control de expresión mediante ARN antisentido
  • síntesis de ARNm y ARNsg

Especificación

Fuente Expresado en E. coli con un gen de ARN polimerasa T7 recombinante
Temperatura óptima 37℃
Búfer de almacenamiento 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1 % Triton X-100, 50 % (v/v) glicerina, pH 7,9 a 25℃
Definición de unidad La cantidad de enzima necesaria para incorporar 1 nmol de [3H] GMP al precipitado insoluble en ácido en 1 hora a 37 °C y pH 8,0 se define como 1 unidad.


Calidad

Artículos del COA Estándar
Actividad 250-300 U/μL
Proteína concentración ≥0,5 mg/ml
Pureza ≥95%
Endotoxin <20 UE/mg
Proteasa residual Negativo
Exonucleasa residual Negativo
Nickasa residual Negativo
ARNasa residual Negativo
MI. proteína huésped de coli <50 ppm
Huésped de E. coli ADN <10 fg/U
Micoplasma ADN Negativo

Componentes

Componentes No. Nombre 10625ES10 (10 KU) 10625ES60 (100 KU) 10625ES86 (2500 KU) 10625ES99 (100 MU)
10625 ARN polimerasa T7 de grado GMP (250 U/μL) 40 μL 400 μL 10 ml 400 ml

Envío y almacenamiento

Los productos de grado GMP de ARN polimerasa T7 se envían con hielo seco y se pueden almacenar a -15 °C ~ -25 °C durante un año.

Cifras

Figura 1. El ARN estándar se sintetizó in vitro utilizando el kit de síntesis de ARN T7.

La reacción se incubó en un instrumento de PCR a 37 °C durante 2 h y luego se purificó con perlas magnéticas (Cat. n.° 12602). El resultado se analizó con un espectrofotómetro NanoDrop, como se muestra en la Figura 1.

Figuras 2. Demostración de la transcripción de ARN de diferentes longitudes por el kit T7 respectivamente en el electroforetograma (Figuras 2A), el diagrama de electroforesis capilar (Figuras 2B) y el cromatograma (Figuras 2C).

Figura 3. Síntesis de ARN con capuchón in vitro.

La reacción se incubó en un instrumento de PCR a 37 °C durante 2 h y posteriormente se purificó mediante microesferas magnéticas (Cat. n.° 12602). El rendimiento se analizó con un espectrofotómetro NanoDrop, como se muestra en la Figura 3A. La integridad se analizó mediante electroforesis capilar, como se muestra en la Figura 3B.

Documentos:

Manuales

10625_Manual_HB221111_ES.pdf

Citas y referencias:

Stamatakos, CP, Nguyen, HT, Shekhani, R., Sidhu, G., Maximuck, WJ, Ellington, AD y Marcotte, EM (2024). Optimización de alto rendimiento de variantes del promotor T7 para el ajuste fino de la transcripción in vitro. Bioquímica, 63(18), 2307–2318. https://doi.org/10.1021/acs.biochem.4c00188

Pago y seguridad

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