Descripción
LZCap GG (3'Acm) es un análogo de cap1. El producto se utiliza para la transcripción con la secuencia inicial de 5'GG3', y la estructura natural cap1 se produce mediante el recubrimiento de la transcripción Cap1.
Patente estadounidense aprobada.
Componentes
| Gato Nro. | Nombre | Tamaño |
| 10686 | LZCap GG (3'Acm) (50 mM) | 100 microlitros |
| 1 ml |
Detalles del producto
| Fórmula molecular | do35yo48norte16Oh25PAG4 (Ácido libre) |
| Peso molecular | 1216.19 (Ácido libre) |
| Concentración | 50 ± 3 mM |
| Pureza | CLAR ≥95% |
LZCap Plantilla de ADN Design
LZCap GG(3'Acm) es adecuado para Iniciado por GG secuencias. Como mostrado en el cifra Abajo, el SP6 promotor (subrayado) seguido por la secuencia GG puede Síefectivamente iniciado transcripción.
Protocolo
1． Descongelar componentes requerido para el experimentoent en hielo.
2． Agregar Agua libre de ARNasa y Los NTP a tubo de reacción.
3． Calor LZCap Alícuota de GG(3'Acm) para 15 mín en 60°C. Enfriar a temperatura ambiente para 5 mín.
4． Añadir inmediatamente LZCap GG(3'Acm) al tubo y vórtice a Mezclar. Girar brevemente a recolectar líquido.
5． Agregar Transcripción 10x Buffer y vórtice.
6． Agregar Plantilla de ADN aDakota del Norte SP6 Enzima Mezcla.
7． Mezclar el preparado solución de reacción, espín brevemente, y incubar en 37°C para 2-3 horas. Si la transcripción longitud es menos que 100nt, aumentar el Tiempo de reacción a 4-8 yo.
| Componente | Volumen (μL) | Concentración final |
| ARNasa Agua gratis | Arriba a 20 μl | / |
| ATP (100 mM) | 1 | 5 mm |
| Cable UTP (100 mM) | 1 | 5 mm |
| CTP (100 mM) | 1 | 5 mm |
| GTP (100 mM) | 0,2 | 1 milimolargo |
| LZCap GG(3'Acm) (50 mm) | 1.6 | 4 mm |
| 10×Transcripción Buffer | 2 | 1 × |
| Lineal ADN | 1 μg | 50 ng/μL |
| SP6 Enzima Mezcla | 2 | / |
| Volumen final | 20 μl | |
Notas:
1) El SP6 enzima mezclamos nosotros recomendado a usado es MEGAscries® Juego (AM1330).
2) LZCap GG(3'Acm) es adecuado para el vector de transcripción del promotor SP6 con 5 secuencias iniciadas 'GG 3', cual necesita tener en cuenta al construir el vector.
3) El reactivos, consumibles y contenedores usado en el experimento son gratis oF ARNasa contaminación.
4) Él es Recomendado para utilizar un linealizado Temperatura del ADNtarde para la transcripción.
5) Cuando modificado Los nucleótidos eran usado en lugar de tipo salvaje nucleótidos, el final Concentraciónción de el La reacción fue sin alterar.
6) Modificado N1-Me-pUTP poder ser usado en lugar de tipo salvaje UTP. El modificaciónificado N1-Me-pUTP reduce la inmunogenicidad de ARNm. Henovcom poder también proporcionar modificado nucleótido N1-Me-pUTP (Gato. No.: (HN1002).
7) Si el PCR proconducto es usado como La transcripción iniciación ADN plantilla, el cantidad de ADN plantilla poder ser reducido por medio.
Almacenamiento
Este producto puede almacenarse a -25~-15 ℃ durante dos años.
Precauciones
- Para su seguridad y salud, utilice equipo de protección personal (EPP), como batas de laboratorio y guantes desechables, cuando trabaje con este producto.
- Sólo para uso de investigación.
Preguntas frecuentes
1. ¿Cómo se diseña el LZCap?
Las enzimas tienen un reconocimiento relativamente "específico" de los sustratos. Por lo tanto, al diseñar una nueva estructura de tapa, por un lado, necesitamos modificaciones estructurales novedosas para fines de patente, pero por otro lado, nos esforzamos por mantener la similitud con las estructuras naturales/conocidas tanto como sea posible. La estructura natural tiene una ribosa 3' OH, que se puede modificar (por ejemplo, metilación). Con base en esta consideración, elegimos agregar un carbono en la posición 3' para la novedad de la patente, seguido de un NH para imitar el enlace de hidrógeno del OH, y luego un grupo acetilo para reducir la basicidad del NH y mejorar su capacidad de enlace de hidrógeno. La actividad de LzCap es mejor que el metilatogorra natural ed, posiblemente debido al aumento de los enlaces de hidrógeno. En comparación con los grupos metilo y metoxi, el grupo acetilamino también puede aumentar las interacciones de van der Waals entre el sustrato (cap) y el factor iniciador (enzima).
2.¿Es estable el grupo acetilamino?
El grupo acetilamino ya es suficientemente estable. Es mucho más estable que la posición 7-metilada y el enlace fosfodiéster, que son las partes menos estables del casquete.
Póngase en contacto con nosotros para obtener más detalles sobre la licencia de LZCap.
Pago y seguridad
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Consulta
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Preguntas frecuentes
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