Sonda de depleción de ARNm de globina (humana) Está diseñado para eliminar el ARNm de globina humana. Puede eliminar eficazmente el ARNm de globina de adultos, bebés y embriones.nico Fuentes de luz, incluidas HBA1/2, HBB, HBD, HBM, HBG1/2, HBE1, HBQ1 y HBZ. Este producto se utiliza con Hieff NGS^MT. Kit de depleción de ARNr MaxUp (humano/ratón/rata) (Yeasen n.º 12253) para eliminar de forma eficaz el ARNr y el ARNm de globina del ARN total. Este kit es adecuado tanto para muestras de ARN intactas como degradadas. Las muestras de ARN después de la eliminación del ARNr y el ARNm de globina se pueden utilizar para el análisis de secuenciación de alto rendimiento de ARNm y ARN no codificante, lo que mejora significativamente la proporción de datos válidos en los resultados de secuenciación y la síntesis de ADNc u otras aplicaciones posteriores.

Aplicación del producto

Adecuado para muestras de ARN humano total de 100 ng~1 μg, recurso de sangre de ratón y rata, y para muestras de ARN tanto intactas como parcialmente degradadas.

Componentes del producto

Envío y almacenamiento

Todos los componentes se envían con hielo seco y pueden almacenarse a -20 °C durante un año..

Cifra

Se eliminó el ARNr y se eliminó el ARNr y la globina de un total de 500 ng y 100 ng de sangre humana, respectivamente. Después de la construcción y secuenciación de la biblioteca, se comparó el contenido de ARNm de globina.

Precauciones

1. Utilice consumibles que no contengan ARNasa y limpie el área experimental con regularidad. Se recomienda utilizar RNAZap de ThermoFisher.^MT. Spray de eliminación de ácidos nucleicos de alta eficiencia para eliminar la contaminación por ARNasa.

2. La muestra de ARN debe estar libre de contaminación por ADN genómico. Si queda ADN genómico en la muestra, debe digerirse con DNasa I y purificarse antes de su uso.

3. El volumen máximo de entrada de la muestra de ARN es de 10 μL. Si el volumen de la muestra es grande, se puede concentrar primero.

4. Por su seguridad y salud, utilice bata de laboratorio y guantes desechables durante la operación.

5. ¡Solo para uso en investigación!

Instrucciones

1. Hibridación de sondas con ARN

1.1 Diluir 10 ng–1 μg de ARN total con agua libre de nucleasas hasta un volumen final de 10 μL en un tubo de PCR. Mantener el ARN con hielo.

1.2 Armar La siguiente reacción de hibridación de ARN/sonda con hielo según la Tabla 1.

Tabla 1 Reacción de hibridación ARN/sonda

1.3 Mezcle bien pipeteando suavemente hacia arriba y hacia abajo al menos 10 veces. Centrifugue brevemente el tubo en una microcentrífuga para recoger el líquido de los lados del tubo.

1.4 Coloque el tubo en un termociclador y ejecute el siguiente programa en la Tabla 2 con la tapa calentada ajustada a 105 °C.

Tabla 2 Programa de reacción de hibridación ARN/sonda

2. Digestión con ARNasa H

2.1 Ensamble la siguiente reacción de digestión con ARNasa H con hielo según la Tabla 3.

Tabla 3 Reacción de digestión con ARNasa H

2.2 Mezcle bien pipeteando suavemente hacia arriba y hacia abajo al menos 10 veces. Centrifugue brevemente el tubo en una microcentrífuga para recoger el líquido de los lados del tubo.

2.3 Coloque el tubo en un termociclador y ejecute el siguiente programa: tapa 50°C; 37ºC, 30 min; 4°C, mantener.

3. DNasa I Digestión

3.1 Monte la siguiente reacción de digestión con DNasa I en hielo de acuerdo con la Tabla 4.

Tabla 4 Reacción de digestión con DNasa Ⅰ

3.2 Mezcle bien pipeteando suavemente hacia arriba y hacia abajo al menos 10 veces. Centrifugue brevemente el tubo en una microcentrífuga para recoger el líquido de los lados del tubo.

3.3 Coloque el tubo en un termociclador y ejecute el siguiente programa: tapa abierta; 37ºC, 30 min; 4°C, mantener.

4. Purificación del ARN

4.1 Equilibrar el Hieff NGS^MT.Deje el limpiador de ARN (Cat. n.° 12602) a temperatura ambiente y resuspenda las perlas completamente mediante agitación en vórtex antes de usar.

4.2 Agregar 110 µL (2,2×) Agregue perlas a la solución de ARN del paso 3.3 y mezcle bien pipeteando hacia arriba y hacia abajo al menos 10 veces.

4.3 Incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos para unir el ARN a las perlas.

4.4 Coloque el tubo sobre un soporte magnético para separar las perlas del sobrenadante. Cuando la solución esté transparente (aproximadamente 3 minutos), deseche el sobrenadante. Tenga cuidado de no tocar las perlas con las puntas de la pipeta.

4.5 Mantenga el tubo en el soporte magnético. Agregue 200 µL de etanol al 80 % recién preparado al tubo. Incube a temperatura ambiente durante 30 segundos y luego deseche el sobrenadante. Tenga cuidado de no tocar las perlas con las puntas de la pipeta.

4.6 Repita el paso 4.5 una vez para un total de dos lavados.

4.7 Eliminar el etanol residual con 10 µL - Puntas de pipeta. Mantenga el tubo sobre el soporte magnético y deje secar las perlas al aire durante hasta 5 minutos con la tapa abierta.

4.8 Retire el tubo del soporte magnético. Eluya el ARN de las perlas agregando 11 μL de agua libre de nucleasas. Mezcle bien pipeteando hacia arriba y hacia abajo al menos 10 veces y centrifugue brevemente el tubo.

4.9 Incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. Colocar el tubo sobre el soporte magnético hasta que la solución quede transparente (aproximadamente 3 minutos).

4.10 Transfiera 10 µL del sobrenadante a un tubo libre de nucleasas.

Nota: Si necesita detenerse en este punto, las muestras se pueden almacenar a –80 °C.