Hola feriado^™ El kit Advanced One Step RT-qPCR es un kit para cuantificación de fluorescencia basado en el colorante SYBR Green I. Mediante el uso de iniciadores específicos de genes, las reacciones de transcripción inversa y qPCR se completan en un solo tubo, lo que elimina la necesidad de operaciones repetidas de apertura de tapas y pipeteo, lo que mejora enormemente la eficiencia del ensayo y reduce el riesgo de contaminación. Para las muestras de ARN, el kit emplea Hifair resistente al calor.^™ V Transcriptasa inversa para una síntesis eficiente de ADNc y UNICON^™ Polimerasa de ADN Taq HotStart para amplificación cuantitativa. Con el sistema de tampón optimizado, la sensibilidad del kit puede ser de hasta 0,1 pg para dianas altamente expresadas y de hasta 1 pg para dianas moderadamente expresadas, y el kit también es adecuado para la amplificación y cuantificación de muestras de ADN. El kit es adecuado para la amplificación y cuantificación de muestras de ADN. Permite la detección y cuantificación sensible de ácidos nucleicos de diferentes muestras de plantas y animales, células y microorganismos.

Presupuesto

Componentes

Almacenamiento

Este producto debe almacenarse a una temperatura entre -25 y -15 ℃. lejos de luz para 1 año.

Instrucciones

1. Reacción sistema configuración*****

* Los modelos de Rox bajo y los modelos sin corrección de Rox se preparan directamente de acuerdo con el sistema de reacción anterior. Cuando se utiliza el modelo de Rox alto, agregue Hieff™ SP High Rox a 2 x Hifair™ Advanced SG Buffer a 1:250 v/v, mezcle bien y centrifugue. El modelo de Rox alto 2x Hifair™^™ El búfer SG avanzado con Hieff™ SP High Rox no afecta el uso de los modelos de corrección Low Rox y No Rox.

** La concentración final del cebador fue de 0,2 μmol/L, que también podría ajustarse entre 0,1 y 1 μmol/L según corresponda.

*** El reactivo es extremadamente sensible, con ARN total en el rango de 1 pg-1 μg, y las pruebas de muestras humanas mostraron un aporte óptimo de 1 pg-100 ng, controlando un valor Ct general en el rango de 15-30 según corresponda.

**** Se recomienda utilizar 20 μL o 50 μL para garantizar la validez y reproducibilidad de la amplificación del gen objetivo.

***** Realice la preparación en una mesa de trabajo ultralimpia y utilice puntas y tubos de reacción libres de residuos de nucleasa; se recomiendan puntas con cartuchos de filtro. Evite la contaminación cruzada y la contaminación por aerosoles.

2) Programa de reacción

*La temperatura de transcripción inversa se puede seleccionar entre 50 y 55 °C según las necesidades experimentales. En el caso de las muestras de ADN, se puede omitir el proceso de transcripción inversa.

** En casos especiales, la temperatura de recocido/extensión se puede ajustar de acuerdo con el valor Tm del cebador; se recomienda 60 °C.

3) Modelo aplicable

Modelos de instrumentos que no requieren calibración Rox:

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Ciencias Aplicadas de Roche: LightCycler 480, LightCycler2.0, Lightcycler 96;

Thermo Scientific: Ciclador PikoReal; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR;

Modelos aplicables de Low Rox:

ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 y 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Estratagema MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Modelos aplicables de alto Rox*:

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Rápido, StepOne, StepOne Plus.

* Para los modelos High Rox, tenga en cuenta que Hieff™ SP High Rox debe agregarse proporcionalmente a 2 x Hifair^™ Buffer SG avanzado antes de usar.

Notas

1. Este producto es solo para uso de investigación.
2. Por favor, trabaje con bata de laboratorio y guantes desechables, para su seguridad.

Documentos:

Manuales