LZCap AU (3'Acm) es un análogo de cap1. El producto se utiliza para la transcripción con la secuencia inicial de 5'AU3', y la estructura cap1 natural se produce mediante el método de capping de la transcripción Cap1. En comparación con el Cap0 producido mediante el método de capping tradicional, la estructura cap1 producida por CapAU (3'Acm) permite que el ARNsa tenga una mayor actividad y eficiencia de traducción in vivo.

Patente estadounidense aprobada.

Componentes

Detalles del producto

LZCap^® Diseño de plantilla de ADN

LZCap^®AU(3'Acm) es adecuado para secuencias iniciadas por AG. Como se muestra en la figura siguiente, el promotor T7 (subrayado) seguido de la secuencia AG puede iniciar eficazmente la transcripción.

Protocolo

1． Descongele los componentes necesarios para el experimento en hielo.

2． Consulte el siguiente sistema de reacción para configurar el sistema de transcripción a temperatura ambiente.

Se puede utilizar N1-Me-pUTP modificado en lugar de UTP de tipo salvaje. El N1-Me-pUTP modificado reduce la inmunogenicidad del ARNm. Henovcom también puede proporcionar el nucleótido modificado N1-Me-pUTP (Cat. No.: HN1002).

Notas:

1)     LZCap^®AU(3'Acm) es adecuado para el vector de transcripción del promotor T7 con 5 secuencias iniciadas 'AU 3', lo que debe tenerse en cuenta al construir el vector.

2)     Los reactivos, consumibles y contenedores utilizados en el experimento están libres de contaminación por ARNasa.

3)     Se recomienda utilizar una plantilla de ADN linealizada para la transcripción.

4)     Cuando se utilizaron nucleótidos modificados en lugar de nucleótidos de tipo salvaje, la concentración final de la reacción no se modificó.

5)     Si el producto de PCR se utiliza como plantilla de ADN para el inicio de la transcripción, la cantidad de plantilla de ADN se puede reducir a la mitad.

3． Mezcle la solución de reacción preparada, centrifugue brevemente e incube a 37 °C durante 2-3 horas. Si la longitud de transcripción es inferior a 100 nt, aumente el tiempo de reacción a 4-8 h.

Perfil de seguridad general

Almacenamiento

Este producto puede almacenarse a -25~-15 ℃ durante dos años.

Precauciones

1. Para su seguridad y salud, utilice equipo de protección personal (EPP), como batas de laboratorio y guantes desechables, cuando trabaje con este producto.
2. Sólo para uso de investigación.
   

Preguntas frecuentes

1. ¿Cómo se diseña el LZCap?

Las enzimas tienen un reconocimiento relativamente "específico" de los sustratos. Por lo tanto, al diseñar una nueva estructura de tapa, por un lado, necesitamos modificaciones estructurales novedosas para fines de patente, pero por otro lado, nos esforzamos por mantener la similitud con las estructuras naturales/conocidas tanto como sea posible. La estructura natural tiene una ribosa 3' OH, que se puede modificar (por ejemplo, metilación). Con base en esta consideración, elegimos agregar un carbono en la posición 3' para la novedad de la patente, seguido de un NH para imitar el enlace de hidrógeno del OH, y luego un grupo acetilo para reducir la basicidad del NH y mejorar su capacidad de enlace de hidrógeno. La actividad de LzCap es mejor que el metilatogorra natural ed, posiblemente debido al aumento de los enlaces de hidrógeno. En comparación con los grupos metilo y metoxi, el grupo acetilamino también puede aumentar las interacciones de van der Waals entre el sustrato (cap) y el factor iniciador (enzima).

2. ¿Es estable el grupo acetilamino?

El grupo acetilamino ya es suficientemente estable. Es mucho más estable que la posición 7-metilada y el enlace fosfodiéster, que son las partes menos estables del casquete.

Póngase en contacto con nosotros para obtener más detalles sobre la licencia de LZCap.