Descripción
Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix para qPCR representa una iteración mejorada del Hifair™ Ⅲ SuperMix de síntesis de ADNc de primera hebra para qPCR (gDNA Digester Plus). Está diseñado para satisfacer las demandas de llevar a cabo reacciones de transcripción inversa y eliminación del genoma en un solo tubo. Además, agiliza el proceso de reacción, reduce significativamente el tiempo de reacción y aumenta el rendimiento del producto de transcripción inversa. El SuperMix de RT de un solo paso 4×Hifair® AdvanceFast incluye todos los reactivos esenciales para la reacción de transcripción inversa. Durante la reacción, solo necesita complementarlo con la mezcla de eliminación de ADNc, ARN molde y agua para sintetizar de manera eficiente la hebra inicial de ADNc y, al mismo tiempo, eliminar la contaminación del ADN genómico. Este producto es adecuado para la transcripción inversa de plantillas de ARN intrincadas y demuestra ser muy eficaz para la transcripción inversa que involucra cantidades escasas de plantillas y genes de bajo número de copias.
El producto de transcripción inversa generado por este producto en particular es totalmente compatible con los métodos de qPCR basados en sonda y en colorante. Para qPCR basada en sonda, recomendamos utilizar la mezcla maestra para qPCR multiplex Hieff Unicon® Universal TaqMan (Cat#11211), mientras que para qPCR basada en colorante, la mezcla maestra Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green (Cat#11184) es la opción recomendada para el análisis de expresión génica de alto rendimiento.
Sin embargo, es importante tener en cuenta que el producto de transcripción inversa generado por este producto no es adecuado para aplicaciones posteriores, como la amplificación de fragmentos largos. Si necesita una transcripción inversa eficiente para estos fines, le recomendamos utilizar el kit de síntesis de ADNc de primera hebra Hifair® AdvanceFast (Cat. n.° 11149, Cat. n.° 11150).
Características
- 5 minutos de RT
-
Digestión RT y gDNA integrada en un solo tubo
Aplicaciones
- PCR cuantitativa en tiempo real
- Síntesis de ARN antisentido
Presupuesto
| Tipo de producto final | ADNc (primera cadena) |
| Método de PCR | PCR en tiempo real |
| Tipo de reactivo | Transcripción inversa |
| Tipo de muestra | ARN |
| Temperatura óptima de reacción | 37℃ |
| Transcriptasa inversa | M-MLV |
Componentes
| No. | Nombre | 11151ES10 (10T) | 11151ES60 (100 toneladas) |
| 11151-A | 4×Hifair® RT SuperMix de un solo paso AdvanceFast | 50 μl | 500 μL |
| 11151-B | Mezcla removedora de gDNA | 10 microlitros | 100 μl |
| 11151-C | Agua libre de ARNasa | 1 ml | 2×1 ml |
Envío y almacenamiento
El producto se envía con hielo seco y se puede almacenar a una temperatura de -15℃ a -25℃ durante 12 meses.
Instrucciones de uso
Deshielo los componentes 11151-A/B/C en hielo, agite suavemente y mezcle bien cada componente del reactivo. Luego, ensamble lo siguiente componentes dentro de un tubo libre de ARNasa:
| Componente | Volumen (μL) |
| Libre de ARNasa Agua | Hasta 20 μL |
| 4×Hifair® RT SuperMix de un solo paso AdvanceFast | 5 μL |
| Mezcla removedora de gDNA | 1 μl |
| ARN total | 10 pg-5 μg* |
| o ARNm | 10 pg-500 ng* |
Tabla 1: Preparación de la reacción
*Recomendamos no exceder los 2 μg como cantidad total de ARN de entrada. En caso de baja abundancia de expresión del gen objetivo, la cantidad total de ARN de entrada puede incrementarse hasta un máximo de 5 μg.
| Temperatura | Tiempo |
| 37℃ | 5 minutos* |
| 85℃ | 30 segundos |
Tabla 2: Protocolos de reacción
*Este proceso abarca tanto la transcripción inversa como la digestión del ADNg.
El producto de transcripción inversa es adecuado para su uso inmediato en reacciones de PCR cuantitativa o puede almacenarse a -20 °C durante un período breve. Para un almacenamiento prolongado, recomendamos dividirlo en alícuotas y almacenarlo a -80 °C para evitar múltiples ciclos de congelación y descongelación.
Precauciones:
1. Todos los procedimientos deben realizarse en hielo, con el máximo cuidado para evitar la contaminación por ARNasa.
2. Garantice su seguridad y bienestar utilizando una bata de laboratorio y guantes desechables.
3. Este producto está destinado únicamente a fines de investigación científica y no debe utilizarse con ningún otro fin.
Pago y seguridad
Su información de pago se procesa de forma segura. No almacenamos detalles de la tarjeta de crédito ni tenemos acceso a la información de su tarjeta de crédito.
Consulta
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Preguntas frecuentes
El producto es solo para fines de investigación y no está destinado a uso terapéutico o diagnóstico en humanos o animales. Los productos y el contenido están protegidos por patentes, marcas comerciales y derechos de autor propiedad de Yeasen Biotechnology. Los símbolos de marca comercial indican el país de origen, no necesariamente el registro en todas las regiones.
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