Descripción
Hifair™ El kit de síntesis de ADNc de primera hebra AdvanceFast (sin colorante) es un kit de transcripción inversa rápida desarrollado en base a Hifair™ Kit de síntesis de ADNc de primera hebra (sin colorante), adecuado para experimentos de amplificación por PCR y RT-qPCR. Comparado con el Hifair™ Kit de síntesis de ADNc de primera cadena (sin colorante) que ofrece tasas de detección estables, especificidad y garantía de rendimiento, con un tiempo total de transcripción inversa potencialmente reducido a menos de 6 minutos, acortando significativamente la duración experimental.
El kit incluye una mezcla digestora de ADN genómico, que puede eliminar la contaminación del ADN genómico que queda en la plantilla de ARN, lo que garantiza resultados posteriores más fiables. El kit proporciona dos tipos de cebadores de síntesis de ADNc: cebadores aleatorios N6 y oligo (dT)18Los usuarios pueden elegir entre los primers aleatorios N6, Oligo (dT)18, o cebadores específicos de genes como cebadores de transcripción inversa según sus necesidades. El producto de ADNc monocatenario sintetizado se puede utilizar directamente para reacciones de PCR o qPCR posteriores.
Presupuesto
| Cat.No. | 11150ES10 / 11150ES60 |
| Tamaño | 10 toneladas/100 toneladas |
Componentes
| Componentes No. | Nombre | 11150ES10 | 11150ES60 |
| 11150-A | 4× Hifair™ AdvanceFast SuperMix (sin colorante) | 50 μl | 500 microlitros |
| 11150-B | Mezcla digestora de 5 gDNA | 20 μL | 200 μL |
| 11150-C | Cebadores aleatorios (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-D | Oligonucleótido d(T)18 Cebadores (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-E | Agua libre de ARNasa | 200 μL | 2×1 ml |
Almacenamiento
Este producto debe almacenarse a -25~-15℃ durante 1 año.
Instrucciones
- Si el experimento requiere la eliminación de ADN genómico residual
1) Digestión del ADN
En un tubo de centrífuga sin ARNasa, prepare la siguiente mezcla y pipetee suavemente para mezclar bien. Incube a 42 ℃ durante 2 minutos.
| Componentes | Volumen (μL) |
| Agua libre de ARNasa | Hasta 10 μL |
| Mezcla de digestor de ADN genómico 5× | 2 μL |
| ARN total* | 10 pg-5 μg |
| o ARNm* | 10 pg-500 ng |
* Se recomienda que la cantidad de ARN total que se introduzca no supere los 2 μg. Si el nivel de expresión del gen diana es bajo, la cantidad de ARN total que se introduce se puede aumentar hasta un máximo de 5 μg.
2) Preparación del sistema de reacción de transcripción inversa (sistema de 20 μL)
| Componentes | Volumen (μL) |
| La solución de reacción del paso anterior. | 10 μl |
| 4×Hifair™ AdvanceFast SuperMix (sin colorante) | 5 μL |
| Oligonucleótido d(T)18 Cebadores (50 μmol/L)** | 2 μL |
| o cebadores aleatorios (*para qPCR) (50 μmol/L)** | o 2 μL |
| Agua libre de ARNasa | Hasta 20 μL |
* La cantidad de cebadores se puede ajustar según la cantidad de plantilla de entrada. Si el producto de transcripción inversa se utiliza para experimentos de PCR cuantitativa, se pueden agregar cebadores aleatorios al sistema según la cantidad recomendada.
** Se recomienda agregar primero 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (sin colorante), mezclar bien y luego agregar el cebador de transcripción inversa para garantizar que el cebador no se vea afectado por el digestor de gDNA.
3) Configuración del procedimiento de transcripción inversa
| Temperatura. | Tiempo |
| 55℃* | 5 minutos** |
| 85℃ | 5 segundos |
* Para plantillas con alto contenido de GC o plantillas complejas, la temperatura de transcripción inversa se puede aumentar a 60 ℃.
** Este producto puede sintetizar secuencias de ADNc de menos de 14 kb. Si necesita productos de ADNc más largos, puede extender el tiempo de transcripción inversa según corresponda.
- Si el experimento no requiere la eliminación de ADN genómico
1) Preparación del sistema de reacción de transcripción inversa (sistema de 20 μl)
| Componentes | Volumen (μL) |
| 4×Hifair™ AdvanceFast SuperMix (sin colorante) | 5 μL |
| Oligonucleótido d(T)18 Cebadores (50 μmol/L)** | 2 μL |
| o cebadores aleatorios (*para qPCR) (50 μmol/L)** | o 2 μL |
| ARN total* | 10 pg -5 μg |
| o ARNm | 10 pág. - 500 ng |
| Agua libre de ARNasa | Hasta 20 μL |
* Se recomienda que la cantidad de ARN total que se introduzca no supere los 2 μg. Si el nivel de expresión del gen diana es bajo, la cantidad de ARN total que se introduce se puede aumentar hasta un máximo de 5 μg.
** La cantidad de cebadores se puede ajustar según la cantidad de plantilla de entrada. Si el producto de transcripción inversa se utiliza para experimentos de PCR cuantitativa, se pueden agregar cebadores aleatorios al sistema según la cantidad recomendada.
2) Configuración del procedimiento de transcripción inversa
| Temperatura. | Tiempo |
| 55℃* | 5 minutos** |
| 85℃ | 5 segundos |
* Para plantillas con alto contenido de GC o plantillas complejas, la temperatura de transcripción inversa se puede aumentar a 60 ℃.
** Este producto puede sintetizar secuencias de ADNc de menos de 14 kb. Si necesita productos de ADNc más largos, puede extender el tiempo de transcripción inversa según corresponda.
Notas
- Todas las operaciones deben realizarse en hielo y deben realizarse de manera que se evite la contaminación por ARNasa.
- Este producto es solo para uso de investigación.
- Por favor, trabaje con bata de laboratorio y guantes desechables, para su seguridad.
Documentos:
Pago y seguridad
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Consulta
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Preguntas frecuentes
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