El kit de clonación en un solo paso Hieff Clone™ Universal II es un kit de clonación recientemente mejorado.

El clon 2× Hieff Clone™ de segunda generación cuidadosamente optimizado Universal II Enzyme Premix combina la enzima recombinante y el tampón necesarios para la reacción recombinante con la adición de un potenciador recombinante único para mejorar significativamente la eficiencia de la clonación recombinante.

El kit puede ser dirigido a clonar productos de PCR a cualquier sitio de cualquier vector, compatible con productos de PCR no purificados, productos de PCR recuperados directamente, baja concentración de productos recuperados de caucho, este producto puede volver a ensamblar el contenido de GC del brazo homólogo del 30%-70% del fragmento de unión. El vector se linealizó completamente y se introdujeron secuencias homólogas del extremo del vector linealizado de 15-25 pb en el extremo 5' de los cebadores de PCR positivo e inverso del fragmento insertado, de modo que los extremos 5' y 3' de los productos de PCR del fragmento insertado tenían exactamente la misma secuencia correspondiente a los dos extremos del vector linealizado, respectivamente. Bajo la acción de la enzima recombinante, la reacción recombinante del producto de PCR y el vector linealizado se puede completar en tan solo 5 min a 50 ℃. La tasa positiva de clonación puede alcanzar más del 95%.

Características

Simple: Clona hasta seis fragmentos de ADN en una sola reacción.

Flexible: Las pautas de diseño permiten el ensamblaje en cualquier vector de su elección.

Eficiente: Eficiente para la ligadura de uno a siete fragmentos.

Aplicaciones

Rápido Clonación: permite unir sin problemas múltiples fragmentos de ADN superpuestos en una reacción isotérmica de un solo paso que dura entre 5 y 50 minutos.

Clonación dirigida; Mutagénesis dirigida al sitio.

Presupuesto

Componentes

Almacenamiento

Este producto debe almacenarse a -25~-15℃ durante 1 años.

Cifras

Ffigura 1. Se conectaron 10 ng de fragmentos individuales de bajo aporte en el estado receptivo de no reanimación del sistema pequeño de 6 μL. Los resultados mostraron que 10923ES tuvo un mejor desempeño que los productos de la competencia, con una alta eficiencia de conexión, más colonias y una tasa positiva del 100%. AB: Placa Clony. La relación molar del transportador (10 kb) al fragmento de inserción (1 kb) fue de 1:2. C: Mapa de electroforesis identificado por PCR del fragmento de inserción, M: YEASEN 10505ES.

Figura 2. Se clonaron seis fragmentos (una longitud total de 7,6 kb) en un plásmido de 11,6 kb. Los resultados mostraron que 10923ES tuvo un mejor rendimiento que los productos de la competencia, con más colonias y una tasa positiva del 100%. AB: Placa de colonias. La relación molar del transportador (11,6 kb) con los fragmentos de inserción fue de 1:2. C: Análisis electroforético del fragmento de inserción, M: YEASEN 10505ES. Entrada de plásmido:200 ng/20 µL, 50°C, 50 minutos.

Citas y referencias relacionadas:

[1] Zhang H, Shao S, Zeng Y, et al. La separación de fases reversible de HSF1 es necesaria para una respuesta transcripcional aguda durante el choque térmico. Biología celular natural. 2022;24(3):340-352. (SI:28.824)

[2] Xu Y, Yu Q, Wang P, et al. Un degradador selectivo de c-Myc de moléculas pequeñas hace retroceder potencialmente los tumores letales con sobreexpresión de c-Myc. Ciencia avanzada (Vivir). 2022;9(8):e2104344. (SI:16.806)

[3] Guan B, Jiang YT, Lin DL, Lin WH, Xue HW. El ácido fosfatídico suprime la autofagia a través de la inhibición competitiva al unirse a las proteínas GAPC (gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa) y PGK (fosfoglicerato quinasa) [publicado en línea antes de su impresión, 15 de marzo de 2022]. Autofagia. 2022;1-15. (SI:16.016)

[4] He X, Li Y, Chen Q, et al. La O-GlcNAcilación y la estabilización de SIRT7 promueven la progresión del cáncer de páncreas al bloquear la interacción SIRT7-REGγ [publicado en línea antes de su impresión, 14 de abril de 2022]. Diferencias entre muerte celular. 2022;10.1038/s41418-022-00984-3.(SI:15.828)

[5] Zhou T, Zhu X, Ye Z, et al. La variante de riesgo potenciador del lupus provoca una desregulación de IRF8 a través de la maquinaria cooperativa de metilación del ADN y del lncRNA. Comunidad Nacional. 2022;13(1):1855. Publicado el 6 de abril de 2022. (SI:14.919)

[6] Li T, Chen X, Qian Y, et al. Un dispositivo optogenético sintético basado en BRET para la expresión pulsátil de transgenes que permite la homeostasis de la glucosa en ratones. Comunidad Nacional. 2021;12(1):615. Publicado el 27 de enero de 2021. (SI:14.919)

[7] Wu P, Zhang T, Liu B, et al. La mecano-regulación de las conformaciones de péptido-MHC clase I determina el reconocimiento del antígeno TCR. Célula Mol. 2019;73(5):1015-1027.e7. (SI:14.548)

[8] Xiong L, Liu S, Chen S, et al. Un nuevo tipo de sistema antiviral basado en fosforotioación del ADN en arqueas. Comunidad Nacional. 2019;10(1):1688. Publicado el 11 de abril de 2019. (SI:11.878)

[9] Jiang L, Wang Y, Xia A, et al. Una variante natural del polimorfismo de un solo nucleótido en la sulfito reductasa influye en la asimilación de azufre en el maíz. Nuevo Phytol. 2021;232(2):692-704. (SI:10.152)