La luciferasa de luciérnaga es una proteína con un peso molecular de aproximadamente 61 kDa, que puede catalizar la oxidación de luciferina a oxiluciferina en presencia de ATP, iones de magnesio y oxígeno. Emite bioluminiscencia con una longitud de onda de alrededor de 560 nm. La luciferasa de renilla es una proteína con un peso molecular de aproximadamente 36 kDa, que puede catalizar la oxidación de coelenterazina a coelenteramida en presencia de oxígeno, y emite una longitud de onda de 480 nm durante el proceso de oxidación. sobre la bioluminiscencia. Ambas bioluminiscencias se pueden medir mediante quimioluminiscencia. El principio de detección se muestra en la figura 1:

Figura 1: Esquema del ensayo de luciferasa de luciérnaga y renilla

Por lo general, el 5'UTR o promotor del gen objetivo se clona aguas arriba de la luciferasa de luciérnaga, o el 3'UTR se clona aguas abajo de la luciferasa de luciérnaga, y el efecto de regulación transcripcional del promotor o elemento regulador se detecta detectando la cantidad de luciferasa de luciérnaga. La luciferasa de Renilla se utilizó como control interno para eliminar diferencias en el número de células, la eficiencia de la transfección, etc. El kit de ensayo del gen reportero de luciferasa dual utiliza luciferina como sustrato para detectar la actividad del gen reportero de la luciferasa de luciérnaga, y luego utiliza coelenterazina como sustrato para detectar la luciferina de Renilla mientras se extingue la reacción de fluorescencia. Actividad del gen reportero enzimático. El kit tiene las características de alta sensibilidad.

Características

Capacidad de lisis mejorada: capaz de lisar completamente la gran mayoría de tipos de células.

Señal más fuerte: detección precisa de la expresión del promotor débil.

Mayor sensibilidad: detectable hasta 10-20 picomoles de moléculas de luciferasa.

Rango lineal más amplio: el rango de detección lineal supera los 8 órdenes de magnitud de concentración de enzima.

Aplicaciones

Verificación de interacciones de miRNA con 3'UTR de genes diana

Verificación de interacciones lncRNA-miRNA

Verificación de la regulación de factores de transcripción en la región promotora

Análisis de la vía de señalización

Análisis de la actividad de SNP

Presupuesto

Componentes

Envío y almacenamiento

Los productos del kit de ensayo del gen reportero de luciferasa dual deben almacenarse a -15 ℃ ~-25℃ para 1 año.

Cifras

Figura 1. YEASEN (Gato#: 11402) tiene una intensidad de fluorescencia comparable a la de Brand P.

Cifra2. YFACILITAR (Gato#: 11402) Los reactivos de detección interactúan con la luciferasa para lograr una intensidad de luminiscencia óptima. Después de la adición del sustrato de luciferasa de Renilla, la bioluminiscencia de la luciferasa de luciérnaga se extingue: se puede extinguir prácticamente por completo.

Documentos:

Hoja de datos de seguridad

11402 MSDS HB220209 ES.PDF

Manuales

11402 Manual HB241230 ES.pdf

Citas y referencias:

[1] Wang H, Yang J, Cai Y, Zhao Y. Los macrófagos suprimen la reprogramación cardíaca de fibroblastos in vivo a través de un circuito autoestimulante intercelular mediado por IFN [la corrección publicada aparece en Protein Cell. 2024 2 de diciembre;15(12):938. doi: 10.1093/procel/pwae038]. (SI=21,1)

[2] Zhao L, Zhu Y, Tao H, et al. La ailantona mejora la fibrosis pulmonar al suprimir la activación de MEOX1 dependiente de JUN. Acta Pharm Sin B. 2024;14(8):3543-3560. doi:10.1016/j.apsb.2024.04.013(SI=14,5)

[3] Wu X, Chen S, Zhang Z, et al. Una vía de ARNm de interferencia viral de ARN pequeño en la planta hospedadora modula la tolerancia a la sequía inducida por virus al mejorar la autofagia. Plant Cell. 2024;36(9):3219-3236. doi:10.1093/plcell/koae158(SI=12,6)

[4] Xuan H, Li Y, Liu Y, et al. El dominio H1/H5 contribuye a la separación de fases de OsTRBF2 y a la represión génica durante el desarrollo del arroz. Plant Cell. 2024;36(9):3787-3808. doi:10.1093/plcell/koae199(SI=12)

[5] Han Y, Hu Q, Gong N, et al. La variación natural en MORE GRAINS 1 regula el número y el peso de los granos en el arroz. J Integr Plant Biol. 2024;66(7):1440-1458. doi:10.1111/jipb.13674(SI=11,4)

[6] Pan M, Luo M, Liu L, et al. EGR1 suprime el crecimiento del carcinoma hepatocelular y la glucólisis aeróbica mediante la regulación negativa de la transcripción de PFKL. J Exp Clin Cancer Res. 2024;43(1):35. Publicado el 29 de enero de 2024. doi:10.1186/s13046-024-02957-5(SI=11,3)

[7] Hao X, Wang S, Fu Y, et al. El módulo WRKY46-MYC2 desempeña un papel fundamental en las respuestas antiherbívoras inducidas por E-2-hexenal al promover la acumulación de flavonoides. Plant Commun. 2024;5(2):100734. doi:10.1016/j.xplc.2023.100734(SI=10,5)

[8] Wu J, Li P, Li M, et al. El estrés térmico afecta la terminación del meristemo floral y el desarrollo del fruto al afectar la cascada BR-SlCRCa en el tomate. Plant Commun. 2024;5(4):100790. doi:10.1016/j.xplc.2023.100790(SI=10,5)

[9] Chen L, Xia S, Wang F, et al. La ablación de NR1D1 inducida por la metilación de m6A altera el reloj circadiano de las células madre hematopoyéticas y promueve la fibrosis hepática. Pharmacol Res. 2023;189:106704. doi:10.1016/j.phrs.2023.106704(SI=10,33)

[10] Niu MX, Feng CH, He F, et al. El módulo miR6445-NAC029 regula la tolerancia a la sequía regulando la expresión de la glutatión S-transferasa U23 y la eliminación de especies reactivas de oxígeno en Populus. New Phytol. 2024;242(5):2043-2058. doi:10.1111/nph.19703(SI=9,4)

[11]Huang T, You Q, Huang D, et al.Una retroalimentación positiva entre PDIA3P1 y OCT4 promueve las propiedades de las células madre cancerosas del carcinoma de células escamosas esofágico. Cell Commun Signal. 2024;22(1):60. Publicado el 22 de enero de 2024. doi:10.1186/s12964-024-01475-3(SI=8,4)

[12]Wang S, Liu Y, Hao X, Chen Y, Wang Z, Shen Y. Mejora de las defensinas de las plantas en un arbusto del desierto: exploración de una vía reguladora de AnWRKY29. Int J Biol Macromol. 2024;270(Pt 1):132259. doi:10.1016/j.ijbiomac.2024.132259(SI=8,2)