Descripción
Se trata de una variante de la ARN polimerasa T7 modificada genéticamente (ARNdc de bajo contenido) derivada de la ARN polimerasa T7 de tipo salvaje y producida en Escherichia coli. Reduce significativamente la producción de ARN bicatenario (ARNdc) al tiempo que incorpora de manera eficiente análogos de capuchón y exhibiendo una transcripción in vitro (IVT) altamente eficiente comparable a la ARN polimerasa T7 de tipo salvaje. Cataliza la síntesis 5'→3' de ARN en ADN bicatenario a partir de su secuencia promotora T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') y utiliza NTP como sustratos.
Nota: G* es la primera base de la transcripción de ARN.
Característica
- El nivel de dsRNA se reduce a aproximadamente 1/100000
- Compatible con Trilink CleanCap AG
- Altos rendimientos comparables a WT
- Entrada de tapa inferior
- Libre de origen animal (AOF)
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Componentes
| Componentes No. | Nombre | 10628ES10 | 10628ES60 | 10628ES72 | 10628ES86 |
|
|
| (10 ku) | (100 ku) | (250 ku) | (2.500 ku) |
| 10628 | ARN polimerasa T7 CleaScrip™ (ARNbc bajo, 250 U/μL) | 40 μl | 400 μl | 1 ml | 10 ml |
Presupuesto
| Fuente | Recombinante E. coli con gen de la ARN polimerasa T7 |
| Temperatura óptima | 37℃ |
| Búfer de almacenamiento | 50 mM de Tris-HCl, 1 mM de EDTA, 10 mM de DTT, 100 mM de NaCl, 0,1 % de Triton X-100, 50 % (v/v) glicerina, pH 7,9 a 25℃ |
| Definición de unidad | La cantidad de enzima necesaria para incorporar 1 nmol de [3H] GMP en el precipitado insoluble en ácido en 1 hora a 37 °C y pH 8,0 se define como 1 unidad. |
| Mg2+ recomendado | Acetato de magnesio 30 mM |
Control de calidad Estándar
| Itemas | Especificación/Estándar |
| Enzima actividad | 250-300 U/μL |
| Pureza de las proteínas | ≥95% |
| Endotoxin | <20 UE/mg |
| Proteasa | Negativo |
| Exonucleasa | Negativo |
| Nickase | Negativo |
| ARNasa | Negativo |
| Proteína huésped de E. coli | <50 ppm |
| mihuésped .coli ADN | <10 fg/U |
| Examen de micoplasma | Negativo |
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Cifras
Figura 2. Evaluación de la inmunogenicidad de los productos de IVT en AR murinaW264.7 células (Figuras 2A y 2B). Los niveles de ARNm y proteína de IFN-β se redujeron en ARW264.7 células transfectadas con ARNm producido por mutantes en comparación con el tipo salvaje, lo que indica que el ARNm sintetizado por la ARN polimerasa T7 de tipo salvaje provocó la respuesta inmune más fuerte, mientras que el ARNm de los mutantes mostró una respuesta significativamente reducida.
Figura 3. El contenido de dsRNA en el ARNm sintetizado con la ARN polimerasa CleaScript™ T7 es menor que el del ARNm sintetizado con la enzima de tipo salvaje después del tratamiento con celulosa.
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